首页 > 文献资料
-
珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化的研究
目的:观察珠子参对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖抑制和诱导分化作用.方法:采用HL-60细胞株体外培养,MTT法观察不同作用时间的直接细胞毒作用;细胞涂片观察细胞形态学改变;试剂盒检测酸性磷酸酶(ACP)含量.结果:珠子参血清和珠子参煎液均有明显的细胞毒作用,72 h时抑制率分别为31.27%、34.23%,与5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用后,达72.9%、75.22%.作用72 h后ACP活性高于对照组,分别为13.6107、16.0122(U/gprot.min)(P＜0.01),细胞形态学观察以中幼粒及晚幼粒为主,分别占36.8%、75.8%,向成熟细胞方向分化.结论:珠子参在体外对HL-60细胞株有细胞毒作用,且能提高5-FU的敏感性而与化疗药物起协同作用;珠子参有诱导HL-60细胞分化的功能.
-
珠子参对S-180荷瘤小鼠抑瘤效应及免疫学机制的研究
目的:观察珠子参对S-180荷瘤小鼠抑瘤效应及免疫学机制.方法:体内实验采用S-180荷瘤Balb/c小鼠模型,以生理盐水为阴性对照,5-FU为阳性对照,观察珠子参煎液对肿瘤生长的抑制作用,LDH释放法检测NK细胞活性,胸腺指数,ELISA试剂盒检测血清IL-2浓度.结果:珠子参体内抑瘤率为38.04%;NK细胞活性为68.23%,高于阴性对照组(P＜0.01);胸腺指数为32.8mg/10g,血清IL-2浓度为12.88±1.76pg/ml,均高于5-FU组(P＜0.01或P＜0.05).结论:[1]珠子参具有一定的体内抑瘤作用;[2]珠子参对荷瘤小鼠有一定的免疫增强作用.
-
珠子参体外诱导人肝癌细胞凋亡效应及机制研究
目的:通过体外实验,观察珠子参诱导人肝癌细胞凋亡效应并初探其分子机制.方法:体外细胞培养采用人肝癌细胞株SMMC-7721,分为对照(BL)组、珠子参(PJ)组、二甲基亚砜(DMSO)组及5-FU组,采用光镜及电镜观察肝癌细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪检测肝癌细胞周期和凋亡率;RT-PCR法检测癌基因c-myc、c-fos和抑癌基因p53、p21表达的变化.结果:光镜下观察到珠子参组肿瘤细胞脱壁,有细胞出芽现象等凋亡形态改变;电镜下观察到珠子参组肿瘤细胞出现凋亡小体;珠子参组可见G0-G1期细胞聚积,阻止了细胞向S期的转换,从而干扰了SMMC-7721细胞在细胞周期中的进程,并引起细胞凋亡,DNA组方图上出现典型的凋亡峰(Apo峰),凋亡率达38.34%;RT-PCR半定量分析珠子参能降低癌基因c-myc表达(P＜0.05)和cfos表达(P＞0.05),增高抑癌基因p53、p21表达(P＜0.05).结论:珠子参能诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡,部分作用机制可能与阻滞细胞停留在G0-G1,降低癌基因c-myc和c-fos表达,增高抑癌基因p53和p21表达有关.
-
珠子参对小鼠H22肝癌抑制作用及机制研究
目的:观察珠子参对小鼠移植性肝癌(H22)的增殖抑制作用及其作用机制.方法:建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察珠子参对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,放免法(RIA)检测血清中TNF-α含量,光镜(HE染色)观察肿瘤细胞生长增殖状态,并在透射电镜下观察肿瘤细胞超微结构形态,流式细胞仪技术(FCM)检测细胞凋亡并进行周期分析.结果:珠子参抑瘤率达44.89%;血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度珠子参组高于正常对照组,而比模型对照组低(P<0.05);光镜观察到珠子参组小鼠肿瘤组织周围有大量的吞噬细胞和淋巴细胞浸润,电镜下可见珠子参组癌细胞胞质浓染,核固缩,线粒体明显减少;FCM分析显示,珠子参各组G0-G1期和S期细胞(%)减少,而G2-M期细胞和凋亡细胞(%)增加.结论:珠子参对H22肝癌小鼠具有良好的抑瘤作用,其作用机制可能与珠子参阻止G2-M期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程,干扰S期DNA合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关;此外珠子参能明显抑制荷瘤小鼠TNF-α水平的异常增高,使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等作用.
-
珠子参药材中皂苷类成分HPLC特征图谱的研究
目的 建立珠子参药材中皂苷类成分HPLC特征图谱,为其质量控制提供依据.方法 采用HPLC法测定珠子参药材中皂苷类成分,色谱柱为Agilent Poroshell 120 C18(4.6 mm×100 mm,2.7μm),乙腈-0.1％磷酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为203 nm,柱温为35℃.结果 通过对8批次珠子参药材中皂苷类成分HPLC特征图谱的研究,确定了14个共有峰,对照品比对指认了其中4个皂苷类成分,分别为人参皂苷Rb1、Ro、竹节参皂苷Ⅳa、人参皂苷Rd;8批珠子参药材中有7批相似度大于0.90.结论 该方法精密度高、重复性强、稳定性好,可用于珠子参药材的质量控制.
-
不同产地珠子参的生药学鉴别和含量测定
目的:对云南、贵州、甘肃产的珠子参药材进行鉴别和含量测定.方法:应用性状、显微及薄层色谱方法对不同产地珠子参药材进行鉴别,显微鉴别方面采用石蜡切片及粉末临时制片进行显微特征观察;采用高效液相色谱法测定了药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量.结果:不同产地珠子参药材形状、颜色和晶体数量等特征具有一定差异,云南、贵州和甘肃产3个批次药材的含量分别为5.55％、1.98％和1.96％.结论:3个产地的珠子参药材的性状、显微特征及竹节参皂苷Ⅳa的含量差异较大,其中以云南产药材的质量较好.
-
珠子参的HPLC指纹图谱及模式识别
目的:研究珠子参药材HPLC指纹图谱的模式识别方法.方法:利用HPLC方法,以全国7个省份珠子参药材为研究对象,对12批药材进行了指纹图谱分析,同时运用聚类分析及主成分分析对其进行模式识别研究.结果:12批珠子参药材的指纹图谱有8个特征共有峰,并指认了2个色谱峰.通过聚类分析和主成分分析将12批药材分为2类.结论:不同的地域环境和气候差异导致珠子参品质之间的差异,珠子参指纹图谱的模式识别直观、可行,为珠子参的生产和质量控制提供了依据.
-
移植珠子参质量分析研究
目的:建立珠子参的质量分析方法,为珠子参的栽培研究提供科学依据.方法:样品用60%乙醇超声提取40 min,滤过,取续滤液作为供试品溶液;高效液相色谱法测定含量.结果:移植两年的珠子参中竹节参皂苷IVa的平均含量明显高于移植一年的;同一植株珠子参的串珠状根茎不同珠(颗)的根茎中竹节参皂苷IVa含量是不同的,其含量似呈正态分布.结论:本法操作简便,方法稳定性好,灵敏度高,可用于栽培珠子参的质量评价.
-
配伍对珠子参中4个皂苷类成分药代动力学的影响
目的:研究不同配伍对藤珠胃康方中臣药珠子参主要成分在大鼠体内的药代动力学影响,为该复方的研究与开发提供参考.方法:将SD大鼠随机分为珠子参组、珠子参-藤梨根组、珠子参-白术组、珠子参-黄精组、珠子参-三棱组、藤珠胃康方组,灌服给药剂量均为10.0 g·kg-1(按生药量计算),采用HPLC检测0～24 h大鼠血浆中人参皂苷Re,人参皂苷Rb1,人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的血药浓度,流动相乙腈(A)-0.02％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 14 min,19％ ～ 26％A;14～22 min,26％ ～ 29％A;22 ～ 30 min,29％ A;30 ～ 40 min,29％ ～ 35％A;40 ～ 55 min,35％A),检测波长205 nm,运用DAS 3.0软件计算药代动力学参数,比较不同配伍对珠子参中4个指标成分的药动学差异.结果:与珠子参组比较,珠子参-藤梨根组、珠子参-黄精组、珠子参-白术组、珠子参-三棱组中人参皂苷Re,人参皂苷Rb1,人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的药峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0.t)大部分增加,清除率/生物利用度(CL/F)降低;而藤珠胃康方组中上述4个成分的Cmax和AUC0-t增加,CL/F降低.与珠子参组相比,藤珠胃康方中主要成分代谢显著减慢,4个皂苷类成分的血药浓度明显提高.结论:不同配伍会影响珠子参主要药效成分在体内的药代动力学参数,为藤珠胃康方的临床应用提供参考依据.
-
珠子参多糖提取及抗癌活性研究
目的:寻求中药珠子参中多糖成分的有效提取方法,研究其对肝癌移植瘤小鼠肿瘤生长和生存时间的影响.方法:水提醇沉法提取珠子参粗多糖,经活件炭脱色、链霉蛋白酶-Sevag法除蛋白、透析法去除小分子杂质后得到珠子参精制糖.分别建立BALB/c小鼠H22肝癌移植实体瘤模型及腹水瘤模型,将小鼠随机分为3组:对照组,5-氟尿嘧啶组(阳性对照)、珠子参多糖组.给药结束后计算各用药组抑瘤率、生命延长率和胸腺指数,脾指数以及CD4/CD8值.结果:纯化后珠子参多糖质量分数为81.3%.珠子参多糖组体内抑瘤率为34.44%,生命延长率为34.64%;胸腺和脾脏重量指数分别增加了10.0%和26.5%,CD4/CD8值明显升高.结论:所采用的珠子参多糖提取及除杂方法是有效的.珠子参多糖能有效抑制H22肝癌小鼠肿瘤生长,延长实验小鼠的生存时间,增加胸腺、脾脏的重量指数,有效地阻止肿瘤机体免疫器官的萎缩,增强机体的免疫功能,提示珠子参多糖通过多种途径的整合调节作用,显示出了较强抗肿瘤活性.
-
HPLC-QqQ-MS测定珠子参中5种皂苷类的含量
该文采用HPLC-QqQ-MS技术对不同产地珠子参中的5种成分建立含量测定方法.色谱条件为Zorbax XDB-C18 (4.6mm×100 mm,1.8μm),流动相乙腈(含0.1％甲酸)-0.1％甲酸水梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,柱温30℃.质谱条件为正离子检测模式,采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测模式(MRM),定量分析离子分别为人参皂苷Rem/z 203.2,人参皂苷Rg1m/Z 202.9,人参皂苷Rf m/z 365.0,人参皂苷Rd m/z 789.1,人参皂苷Ro m/z 360.9,干燥气流速10L·min-1,干燥气温度300℃,雾化气压力45 psi(1 psi =6.895 kPa),毛细管电压4000V.结果显示5种人参皂苷的含量在一定范围内线性关系良好(r ＞0.9991).人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rd、人参皂苷Ro线性范围分别在3.33～66.60 μg(r =0.999 1),2.83 ～56.54 μg(r =0.999 2),0.32～6.51 μg(r =0.999 2),12.55～251.00 μg(r =0.999 3),0.85～ 16.90 μg(r =0.999 5),范围与色谱峰面积呈良好的线性关系,加样回收率(n=6)均在100.8％ ～ 104.6％,RSD均＜3.0％.该方法简单、准确,重复性好,可用于人参皂苷类成分的含量测定.
关键词： HPLC-QqQ-MS 珠子参 含量测定 皂苷 -
不同产地珠子参中竹节参皂苷Ⅳa含量测定
目的:测定不同产地珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量.方法:高效液相色谱法,色谱柱:Inertsil ODS-sp(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相乙腈-0.2%磷酸(35:65);柱温30℃;流速1.0 mL·min~(-1);检测波长203 nm.结果:对陕西等8省区所产珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量进行测定,其中以陕西眉县样品中竹节参皂苷Ⅳa的质量分数高为7.38%,湖北恩施样品中竹节参皂苷Ⅳa质量分数低为2.17%.结论:不同产地珠子参中竹节参皂苷Ⅳa的含量具有较大差异.
-
珠子参叶化学成分研究
研究珠子参叶的化学成分.采用硅胶,Sephadex LH-20,ODS柱色谱和半制备型高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据分析鉴定了7个化合物的结构5,7-二羟基-8-甲氧基黄酮(1)、人参皂苷Rs2 (2)、西洋参皂苷R1(3)、人参皂苷Rs1(4)、三七皂苷Fe(5)、人参皂苷Rd2(6)和gypenosiden Ⅸ(7).化合物1为首次从人参属植物中分离得到,2～7均为首次从该植物中分离得到.
-
遮阴对珠子参皂苷合成关键酶基因表达和皂苷积累的影响
为研究不同遮阴处理下皂苷合成关键酶表达对珠子参总皂苷合成与积累的影响,以全光照、30％遮阴和50％遮阴3种处理下的盆栽珠子参为材料,分别用实时荧光定量PCR法和紫外分光光度法测定了不同生长时期珠子参叶和根茎中3个关键酶基因(CAS,DS,β-AS)的表达和总皂苷含量.结果表明,在开花期CAS,DS,β-AS均在珠子参地上部分高表达,30％遮阴处理显著抑制了叶中CAS的表达而促进了茎,叶和花中DS,β-AS的表达,推测在此时期皂苷合成的主要部位为叶.整个生长周期内,DS,β-AS的表达与叶中总皂苷含量的变化均呈现出“低—高—低”的趋势,相关系数分析表明,两者之间为正相关关系.遮阴处理下DS,β-AS的总体表达水平和总皂苷含量远高于全光照处理,其中以30％遮阴处理对总皂苷积累的促进作用明显.因此建议在人工栽培珠子参时,采取30％的遮阴处理,以利于珠子参皂苷的积累和品质的提升.
-
珍稀药用植物珠子参的转录组测序及分析
药用植物珠子参的根茎在中国西南区域已有上千年的药用历史,三萜皂苷为珠子参主要的活性成分.为了探索珠子参根茎中皂苷物质生物合成的分子基础,该文采用Illumina HiSeq 2000高通量测序获得珠子参根茎的转录组数据;使用Trinity和TGICL软件实现Unigene的de novo拼接;基于BLAST完成Unigene的蛋白功能注释、KOG功能注释、GO分类和KEGG代谢通路分析.终获得了短读序15.6 Gb,通过de novo拼接注释得到Unigene 62 240个.研究发现,珠子参根茎部表达的19个Unigene与三萜碳环骨架合成相关;69个Unigene与介导三萜碳环骨架的氧化和羟基化等修饰的CYP450相关,18个Unigene与负责三萜碳环骨架的糖基化的糖基化转移酶相关.该研究发现的三萜皂苷合成相关候选基因对于阐明珠子参三萜皂苷合成方式研究提供了重要的基础.
-
微生物转化人参皂苷研究进展
人参皂苷属于达玛烷型四环三萜类,是由苷元与糖连接而成的一种苷,依据苷元不同,可分为原人参二醇皂苷如Rbl、Rb2、Re、Rd、Rh2等和原人参三醇皂苷如Re、Rg1、Rg2、Rf、Rh1等[1].人参皂苷主要存在于五加科人参属植物,如人参、三七、西洋参、高丽参、越南人参、珠子参、竹节参,以及葫芦科绞股蓝属绞股蓝和喙果绞股蓝等植物的根、茎、叶或花蕾中12J,是人参属植物的主要活性成分之一,具有多方面药理活性.2002年,日本学者Zou等[3]从云南野生三七中分离出六种新型达玛烷型三萜皂苷.现已分离出的人参皂苷有50多种[4],相信将来会有更多的人参皂苷被发现.
-
珠子参对小鼠H22肝癌抑制作用及机制
目的:观察珠子参对小鼠移植性肝癌(H22)的增殖抑制作用及其作用机制.方法:建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察珠子参对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,放免法(RIA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,光镜(HE染色)观察肿瘤细胞生长增殖状态,并在透射电镜下观察肿瘤细胞超微结构形态,流式细胞仪技术(FCM)检测细胞凋亡并进行周期分析.结果:与模型对照组相比,珠子参低浓度和高浓度组和5-FU组小鼠平均肿瘤质量均显著降低(1.66±0.96 g,1.49±0.52 g,1.56±0.19 g vs 2.70±0.90 g,均P＜0.01);珠子参低浓度和高浓度组小鼠胸腺平均质量和胸腺指数均高于模型对照组(胸腺平均质量:74.18±20.51 mg,80.25±15.73 mg vs 61.82±12.26 mg,P＞0.05,P＜0.05;胸腺指数:3.17±1.28 mg/g,3.36±1.17 mg/g vs 2.35±0.60 mg/g);与5-FU组(59.51±24.74 mg,2.18±1.18 mg/g)比较,珠子参高浓度组平均胸腺质量和胸腺指数均增高,且结果有显著差异(均P＜0.01);血清中TNF-α浓度珠子参低浓度和高浓度组高于正常对照组(12.89±1.10 pmol/L,12.15±2.35 pmol/Lvs 10.97±1.16 pmol/L),而比模型对照组低(15.31±3.45 pmol/L,均P＜0.05);光镜观察到珠子参组小鼠肿瘤组织周围有大量的吞噬细父胞和淋巴细胞浸润,电镜下可见珠子参组癌细胞胞质浓染,核固缩,线粒体明显减少;FCM分析显示,珠子参低浓度和高浓度组与模型组相比G0-G1期(35.73%±5.90%,33.78%±6.12%vs 36.59%±2.6l%)和S期细胞(42.51%±9.85%,50.48%±3.28% vs 52.46%±2.76%)减少,而G2-M期细胞(21.76%±7.02%,15.73%±6.9l% vs 10.96%±2.75%,均＜0.01)和凋亡细胞(26.88%±1.22%,27.69%±0.21% vs 9.45%±0.14%,均P＜0.01)增加.结论:珠子参对H22肝癌小鼠具有良好的抑瘤作用,其作用机制可能与珠子参阻止G2-M期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程,干扰S期DNA合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关.
-
正交试验法优化珠子参总皂苷提取工艺
目的：优选珠子参总皂苷的提取工艺,为珠子参中皂苷类化合物的开发利用提供理论依据。方法采用紫外分光光度法建立珠子参中总皂苷含量的测定方法,检测波长540 nm,并通过正交试验考察乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间及提取次数对珠子参总皂苷提取工艺的影响。结果珠子参总皂苷的线性范围为0．052~0.182 mg,平均加样回收率为98.64%。珠子参总皂苷佳提取工艺为加入70%的乙醇10倍量,提取3次,每次提取1 h,平均收率12.32%。结论建立的紫外分光光度法检测珠子参总皂苷含量方法准确可靠,优选的珠子参总皂苷提取工艺简便、稳定可行。
-
HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物
目的 建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法.方法 采用Waters Sunfire TM C18色谱柱(150 mm× 1.5 mm,5μm),以含0.05％甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量.优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响.结果 15种皂苷类化合物在0.000 9～2 952.592 3 μg/mL线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003～626.554 ng/mL,定量限为0.075～1 762.150 ng/mL,平均加样回收率在98.15％～101.12％,RSD为0.82％～2.15％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定.
-
秦七风湿方HPLC指纹图谱研究
目的 建立秦七风湿方的HPLC指纹图谱,为其质量评价及药效物质基础研究提供依据.方法 采用Inert Sustain C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);以0.1％磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为30℃;体积流量为1 mL/mim;测定10批秦七风湿方样品,利用中药色谱相似度评价系统(2004A版)建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认.结果 建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,10批样品的相似度均在0.99以上,共标定19个共有峰,8个峰来源于珠子参,8个峰来源于秦艽,5个峰来源于山茱萸(其中1号峰为珠子参、秦艽和山茱萸共有),并通过与对照品比较指认了其中8个色谱峰,分别为马钱苷酸(2号峰)、莫诺苷(3号峰)、龙胆苦苷(5号峰)、马钱苷(6号峰)、人参皂苷Ro (12号峰)、人参皂苷F1(13号峰)、竹节参皂苷Wa (14号峰)、人参皂苷F2 (17号峰).结论 所建立的方法稳定、准确、重复性好,可为秦七风湿方的质量控制及药效物质基础研究提供依据.
