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UPLC-MS/MS快速测定茯苓中去氢土莫酸和茯苓酸的含量
目的:建立一种测定茯苓药材中茯苓酸和去氢土莫酸含量的UPLC-MS/MS方法.方法:采用ZORBAX Eclipseplus C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相乙腈-1.0 mmol·L-1乙酸铵(80∶20),流速0.3 mL· min-1,柱温40℃,进样量5.0 μL.ESI离子源,负离子模式,多反应监测模式(MRM),检测离子对分别为茯苓酸m/z 527.40/465.30,去氢土莫酸m/z483.20/421.20.结果:茯苓酸和去氢土莫酸分别在26.2～524 μg·L-1(r=0.999 8)和24.2 ～488 μg·L-1(r=0.999 9)线性良好,分析时间为6 min,平均回收率分别为101.4％ (RSD 1.2％)和99.8％ (RSD 1.2％).结论:该方法准确、快速、可靠、灵敏,可作为茯苓酸和去氢土莫酸的一种快速定量分析方法.
关键词： 超高效液相色谱-质谱联用 茯苓 茯苓酸 去氢土莫酸 -
当归芍药散治防老年期痴呆的物质基础与作用机理研究Ⅳ--有效部位化学成分研究
目的:对当归芍药散精简方(FBD)的有效部位进行化学成分的研究.方法:用GC-MS对FBD挥发油部位进行研究,同时以硅胶柱层析法对FBD挥发油部位化学成分进行分离,石油醚-乙酸乙酯洗脱.结果:FBD挥发油部位通过GC-MS共分离出32个色谱峰,鉴定了其中25个成分,占所出峰的92%;硅胶柱层析共获得4个化合物,鉴定了其中3个,分别为白术内酯Ⅲ(AtractylenolideⅢ)、茯苓酸(pachymic acid)和阿魏酸(Ferulic acid).结论:FBD挥发油部位可能是其抗老年期痴呆的有效部位.
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不同产地茯苓中茯苓酸含量的比较研究
目的 建立茯苓中茯苓酸含量的测定方法 ,比较9个不同产地茯苓中茯苓酸的含量,为评价不同产地茯苓的品质提供参考依据.方法 采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Kromasil 100-5C18色谱柱(250mm×4.6mm,5 μm),柱温30℃,流动相为乙腈-0.4%乙酸(80:20),流速1.0 mL/min,检测波长242 nm.结果茯苓酸在0.48～2.40μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.999 7,平均回收率99.96%,RSD=1.85%.9个产地茯苓中茯苓酸的含量有所差异.结论 该方法 简便、专属、稳定,可用于茯苓药材中茯苓酸的含量测定.
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反相高效液相色谱法测定茯苓中茯苓酸的含量
目的建立茯苓中茯苓酸的含量测定方法.方法采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),Hypersil ODS C18色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm),柱温30℃,乙腈-0.5%磷酸(70:30)为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长242 nm.结果茯苓酸在0.362～9.05 0 μg范围内与其色谱峰面积呈良好线性关系,r=0.9999,平均回收率99.54%,RSD=1.01%.3个产地茯苓中茯苓酸的含量依次为:湖北＞云南＞安徽.结论该方法简便、专属、稳定,可用于茯苓药材的质量评价.
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HPLC波长切换法同时测定白益镇惊丸中的京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、去氢茯苓酸和茯苓酸
目的:建立HPLC波长切换法同时测定白益镇惊丸中的京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、去氢茯苓酸和茯苓酸5种活性成分的含量.方法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙腈(A)-0.5%磷酸溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱(0~11 min,15.0%A;11~22 min,15.0%A→28.0%A;22~31 min,28.0%A→45.0%A;31~42 min,45.0%A→70.0%A;42~50 min,70.0%A→15.0%A),流速0.9 mL·min-1,柱温30℃,波长切换法检测(0~22 min,238 nm,京尼平龙胆二糖苷和栀子苷;22~31 min,440 nm,西红花苷-Ⅰ;31~50 min,210 nm,去氢茯苓酸和茯苓酸),进样量为10μL.结果:京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-Ⅰ、去氢茯苓酸和茯苓酸5种成分的质量浓度分别在5.930~118.6、11.41~228.2、4.950~99.00、4.100~82.00、4.780~95.60μg·mL-1呈现良好的线性关系,相关系数分别为0.9999、0.9998、0.9994、0.9999、0.9997;平均加样回收率及相应的RSD分别为99.42%(0.96%)、98.54%(1.08%)、99.06%(1.28%)、97.76%(0.84%)、98.19%(1.59%);供试品溶液在室温下12 h内稳定.结论:本文建立的HPLC波长切换法同时测定白益镇惊丸中的5种成分,该方法简便、稳定、可靠,可作为白益镇惊丸全面可靠的质量控制方法.
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HPLC法同时测定三白草肝炎糖浆中去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A的含量
目的:建立HPLC法同时测定三白草肝炎糖浆中去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A的含量.方法:采用Hypersil C18(4.6 mm×200 mm,5μm)色谱柱;流动相A采用乙腈-甲醇(1:1),流动相B采用0.05％磷酸溶液,进行梯度洗脱;流速为1.0 mL·min-1;检测波长分别为244 nm(去氢土莫酸和茯苓酸)和230 nm(三白草酮和里卡灵A).结果:去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A分别在5.400～108.0μg·mL-1(r=0.9995)、6.050～121.0μg·mL-1(r=0.9992)、11.94～238.8μg·mL-1(r=0.9997)、4.510～90.20μg·mL-1(r=0.9994)范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为97.23％、99.13％、97.99％、96.93％,RSD(n=6)分别为1.02％、0.76％、1.22％、0.88％.结论:本文建立的波长切换HPLC梯度洗脱法可实现同时测定去氢土莫酸、茯苓酸、三白草酮和里卡灵A4种成分,方法操作简便,可作为三白草肝炎糖浆的质量控制方法.
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茯苓酸通过激活多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡
目的 观察茯苓酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨作用机制.方法 乳腺癌MDA-MB-231细胞与不同浓度(1、2、5μrnol/L)的茯苓酸共孵育,采用CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒检测细胞存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)及与细胞凋亡相关蛋白的表达.结果 茯苓酸能够剂量和时间依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖,并可诱导MDA-MB-231细胞凋亡.浓度为1、2、5 μmol/L的茯苓酸作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率显著增加至25.6％、59.4％、87.2％,明显高于对照组凋亡率(5.4％);经过1、2、5 μmol/L茯苓酸分别处理48 h后,实验组MDA-MB-231细胞中凋亡蛋白标志物PARP裂解量升高,且呈剂量依赖性.结论 茯苓酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与激活PARP有关.
关键词： 茯苓酸 乳腺癌 MDA-MB-231细胞 增殖 凋亡 多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶 -
提取浓缩对琼玉膏品质一致性的影响
目的 研究较长时间提取和浓缩对琼玉膏品质的影响,探讨琼玉膏主成分在提取和浓缩过程中的降解、转化机制.方法 采用HPLC-MS方法同时测定琼玉膏中主要活性成分5-羟甲基糠醛、梓醇、密力特苷、毛蕊花糖苷、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷20(S)-Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Ro和茯苓酸,比较不同提取和浓缩时间重复制备样品中10种成分质量分数标准差(SD)的累加值,考察提取和浓缩时间对琼玉膏品质的影响.结果 随着提取和浓缩时间的延长,10种活性成分的总量和部分成分的相对质量分数显著改变,同时重复制备样品质量分数误差累加值随提取和浓缩时间延长呈下降趋势.结论 提取和浓缩时间可显著影响琼玉膏活性成分转化程度,从而影响其品质的一致性.
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变波长RP-HPLC法同时测定调经丸中12种成分
目的 建立同时测定调经丸中芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、盐酸益母草碱、橙皮苷、丹皮酚、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ、柠檬苦素、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸12种成分的RP-HPLC方法.方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为VenusilMPC18 (250 mm×4.6 mm,5.0 μm);流动相为乙醇-乙腈(40∶60,A)和0.2％磷酸水溶液(B),梯度洗脱,体积流量0.8mL/min;柱温45℃.结果 12种指标成分芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、盐酸益母草碱、橙皮苷、丹皮酚、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ、柠檬苦素、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸分别在0.5～50.0 mg/L (r=0.999 5)、0.1～10.0 mg/L (r=0.999 1)、0.2～20.0 mg/L (r=0.999 2)、0.3～30.0 mg/L (r=0.999 3)、4.0～400.0 mg/L (r=0.999 8)、0.2～20.0 mg/L (r=0.999 1)、0.6～60.0 mg/L (r=0.999 4)、1.5～150.0 mg/L (r=0.999 8)、7.0～700.0 mg/L (r=0.999 9)、0.5～50.0 mg/L (r=0.999 3)、0.5～50.0 mg/L (r=0.999 4)、1.0～100.0 mg/L (r=0.999 6)与峰面积呈良好的线性关系;精密度良好,RSD≤0.97％;重复性良好,RSD≤1.25％;加样回收率在98.5％～103.5％,RSD≤1.24％.供试品溶液在室温条件下24 h内稳定,RSD≤1.09％.12批次供试品中芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、盐酸益母草碱、橙皮苷、丹皮酚、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ、柠檬苦素、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸质量分数分别为4.328～4.688、0.033～0.054、0.073～0.091、0.177～0.199、0.243～0.283、0.043～0.069、1.144～1.173、0.037～0.061、0.094～0.126、0.127～0.157、0.155～0.179、0.285～0.327 mg/g.结论 所建立的方法快速、灵敏度高、准确度高、专属性好,为调经丸的质量控制提供依据.
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桂枝茯苓胶囊中三萜类成分UPLC指纹图谱研究
目的 建立桂枝茯苓胶囊(GFC)三萜类成分UPLC指纹图谱方法,为评价GFC的质量提供新方法.方法 采用Agilent Zorbox Eclipse Plus HD C18(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min,柱温30℃,检测波长为210 nm.采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认.结果 得到分离度和重复性良好的GFC三萜类成分指纹图谱,确定了20个共有峰,其中1～7、10、12、14～17号峰共13个共有峰来自于茯苓,8、11号峰来自于桂枝,9号峰来自于白芍和牡丹皮,13号峰来自于桃仁、白芍、牡丹皮和桂枝.10批成品指纹图谱相似度在0.90以上.UPLC-Q-TOF/MS共鉴定出15个成分,分别为常春藤皂苷(1)、去氢土莫酸(2)、土莫酸(3)、猪苓酸C(4)、3-表去氢土莫酸(6)、茯苓酸D(7)、α-亚麻酸(9)、去氢茯苓酸(10)、齐墩果酸(11)、茯苓酸(12)、亚油酸(13)、棕榈油酸甲酯(15)、棕榈酸(16)、棕榈酸乙酯(17)、胡萝卜苷(18).结论 建立的UPLC指纹图谱有较好的精密度、重复性和稳定性,适用于GFC的质量控制.
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HPLC法测定八珍液中地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸
目的 建立HPLC同时测定八珍液中的地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸的方法.方法 Kromasil C18色谱柱(200mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:203 nm(0～34 min,检测地黄苷A和地黄苷D)、210 nm(34～65 min,检测去氢土莫酸和茯苓酸);体积流量1.0mL/min.结果 地黄苷A、地黄苷D、去氢土莫酸和茯苓酸分别在5.76～115.20、4.05～81.00、6.10～122.00、6.35～127.00 μg/mL线性关系良好;平均回收率分别为98.90％、99.08％、98.71％、97.95％,RSD值分别为1.49％、1.19％、1.63％、0.92％.结论 该方法操作简便,准确,重复性好,可作为八珍液的质量控制方法.
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HPLC法测定八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷
目的建立同时测定八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇、桃叶珊瑚苷4个成分的高效液相色谱测定方法.方法采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长:0~18 min, 241 nm(去氢土莫酸);18~50 min,210 nm(茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷);体积流量为1.0 mL/min;柱温25℃;进样量20 μL.结果去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇和桃叶珊瑚苷分别在3.35~67.00μg/mL、3.50~70.00μg/mL、3.07~61.40μg/mL、3.25~65.00μg/mL线性良好,r值均大于0.999 0,平均回收率分别为96.72%、97.87%、98.21%、98.09%,RSD值分别为1.08%、0.95%、0.64%、1.22%(n=6).结论 该方法简便,结果准确,可用于八味肾气丸中去氢土莫酸、茯苓酸、梓醇、桃叶珊瑚苷的质量控制.
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HPLC法测定参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ
目的：建立梯度洗脱联合波长切换高效液相色谱（HPLC）法对参苓健体粉中去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ同时进行测定。方法采用Venusil MP C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：乙腈–0.05%磷酸溶液，梯度洗脱；检测波长：210 nm（0～19 min，检测去氢土莫酸、去氢茯苓酸和茯苓酸）、220 nm（19～35 min，检测白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ）；体积流量：0.8 mL/min；柱温：30℃；进样量为10μL。结果去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸、白术内酯III、白术内酯I质量浓度分别在4.62～92.40μg/mL（r＝0.9997）、3.80～76.00μg/mL（r＝0.9999）、5.76～115.20μg/mL（r＝0.9999）、3.95～79.00μg/mL（r＝0.9998）、5.05～101.00μg/mL（r＝0.9996）与峰面积关系良好；回收率分别为99.24%、97.75%、98.66%、98.49%、99.10%，RSD值分别为1.23%、1.79%、1.66%、0.80%、1.25%。结论建立的方法操作简便、结果可靠，可用于参苓健体粉的质量控制。
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HPLC法测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸
目的 建立HPLC波长切换法同时测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸的方法.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;0～24.0 min在248 nm波长下检测猪苓酮B和猪苓酮A,24.0～50.0 min在210nm波长下检测去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量为10 μL.结果 猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸分别在5.79～115.80、1.66～33.20、3.28～65.60、7.07～141.40、1.46～29.20、0.88～17.60 μg/mL与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为98.75％、97.60％、98.23％、99.49％、97.10％、96.81％,RSD值分别为0.75％、1.66％、1.44％、0.90％、1.15％、1.38％.结论 本方法简便、准确、重复性好,为威喜丸的质量控制提供了实验依据.
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HPLC法测定参芪消渴颗粒中尿囊素、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B、茯苓酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷
目的 建立参芪消渴颗粒中尿囊素、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B、茯苓酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷同时测定的方法.方法 采用高效液相色谱法,使用依利特Hypersil ODS 2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈–0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;测定波长:0~14 min在224 nm波长下尿囊,14~20 min在208 nm波长下检测24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B,20~26 min在210 nm波长下检测茯苓酸,26~36 min在260 nm波长下检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷;体积流量:0.9 mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL.结果 5个成分的线性范围分别为9.43~188.60μg/mL(r=0.9994),3.75~75.00μg/mL(r=0.9997),4.06~81.20μg/mL(r=0.9999),4.82~96.40μg/mL(r=0.9995),3.79~75.80μg/mL(r=0.9998).平均回收率分别为97.99%、99.34%、98.20%、96.57%、98.98%,RSD值分别为0.62%、1.14%、1.28%、0.79%、0.93%.结论 所建方法简便、可靠、准确度高,可有效地控制参芪消渴颗粒的质量.
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HPLC法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量
目的：建立高效液相色谱法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量。方法：采用HPLC法，乙腈-0.5％磷酸溶液（83∶17）为流动相，流速为1.0 ml／min，检测波长为210 nm，柱温为35℃。结果：6个厂家12批次的茯苓配方颗粒中茯苓酸含量介于0.87～69.13μg／g之间。结论：该方法操作简便，结果稳定可靠，可用于茯苓配方颗粒的质量评价。
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祛病延年话茯苓
茯苓是一味中药,能祛病延年.<神农本草经>将茯苓列为上品,并说:"久服安魂养神,不饥延年."现代实验研究证明,茯苓的有效成分90%以上为茯苓多糖,此外,还有茯苓酸、蛋白质、脂肪、钾盐、麦角甾醇、组氨酸和卵磷脂等.茯苓多糖不仅能增强人体免疫功能,而且具有较强的抗癌作用.茯苓还能促进钠、氯、钾等电解质的排出,抑制肾小管的重吸收,有利尿作用.因此常服食茯苓对老年性水肿、肥胖症,以及预防癌症均有益处.
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HPLC法测定苓桂术甘汤中五种成分的含量
目的:建立HPLC法同时测定苓桂术甘汤中肉桂酸、桂皮醛、甘草酸、白术内酯Ⅲ、茯苓酸的量.方法:采用XBridgeTM(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长为210 nm,柱温为30℃.结果:肉桂酸、桂皮醛、甘草酸、白术内酯Ⅲ、茯苓酸5种成分在100 min内被完全分离;峰面积与其浓度成良好的线性关系;加样回收率(n=6)为99.39％ ～ 100.06％(RSD=0.22％ ～2.19％).结论:采用高效液相色谱法同时测定复方中的5种成分,此方法简单可靠,精密度好,可较好地用于苓桂术甘汤的质量控制.
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HPLC波长切换法同时测定琥珀多寐丸中6个成分的含量
目的 建立同时测定琥珀多寐丸中远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸含量的方法.方法 采用波长切换检测的高效液相色谱法,色谱柱采用依利特C18色谱柱,流动相为乙腈(A)-体积分数为0.1％的磷酸溶液(B)系统,进行梯度洗脱;0～36 min检测波长为320 nm(检测远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖),36 ～75m in检测波长为210nm(检测细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸、茯苓酸);流速为1.3mL·min-1;柱温为30℃.结果 在优化的色谱条件下,远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸分别在6.46 ～ 129.20 mg·L-1 (r =0.999 2)、6.13 ～122.60 mg·L-1 (r=0.999 5)、13.17 ～263.40 mg·L-1(r =0.999 9)、14.15～283.00mg·L-1(r=0.999 6)、5.35 ～ 107.00 mg·L-1(r =0.999 7)、4.50 ～ 90.00 mg·L-1(r=0.999 3)内浓度与峰面积呈良好的线性关系;6种成分的平均加样回收率(n=6)分别为97.69％、96.87％、100.04％、97.74％、97.67％、99.16％,RSD分别为1.35％、0.96％、0.59％、0.93％、1.02％、1.10％.结论 该检测方法可用于琥珀多寐丸中远志(口山)酮Ⅲ、3,6'-二芥子酰基蔗糖、细叶远志皂苷、远志皂苷B、去氢土莫酸和茯苓酸的含量分析.
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HPLC法同时测定茯苓中去氢茯苓酸和茯苓酸的含量
目的 建立同时测定茯苓药材中去氢茯苓酸和茯苓酸含量的反相高效液相色谱法.方法 采用HPLC法.色谱柱为Phenomenex C_(18)柱(250mm×4.6mm,4μm),流动相为乙腈-质量分数为0.1%的磷酸溶液(体积比为75:25),流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为30℃,检测波长为210 nm.结果 在上述色谱条件下去氢茯苓酸和茯苓酸能达到基线分离;去氢茯苓酸和茯苓酸分别在20.4～408.0 mg·L~(-1)和14.4～288.0 mg·L~(-1)内与色谱峰面积之间线性关系良好;二者的平均加样回收率分别为99.4%和100.0%,RSD(n=9)分别为2.2%和1.7%.结论 HPLC法可作为茯苓质量控制的一个有效方法.
