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益母草不同种质评价研究
目的：比较研究各益母草种质资源的差异性，为品种选育提供优良育种材料。方法将收集自全国不同产地的20个野生益母草种质资源在浙江衢州进行同质园试验，观察其物候期、耐寒性及生境适宜性；测定初花期株高、鲜重和干重，并分别测定初花期和反季节栽培的益母草植株中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量。结果综合各种质对浙江生境的适应性、初花期药材干产量及其中的盐酸水苏碱和盐酸益母草碱成分含量、反季节栽培益母草植株中上述2种成分的含量水平，河南灵宝、河南社旗和湖南桂东3个种质较好，其中以河南灵宝种质佳，其初花期药材干产量（30.6 g/株）、初花期植株中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量（分别为1.31%和0.19%）及反季节栽培植株中有效成分盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量（分别为3.44%和0.37%）均较高，且能适应在浙江种植。结论河南灵宝种源可以作为品种选育的佳候选材料。
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HPLC-MS同时测定益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量
建立益母草制剂中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定方法.采用LC-MS同时测定盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量.使用Waters XBridge Amide色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1％甲酸为流动相,流速1.0 mL·min-1,分流比为1∶4.质谱条件为ESI离子源,正离子模式,选择性离子扫描(SIM)下对盐酸水苏碱(m/z 144.0)和盐酸益母草碱(m/z312.0)进行测定.盐酸水苏碱浓度在0.562 8～281.4 μg·L-1线性关系良好(r=0.9998).盐酸益母草碱浓度在0.5212～260.6 μg·L-1性关系良好(r=0.9998).该方法准确、简便、可靠,可作为益母草制剂的含量测定方法.
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益母草饮片标准汤剂研究
建立益母草饮片标准汤剂质量评价标准.制备13批不同品质的益母草饮片标准汤剂,对盐酸益母草碱和盐酸水苏碱进行含量测定、计算其转移率、测定出膏率及pH、建立HPLC指纹图谱分析方法.结果13批益母草饮片标准汤剂中盐酸益母草碱和盐酸水苏碱转移率分别为30.0％～53.4％,67.0％～ 82.6％,干膏得率12.1％ ～ 18.3％,pH 5.87～6.22,并用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A)软件进行指纹图谱分析,确定了12个共有峰,对13批益母草饮片标准汤剂分别进行相似度评价,其相似度均大于0.9.该研究中益母草饮片制备方法规范,指纹图谱相似度高,其方法精密度、稳定性和重复性良好,可为益母草配方颗粒质量控制提供参考.
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产速康合剂的质量控制研究
目的：建立产速康合剂质量控制的定性和定量方法。方法：采用薄层色谱对当归、川芎、益母草进行定性试验，采用高效液相色谱法对产速康合剂中盐酸益母草碱进行定量试验。结果：薄层色谱图谱中能清晰检出当归、川芎、益母草。进样量在0.02～0.1μg线性关系良好（r＝0.9997）；平均回收率为98.88%，RSD为0.89%。结论：该法专属性强，简单易行，可用于产速康合剂的质量控制。
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盐酸益母草碱对药流后大鼠内皮素介导的信号通路的影响
目的 研究盐酸益母草碱对药流后大鼠内皮素(ET)及其受体介导的信号通路的影响.方法 早孕大鼠灌服米非司酮和米索前列醇,制备不完全流产模型,连续给药7d后,取左侧子宫一半,用于ET和NO的测定；剩余部分冻存待测ET受体.培养右侧子宫平滑肌细胞,用于PLC的活性、[Ca2+]i和PKC的检测.结果 盐酸益母草碱能明显提高血清ET水平及ET/NO比值,上调ETAmRNA及PKC蛋白的表达,增强PLC的活性；但对ETB mRNA的表达没有明显影响.结论盐酸益母草碱能通过调节ET介导的信号通路来促进药流后大鼠子宫的收缩,从而抑制其异常出血.
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反相离子对色谱法测定不同规格益母草中盐酸益母草碱的含量
目的:建立了反相离子对色谱法测定益母草中盐酸益母草碱含量的方法.方法:Agilent SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%辛烷磺酸钠的0.1%磷酸溶液(24:76);检测波长:277 nm;流速:1.0 mL·min-1.结果:盐酸益母草碱进样量在0.028 66～1.433μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.0%,RSD为0.6%.结论:此方法简便、灵敏度高,重现性好,可用于益母草的质量控制.
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HPLC-ESI-MS/MS同时测定八珍益母丸中9种有效成分
目的 建立了HPLC-ESI-MS/MS法同时测定八珍益母丸中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、党参炔苷、毛蕊花糖苷、白术内酯Ⅰ和猪苓酸C9种有效成分的分析方法.方法 HPLC法采用色谱柱Waters Atlantis T3柱(150 mm×4.6 mm,3.0 μm),流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.5 mL/min,进样量10μL;质谱采用电喷雾离子源、负离子模式(ESI-),通过多反应监测(MRM)同时对八珍益母丸中的9种有效成分进行定量分析.结果 八珍益母丸中9种有效成分盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、党参炔苷、毛蕊花糖苷、白术内酯Ⅰ和猪苓酸C的线性范围分别为0.04～40.00 μg/mL (r=0.999 2)、0.04～40.00 μg/mL (r=0.999 3)、1.0～100.0 μg/mL (r=0.999 1)、0.2～20.0 μg/mL (r=0.999 6)、0.2～20.0 μg/mL (r=0.997 5)、0.05～5.00 μg/mL (r=0.999 4)、0.1～10.0 μg/mL (r=0.999 4)、0.1～10.0 μg/mL (r=0.999 2)、0.1～10.0 μg/mL (r=0.999 2),平均加样回收率分别为99.7％、98.1％、98.5％、101.5％、99.5％、98.4％、99.1％、101.2％、100.1％,RSD值分别为0.52％、0.64％、1.08％、1.12％、0.39％、0.74％、0.91％、0.54％、0.47％.9批八珍益母丸样品中9种有效成分的质量分数分别为0.423～0.752、0.505～0.722、0.613～1.300、0.102～0.184、0.195～0.255、0.021～0.035、0.034～0.072、0.039～0.063、0.051～0.095 mg/g.结论 所建立的分析方法简单、灵敏度高、专属性好,可应用于不同厂家、不同生产批次的八珍益母丸中有效成分的测定及质量控制.
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变波长RP-HPLC法同时测定调经丸中12种成分
目的 建立同时测定调经丸中芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、盐酸益母草碱、橙皮苷、丹皮酚、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ、柠檬苦素、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸12种成分的RP-HPLC方法.方法 采用RP-HPLC法,色谱柱为VenusilMPC18 (250 mm×4.6 mm,5.0 μm);流动相为乙醇-乙腈(40∶60,A)和0.2％磷酸水溶液(B),梯度洗脱,体积流量0.8mL/min;柱温45℃.结果 12种指标成分芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、盐酸益母草碱、橙皮苷、丹皮酚、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ、柠檬苦素、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸分别在0.5～50.0 mg/L (r=0.999 5)、0.1～10.0 mg/L (r=0.999 1)、0.2～20.0 mg/L (r=0.999 2)、0.3～30.0 mg/L (r=0.999 3)、4.0～400.0 mg/L (r=0.999 8)、0.2～20.0 mg/L (r=0.999 1)、0.6～60.0 mg/L (r=0.999 4)、1.5～150.0 mg/L (r=0.999 8)、7.0～700.0 mg/L (r=0.999 9)、0.5～50.0 mg/L (r=0.999 3)、0.5～50.0 mg/L (r=0.999 4)、1.0～100.0 mg/L (r=0.999 6)与峰面积呈良好的线性关系;精密度良好,RSD≤0.97％;重复性良好,RSD≤1.25％;加样回收率在98.5％～103.5％,RSD≤1.24％.供试品溶液在室温条件下24 h内稳定,RSD≤1.09％.12批次供试品中芍药苷、毛蕊花糖苷、阿魏酸、盐酸益母草碱、橙皮苷、丹皮酚、黄芩苷、川续断皂苷Ⅵ、柠檬苦素、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ、茯苓酸质量分数分别为4.328～4.688、0.033～0.054、0.073～0.091、0.177～0.199、0.243～0.283、0.043～0.069、1.144～1.173、0.037～0.061、0.094～0.126、0.127～0.157、0.155～0.179、0.285～0.327 mg/g.结论 所建立的方法快速、灵敏度高、准确度高、专属性好,为调经丸的质量控制提供依据.
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不同采收阶段益母草的质量评价
目的:通过对不同产地、不同采收阶段的益母草进行测定,评价市场上益母草的质量情况.方法:通过外观性状判断益母草的采收阶段,采用薄层色谱法对益母草中黄酮类成分进行鉴别;采用HPLC法对益母草进行特征图谱鉴别;采用HPLC法测定盐酸水苏碱和盐酸益母草碱的含量.结果:益母草中总黄酮类成分、盐酸水苏碱及盐酸益母草碱随着采收时间的不同而呈现明显差异.结论:营养期的益母草质量好,其次是童子期,花期及果期质量差.
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反离子对色谱法测定肾炎1号片中盐酸益母草碱的含量
目的:建立反相离子对色谱法测定肾炎1号片中盐酸益母草碱含量的方法.方法:Agilent SB -C18柱(4.6mm ×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.4％辛烷磺酸钠的0.1％磷酸溶液(24∶76);检测波长:277nm;流速:1.0ml/min.结果:盐酸益母草碱进样量在33.6～672.0 ng范围内呈良好的线性关系(r=1,n=6),平均回收率为99.55％(n=9),RSD为1.78％.结论:此方法简便、灵敏度高,重现性好,可用于肾炎1号片中盐酸益母草碱的检测.
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离子对色谱法测定产速康合剂中盐酸益母草碱的含量
目的:建立产速康合剂中盐酸益母草碱含量的测定方法.方法:采用反相离子对色谱法,使用WondaSil C18-WR(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,以0.018mol/L辛烷磺酸钠溶液(用磷酸调节pH值至2.0)-乙腈(74∶26)作为流动相,检测波长277nm,流速1.0mL· min-1,柱温为30℃.结果:盐酸益母草碱在8.111～202.8μg·mL-1范围内线性较好(r=0.9999),平均回收率为99.94％(RSD为0.33％).结论:该方法简便、快捷、可靠、准确度高、重复性好,结果稳定,可用于产速康合剂中盐酸益母草碱含量的测定.
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离子对色谱法同时测定益母草片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱
目的 采用离子对色谱法测定益母草片中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的量.方法 色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相为0.010 mol/L辛烷磺酸钠溶液(用磷酸溶液调至pH 2.0)和乙腈,梯度洗脱;检测波长为192 nm(盐酸水苏碱),218 nm(盐酸益母草碱),体积流量为1.0 mL/min,柱温35℃.结果 盐酸水苏碱在18.29 ～914.5 mg/L范围内,峰面积与质量浓度呈良好线性关系(r=0.999 96,n=7);盐酸益母草碱在0.645 3～32.26 mg/L范围内,峰面积与质量浓度呈良好线性关系(r=0.999 97,n=7).盐酸水苏碱平均回收率(n=9)为99.7％,RSD为1.4％;盐酸益母草碱为98.2％,RSD为0.7％.结论 该方法准确、稳定、快速、通用,可用于益母草片质量控制.
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HPLC法同时测定益母草中4种成分
目的 建立HPLC法同时测定益母草Leonurus japonicas Houtt.药材中盐酸益母草碱、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷的含有量.方法 益母草70％乙醇提取液的分析采用HPLC-PDA、Waters XBridgeTM C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm);以甲醇-水(含0.1％甲酸)为流动相;体积流量1.0 mL/min;检测波长277 nm;柱温30℃.采用灰色关联度分析(GRA)对其进行综合评价.结果 盐酸益母草碱、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷分别在3.73～466 (r=1.000 0)、0.40～198.4(r=0.999 9)、0.50～47.92(r=0.999 4)、1.83～109.68 (r=0.9996) pg/mL的范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为98.25％、99.46％、98.61％、98.91％,RSDs分别为1.97％、2.67％、2.19％、2.17％.同一产地中的不同成分、不同产地中的同一成分均存在一定差异,河南-南阳的益母草样品综合品质评价优.结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于益母草的质量控制.
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基于下丘脑-垂体-卵巢轴研究盐酸益母草碱对药物流产后子宫异常出血作用机制的实验研究
目的 通过观察盐酸益母草碱(Leo)对药物流产后大鼠下丘脑-垂体卵巢轴(HPOA)内分泌功能的影响,探讨Leo抑制子宫异常出血作用的机制.方法 采用早孕大鼠灌服米非司酮(8.3 mg/kg)和米索前列醇(100μg/kg)造成不完全流产大鼠模型,用放射免疫分析法(RIA)观察其血清黄体生成激素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平的变化；免疫组化法检测下丘脑中促性腺激素释放激素(GnRH)的表达；RT-PCR检测子宫组织中孕酮受体(PR)、雌二醇受体(ERα、ERβ)mRNA的表达.结果 Leo明显提高大鼠血清中LH、FSH的水平和下丘脑中GnRH蛋白的表达,明显上调药流后大鼠子宫组织中ERα、ERβ mRNA的表达(P＜0.05或＜0.01),而对PRmRNA没有明显影响(P＞0.05).结论 Leo能明显抑制药物流产后大鼠子宫异常出血,其机制可能与其调节或改善HPOA神经内分泌功能紊乱及子宫ERα、ERβ水平的变化密切相关.
关键词： 盐酸益母草碱 下丘脑-垂体-卵巢轴 药物流产 大鼠 -
花期对益母草药材中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量的影响
目的 研究开花对益母草药材中盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量的影响.方法 在同一地区不同时期采收益母草药材样品,按照药典方法对其中的盐酸水苏碱和盐酸益母草碱含量进行测定,纵向比较.结果 开花过程中益母草药材中盐酸水苏碱及盐酸益母草碱的含量不断降低.结论 开花对益母草药材中盐酸水苏碱及益母草碱含量影响较大,花后期因益母草碱不达标不建议使用.
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益母草碱对缺糖/缺氧损伤PC12细胞的保护作用
目的 研究盐酸益母草碱对缺糖/缺氧损伤大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株(PC12)的保护作用.方法 采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)+缺糖建立PC12细胞缺糖/缺氧损伤模型(oxygen and glucose deprivation,OGD),MTT法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测各组细胞内活性氧含量.结果 与模型组相比,25 μmol·L-1盐酸益母草碱显著提高细胞存活率,降低细胞内的活性氧含量.结论 盐酸益母草碱对PC12 细胞缺糖/缺氧损伤模型有明显的保护作用.
关键词： 盐酸益母草碱 缺糖/缺氧 大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞株 -
益母草成分盐酸益母草碱对小鼠急性毒性实验研究
目的 研究益母草成分盐酸益母草碱(Leonurine hydrochloride)灌胃(ig)给药的小鼠急性毒性反应.方法 经预实验确定按大给药量法设计实验,小鼠40只,雌雄(♀♂)各半,随机分为给药组和阴性对照组(给药组和阴性对照组小鼠♀♂各10只),给药组以盐酸益母草碱5000 mg·kg-1为大给药剂量,20mL·kg-1为给药容量,在24h内一次灌胃,阴性对照组给予等容积的0.5％ CMC-Na溶液,给药后自由饮食饮水,连续观察14d小鼠体质量、行为活动以及死亡情况.结果 给药组♀♂小鼠观察期内体质量、行为活动及实验结束后的系统剖检与阴性对照组比较均无明显异常变化,未见动物死亡.结论 盐酸益母草碱灌胃给药对小鼠的LD50和MTD(大耐受量)均大于5000 mg·kg-1,提示盐酸益母草碱急性毒性甚低.
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正交试验法优选益母草化瘀颗粒提取工艺
目的:优选益母草化瘀颗粒提取工艺.方法:采用L9(34)正交设计法,以加水量、煎煮次数、煎煮时间为因素,以干膏率和盐酸益母草碱的含量作为评价指标,优选佳的水提工艺.结果益母草化瘀颗粒的佳提取工艺为:第1次加8倍量水,提取2h,第2次加6倍量水,提取1h,第3次加4倍量水,提取1h.结论:优化后工艺经验证,结果稳定可靠,为益母草化瘀颗粒大生产和质量标准的制定奠定了基础.
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盐酸益母草碱对破骨细胞生成的作用及机制研究
目的 探究盐酸益母草碱(LH)对破骨细胞生成的作用及机制.方法 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色实验和MTT实验检测LH对核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7细胞分化的作用;Western blotting检测LH对RANKL诱导的RAW264.7细胞中核因子κB抑制蛋白(IκBα)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化影响.结果 TRAP染色实验表明,与RANKL组比较,不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)LH能够显著抑制破骨细胞分化,差异均有统计学意义(P<0.01);MTT实验表明,与对照组(0.0μmol/L LH处理组)比较,其他不同浓度LH能够显著抑制破骨细胞增殖,差异均有统计学意义(P<0.05),并且呈时间、剂量依赖性;Western blotting实验表明,与RANKL处理组比较,LH处理之后可以显著抑制p-IκBα,p-PI3K和p-AKT蛋白的表达,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 LH可以通过下调IκBα,、PI3K和Akt蛋白的磷酸化从而抑制IκBα、PI3K和Akt蛋白活性,抑制破骨细胞生成.其可能用于临床治疗破骨细胞相关疾病如骨质疏松症.
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益母草颗粒中盐酸水苏碱与盐酸益母草碱的含量测定
目的 建立测定益母草颗粒中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱含量的HPLC测定法.方法 采用高效液相色谱法,以Kromasil 100-5NH2(Dimensions 250×4.6 mm,5μm)E78824和AgilentTC-C18(2)(250×4.6 mm,5μm)588925-902为色谱柱,检测波长:192 nm和277 nm,流动相:乙腈-水(80∶ 20)、乙腈-0.3％庚烷磺酸钠的0.1％磷酸溶液(24:76),流速为1.0 mL/min.理论板数:按盐酸水苏碱峰计算应不低于5000、按盐酸益母草碱峰计算应不低于8000.结果 盐酸水苏碱在0.18～1.08 mg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.99998,平均回收率为99.6％,RSD小于2.0％;盐酸益母草碱在7～41μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.99998,平均回收率为99.8％,RSD小于2.0％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高、重现性好,适用于益母草中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱的含量测定.
