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人参皂苷Ro胶束化影响因素的介观模拟研究
为研究中药制剂过程中不同因素对人参皂苷Ro胶束化的影响,指导中药难溶性成分增溶,本文采用介观动力学方法( MesoDyn),考察Ro的临界胶束浓度(CMC)及聚集形态随温度、难溶性药物柴胡皂苷a( SSa)的浓度及体系盐强度的变化.结果表明,常温条件下Ro的CMC约为1.29％(V/V);随着温度升高,CMC升高,胶束形成时间延长,不利于Ro胶束形成;难溶性药物SSa可在水溶液中先聚集成核,促进Ro的聚集,从而使其CMC随SSa浓度的增加而显著降低;体系盐强度对Ro的CMC无显著影响.
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配伍对珠子参中4个皂苷类成分药代动力学的影响
目的:研究不同配伍对藤珠胃康方中臣药珠子参主要成分在大鼠体内的药代动力学影响,为该复方的研究与开发提供参考.方法:将SD大鼠随机分为珠子参组、珠子参-藤梨根组、珠子参-白术组、珠子参-黄精组、珠子参-三棱组、藤珠胃康方组,灌服给药剂量均为10.0 g·kg-1(按生药量计算),采用HPLC检测0～24 h大鼠血浆中人参皂苷Re,人参皂苷Rb1,人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的血药浓度,流动相乙腈(A)-0.02％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 14 min,19％ ～ 26％A;14～22 min,26％ ～ 29％A;22 ～ 30 min,29％ A;30 ～ 40 min,29％ ～ 35％A;40 ～ 55 min,35％A),检测波长205 nm,运用DAS 3.0软件计算药代动力学参数,比较不同配伍对珠子参中4个指标成分的药动学差异.结果:与珠子参组比较,珠子参-藤梨根组、珠子参-黄精组、珠子参-白术组、珠子参-三棱组中人参皂苷Re,人参皂苷Rb1,人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的药峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0.t)大部分增加,清除率/生物利用度(CL/F)降低;而藤珠胃康方组中上述4个成分的Cmax和AUC0-t增加,CL/F降低.与珠子参组相比,藤珠胃康方中主要成分代谢显著减慢,4个皂苷类成分的血药浓度明显提高.结论:不同配伍会影响珠子参主要药效成分在体内的药代动力学参数,为藤珠胃康方的临床应用提供参考依据.
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人参皂苷Ro碱水解动力学研究及水解产物结构解析
研究人参皂苷Ro在碱性条件下的稳定性,考察了不同温度不同pH下人参皂苷Ro的水解情况,结果发现水解符合一级动力学反应.水解速率与水解温度和水解体系的pH相关,相同的水解温度,pH越高,水解越快;相同的pH,温度越高水解越迅速.对水解产物进行分离,通过质谱、核磁等手段鉴定水解产物为姜状三七皂苷R1(zingibroside-R1).该研究为评价人参皂苷Ro环境特性提供一定依据,也为姜状三七皂苷R1的制备提供一种方法.
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一测多评法测定藤珠胃康颗粒中4个皂苷成分
目的:建立以人参皂苷Re为内参物,同时测定藤珠胃康颗粒中4个活性成分(人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa)的一测多评法.方法:以人参皂苷Re为内参物,建立人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa3个成分相对于人参皂苷Re的相对校正因子.采用外标法测定藤珠胃康颗粒中人参皂苷Re的含量,通过相对校正因子对其他3个成分进行定量分析,并将该方法的测定结果与外标法的测定结果相比较.结果:各成分相对校正因子重现性良好.人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa按一测多评方法与外标法测定结果无显著差异.结论:本文建立的方法经方法学验证,可为控制藤珠胃康颗粒的内在质量提供参考.
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HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物
目的 建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法.方法 采用Waters Sunfire TM C18色谱柱(150 mm× 1.5 mm,5μm),以含0.05％甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量.优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响.结果 15种皂苷类化合物在0.000 9～2 952.592 3 μg/mL线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003～626.554 ng/mL,定量限为0.075～1 762.150 ng/mL,平均加样回收率在98.15％～101.12％,RSD为0.82％～2.15％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定.
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秦七风湿方HPLC指纹图谱研究
目的 建立秦七风湿方的HPLC指纹图谱,为其质量评价及药效物质基础研究提供依据.方法 采用Inert Sustain C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);以0.1％磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为30℃;体积流量为1 mL/mim;测定10批秦七风湿方样品,利用中药色谱相似度评价系统(2004A版)建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认.结果 建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,10批样品的相似度均在0.99以上,共标定19个共有峰,8个峰来源于珠子参,8个峰来源于秦艽,5个峰来源于山茱萸(其中1号峰为珠子参、秦艽和山茱萸共有),并通过与对照品比较指认了其中8个色谱峰,分别为马钱苷酸(2号峰)、莫诺苷(3号峰)、龙胆苦苷(5号峰)、马钱苷(6号峰)、人参皂苷Ro (12号峰)、人参皂苷F1(13号峰)、竹节参皂苷Wa (14号峰)、人参皂苷F2 (17号峰).结论 所建立的方法稳定、准确、重复性好,可为秦七风湿方的质量控制及药效物质基础研究提供依据.
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提取浓缩对琼玉膏品质一致性的影响
目的 研究较长时间提取和浓缩对琼玉膏品质的影响,探讨琼玉膏主成分在提取和浓缩过程中的降解、转化机制.方法 采用HPLC-MS方法同时测定琼玉膏中主要活性成分5-羟甲基糠醛、梓醇、密力特苷、毛蕊花糖苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷20(S)-Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Ro和茯苓酸,比较不同提取和浓缩时间重复制备样品中10种成分质量分数标准差(SD)的累加值,考察提取和浓缩时间对琼玉膏品质的影响.结果 随着提取和浓缩时间的延长,10种活性成分的总量和部分成分的相对质量分数显著改变,同时重复制备样品质量分数误差累加值随提取和浓缩时间延长呈下降趋势.结论 提取和浓缩时间可显著影响琼玉膏活性成分转化程度,从而影响其品质的一致性.
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人参皂苷Ro促进THP-1细胞向DC分化的作用
目的:探讨人参皂苷Ro联合细胞因子(GM-CSF与IL-4)促进人单核白血病细胞(THP-1)向树突状细胞(DC)分化的作用.方法:筛选细胞因子诱导白血病源DC敏感细胞株;采用细胞因子联合人参皂苷Ro诱导筛选的敏感细胞株THP-1向DC分化.培养体系中分别加入小(5 μmol/L)、中(10 μmol/L)、大(20 μmol/L)剂量人参皂苷Ro,流式细胞术检测白血病来源DC表面标志CD1a、MHCⅡ、共刺激分子CD86表达;逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测白血病来源DC MHCⅡ、CD86 mRNA转录水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清TNF-α、IL-6蛋白水平.结果:THP-1是细胞因子诱导DC分化的敏感白血病细胞株,与单纯细胞因子诱导比较,细胞因子联合人参皂苷Ro作用后,白血病来源DC表面标志CD1a、MHCⅡ、共刺激分子CD86比例显著升高(P<0.05),CD1a、CD86及MHCⅡ转录水平显著升高(P<0.05),培养上清TNF-α、IL-6蛋白水平显著升高(P<0.05).结论:人参皂苷Ro能明显促进细胞因子诱导THP-1细胞向DC分化.
关键词： 人参皂苷Ro 白血病 树突状细胞 THP-1细胞 粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子 -
HPLC同时测定藤珠胃康颗粒中4个皂苷类成分
目的 建立HPLC同时测定藤珠胃康颗粒中4个皂苷类成分(人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa)的方法.方法 采用Hypersil GOLD C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％磷酸水溶液,梯度洗脱(-5～0 min,19％乙腈;0～14 min,19％→26％乙腈;14～v22 min,26％→29％乙腈;22～30 min,29％乙腈;30～40 min,29％→35％乙腈;40～55 min,35％乙腈),体积流量1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温30℃.结果 人参皂苷Re在0.080 4～1.608 μg(r=1),人参皂苷Rb1在0.108 8～2.176 μg(r=0.999 9),人参皂苷Ro在0.288 8～5.776 μg(r=0.999 9),竹节参皂苷Ⅳa在0.176 0～3.520 μg(r=0.999 9)内线性关系良好;平均回收率(n=6)分别为99.41％,101.92％,99.76％,100.31％,RSD值分别为2.22％,2.07％,0.33％,0.64％.结论 本实验所建立的方法简单,专属性强,重复性好,可用于藤珠胃康颗粒中人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的测定.
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人参水提物在Caco-2模型的吸收特征
目的 建立Caco-2细胞单层模型,探讨人参水提物的吸收特征.方法 将Caco-2细胞以1×105 个/cm2的密度接种于Millicell小室,培养21 d,以TEER值、阳性对照药荧光黄和普萘洛尔的Papp值来评价模型的完整性、紧密性和通透性.进行人参水提物AP-BL和BL-AP两个方向的转运实验,用HPLC/MS对标志性成分进行分析,计算Papp、外排比(Efflux ratio)和转运量.结果 TEER值和阳性对照药的Papp值均达到要求.水提物中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Ro的Papp AP-BL分别为(4.97±1.28)×10-6、(3.88±0.93)×10-6、(2.54±0.18)×10-6、(2.51±0.44)×10-6、(2.21±0.46)×10-6和(0.65±0.09)×10-6cm·s-1,Papp BL-AP分别为(4.61±0.67)×10-6、(4.32±0.83)×10-6、(3.05±0.37)×10-6、(3.53±0.27)×10-6、(3.24±0.24)×10-6和(1.45±0.16)×10-6 cm·s-1.人参皂苷Rg1单体的Papp AP-BL为(0.39±0.02)×10-6 cm·s-1,Papp BL-AP为(0.47±0.01)×10-6 cm·s-1.结论 Caco-2细胞单层模型建立成功.水提物中三醇型人参皂苷的吸收优于二醇型,吸收一般;齐墩果烷型人参皂苷Ro吸收差,可能存在主动外排作用.水提物中其它成分可促进人参皂苷Rg1的吸收.
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糖智宁胶囊定量分析方法研究
目的 建立糖智宁胶囊的定量分析方法.方法 采用HPLC测定糖智宁胶囊中葛根素、盐酸小檗碱、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量.Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温30℃;流动相为乙腈-0.2％磷酸溶液(梯度洗脱);流速1 ml·min-1;检测波长203 nm.结果 HPLC中,葛根素、盐酸小檗碱、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa线性范围分别为0.87 ～15.66 μg(r =0.999 6)、1.84～40.48 μg(r=1.0000)、0.19 ～4.114μg(r =0.999 9)、3.24～71.28μg(r=0.999 9),平均加样回收率分别为98.14％、98.18％、98.69％、97.02％,RSD分别为0.51％、2.16％、1.39％、1.50％.结论 该方法简单、专属性强、重复性好、结果准确可靠,可用于糖智宁胶囊的质量评价.
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藤珠胃康颗粒中4种皂苷成分的大鼠体内药代动力学研究
目的 研究藤珠胃康颗粒中人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa在大鼠体内的药代动力学特征.方法 大鼠灌胃藤珠胃康颗粒(9g·kg-1),于不同时间点眼眶静脉丛采血,乙腈沉淀蛋白,采用HPLC-MS法检测大鼠血浆中的人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa,应用DAS 2.1.1软件拟合药动学参数.结果 人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa的t1/2分别为(13.72±9.14)、(6.94±3.51)、(28.80±9.99)、(5.17±2.41)h,tmax分别为(1±0.00)、(4±0.00)、(2±0.00)、(4±0.00)h,Cmax分别为(370.27±88.27)、(649.06±98.22)、(111.10±3.38)、(686.94±145.55)ng·mL-1,A UC0～t分别为(2188.75±599.81)、(4743.44±509.26)、(1699.06±35.66)、(4427.82±1396.29) μg·h·L-1.结论 建立的人参皂苷Re、Ro、Rb1和竹节参皂苷Ⅳa血浆样品分析方法及得到的药动学参数,可为藤珠胃康颗粒的药代动力学研究提供参考.
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正交试验优选糖智宁胶囊提取工艺
目的 利用正交法优选糖智宁胶囊的提取工艺条件.方法 以乙醇体积分数、溶媒用量、提取时间、提取次数为主要影响因素,以葛根素、盐酸小檗碱、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳ a 4个成分的总量和浸膏量为评价指标,设计L9(34)正交试验,确定提取工艺的佳条件.结果 6倍量50％乙醇提取3次,每次1.5h为佳提取方案.结论 所建方法简单、专属性强、重复性好、结果准确可靠,可有效控制制剂质量.
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消渴降糖片定性定量研究
目的 建立消渴降糖片定性定量研究方法.方法 采用薄层色谱法鉴别黄精、甜菊叶、桑椹、山药；高效液相色谱法测定人参皂苷Rb1、Ro的含量.结果 薄层斑点清晰,阴性样品无干扰；人参皂苷Rb1在19.40～97.00 μg·mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 6),平均加样回收率为101.5％(n=6),RSD =2.3％、人参皂苷Ro在5.98～35.88μg·mL-1与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均加样回收率为103.6％ (n=6),RSD=1.7％.结论 本方法快速、简便、准确、专属性强、重现性好,可作为消渴降糖片质量控制的方法.
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高效液相色谱法同时测定珠子参中4种化学成分的含量
目的 建立不同产地加工珠子参中人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa、姜状三七苷R1和去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa4种化学成分的含量测定方法.方法 采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5um)色谱柱;以0.2％的磷酸溶液和乙腈进行梯度洗脱;柱温25℃;流速1 mL·min-1;检测波长203 nm.结果 在HPLC法中,人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa、姜状三七苷R1和去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa的线性范围分别是0.81～16.20 μg(r=0.999 9)、0.46～9.20 μg(r=1.000 0)、0.38～7.60 μg(r=0.999 9)、0.16～3.20 μg(r=0.999 9);平均回收率分别为100.3％、99.1％、100.1％、95.8％,RSD分别为2.6％、2.3％、2.5％、0.7％.结论 该方法专属性强,重复性好,可用于不同加工方法珠子参的质量控制.
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人参皂苷Ro对胃癌细胞MFC增殖和凋亡的影响
目的 探讨人参皂苷Ro对胃癌细胞MFC增殖和凋亡的影响.方法 采用MTT染色法检测MFC细胞的增殖抑制率;流式细胞仪检测MFC细胞周期和凋亡情况;MFC移植瘤小鼠,经受试药物处理后,剥取瘤组织称量并计算抑瘤率.结果 与对照组比较,人参皂苷Ro在6～96 μg· mL-1范围内对MFC细胞增殖的抑制率随浓度的增加而显著升高.与对照组比较,人参皂苷Ro高剂量组对MFC细胞G0/G1期和凋亡率明显升高,G2/M期,S期明显降低;人参皂苷Ro各剂量组均能显著抑制肿瘤生长,与模型组比较,各给药组肿瘤的质量明显降低,其中,高剂量组的抑瘤率为62.7％.结论 人参皂苷Ro对MFC移植瘤具有抑制生长的作用,这可能与诱导MFC细胞凋亡和抑制增殖有关.
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珠子参抗肝损伤药效的物质基础研究
目的：探索珠子参抗肝损伤药效的物质基础。方法利用溶剂提取法、大孔树脂法及各种色谱技术，进行珠子参有效部位和化学成分的提取分离；采用CCl4所致小鼠化学性肝损伤模型，进行珠子参药效部位及有效成分筛选。将小鼠平均分为对照组、模型组、阳性对照组、珠子参不同剂量组，共9组。每天灌胃1次，连续7 d。检测血清中AST 和ALT含量的变化。结果珠子参总皂苷高剂量、中剂量可以降低ALT和AST含量，珠子参多糖低剂量组与模型组比较也可以降低ALT和AST 的含量，而总皂苷高剂量有显著作用；竹节参皂苷Ⅳa各剂量组、人参皂苷Ro中、低剂量组均能降低 ALT 和 AST 的含量，与模型组对比，差异有统计学意义，竹节参皂苷Ⅳa低剂量效果显著。结论珠子参总皂苷为珠子参抗肝损伤的有效部位，主要化学成分竹节参皂苷Ⅳa为其抗肝损伤的主要有效成分。
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人参皂苷Ro对小鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察人参皂苷Ro对小鼠胃癌MFC细胞增殖和凋亡的影响.方法 给药组给予人参皂苷Ro,使其达到不同的终质量浓度(96,48,24,12,6 μg/mL),作用于MFC细胞48h后,采用MTT染色法检测MFC细胞的增殖抑制率;用流式细胞仪检测MFC细胞周期和凋亡情况;建立MFC移植瘤小鼠模型,随机分为模型组(生理盐水),环磷酰胺(20 mg/kg)组和人参皂苷Ro(800,400,200 mg/kg)剂量组,连续灌胃给药10 d,处死小鼠,剥取瘤组织称量并计算抑瘤率.结果 与6.0μg/mL组比较,人参皂苷Ro在12 ～ 96μg/mL范围内对MFC细胞的增殖的抑制率随浓度的增加而显著升高(P＜0.01).与空白对照组比较,人参皂苷Ro高剂量组的MFC细胞G0/G1期和凋亡率明显升高(P＜0.01),G2/M期,S期明显降低(P＜0.01).人参皂苷Ro各剂量组均能显著抑制肿瘤生长,与模型组比较,各给药组肿瘤的质量明显降低(P＜0.05),其中人参皂苷Ro高剂量组的抑瘤率62.7％.结论 人参皂苷Ro对MFC移植瘤小鼠具有抑瘤作用,可能与诱导MFC细胞凋亡和抑制增殖有关.
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HPLC法同时测定怀牛膝中5个成分的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定怀牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量.方法:采用ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),以乙腈(A)-0.5％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,检测波长250 nm(β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮和25S-牛膝甾酮)和203 nm(人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa).结果:5个分析物分离良好,β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa进样量分别在0.218～2.725 μg(r=0.999 8)、0.080～0.995 μg(r=0.999 9)、0.155～1.935 μg(r=0.999 9)、0.352～4.400 μg(r=0.999 8)和0.338～4.225 μg(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,加样回收率分别为98.3％、101.5％、98.4％、99.3％和101.4％,相应的RSD分别为0.89％、0.93％、1.4％、0.69％和1.3％;16批不同产地的怀牛膝中β-蜕皮甾酮、25R-牛膝甾酮、25S-牛膝甾酮、人参皂苷Ro和竹节参皂苷Ⅳa的含量范围分别为0.032％～0.074％、0.008％～0.017％、0.008％～0.017％、0.044％～0.107％和0.047％～0.103％.结论:本方法可作为评价怀牛膝质量的方法.
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不同产地人参根和根茎中人参皂苷的含量分析
目的:研究不同产地人参根和根茎中14个人参皂苷的含量,为制定人参皂苷的质量标准提供科学依据.方法:采用Diamonsil(R) ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈和乙腈-水-0.1％磷酸水溶液(5∶90∶8,ν/v/v)为流动相,梯度洗脱,203 nm波长处二极管阵列检测器检测,外标对照品法测定人参根和根茎中人参皂苷(G)Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro,20-0-葡萄糖基人参皂苷Rf(20-GG-Rf),三七人参皂苷(NG)R1、R2 14个化合物.结果:不同产地人参根和根茎中人参皂苷含量的变化较大,26批次五年生人参根和根茎样品中14个人参皂苷的含量(μm·g-1,人参根和根茎)变化幅度分别为G-Ra1,0～2 958;G-Ra2,0～1 320;G-Rb1,1 195～7 129;G-Rb2,835～6 993;G-Rb3,178～1 812;G-Rc,414～5 569;G-Rd,393～5 529;G-Re,603～3 564;G-Rf,301～1 504;G-Rg1,738～4 710;G-Ro,893～8 569;20-GG-Rf,110～656;NG-R1,74～778;NG-R2,0～844.结论:G-Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd为典型的原人参二醇型人参皂苷,G-Re、Rf、Rg1,20-GG-Rf、NG-R1和R2为典型的原人参三醇型人参皂苷,G-Ro为典型的齐墩果酸型人参皂苷,三大类人参皂苷能代表体现人参药物活性的皂苷成分.其中,又以G-Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro和20-GG-Rf含量更高,作为判定人参根和根茎中人参皂苷质量的指标性成分更科学.
