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茯苓三萜类化合物在人源Caco-2细胞单层模型中的吸收研究
目的:研究中药茯苓中3-表去氢土莫酸(3-epidehydrotumulosic acid,EDHTA)、猪苓酸C(polyporenicacid C,PPAC)和6α-羟基猪苓酸C(6α-hydroxypolyporenic acid C,HPPA)在人肠的吸收.方法:采用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型研究EDHTA,PPAC和HPPA由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)、BL侧到AP侧2个方向的转运过程.应用高效液相色谱法分离、紫外检测法对上述3个化合物进行定量分析,计算转运参数和表观渗透系数,并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较.结果:EDHTA,PPAC和HPPA由AP侧到BL侧的表观渗透系数(Papp)值分别为(9.99±1.08)×10-6、(10.06±0.53)×10-6和(3.32±0.66)×10-6 cm·s-1;由BL侧到AP侧的Papp值分别为(17.76±0.91)×10-6、(19.23±1.16)×10-6和(8.19±0.57)×10-6 cm·s-1.与本实验中在Caco-2细胞单层模型上呈良好吸收的阳性对照药普萘洛尔的Papp值(1.45×10-5 cm·s-1)和呈难于吸收的阳性对照药阿替洛尔的Papp值(4.22×10-7 cm·8-1)比较,EDHTA和PPAC与普萘洛尔在同一数量级;HPPA介于普萘洛尔和阿替洛尔之间.EDHTA、PPAC和HPPA的Papp A→B/Papp B→A比值分别为0.56,0.52和0.41;EDHTA,PPAC和HPPA外流分别是摄取的1.78,1.91,2.47倍.结论:EDHTA,PPAC和HPPA可以通过小肠上皮细胞被动吸收进入体内,EDHTA和PPAC属于良好吸收的化合物;HPPA属于中等吸收的化合物.EDHTA、PPAC和HPPA在Caco-2细胞单层模型中的转运可能存在外流机制.
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茯苓发酵菌丝体中3种主要三萜酸类成分积累动态研究
目的:考察茯苓发酵菌丝体中3种主要三萜酸类成分动态积累变化.方法:建立茯苓菌的液体培养方法,采用RP-HPLC测定茯苓发酵菌丝体中去氢土莫酸(DTA),3-表去氢土莫酸(eDTA)和猪苓酸C(PAC)3种主要三萜酸类成分的含量,色谱条件如下:PLATISIL ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)；流动相乙腈-0.5％磷酸水(80:20)；流速1.0 mL·min-1;检测波长242 nm.结果:在培养后的第8天,生物量达到大值,但是3种主要三萜酸类成分(DTA,eDTA,PAC)的含量在培养周期内呈持续上升趋势,第17天测得3种成分质量分数分别为1.2％ (DTA),0.4％ (eDTA),1.0％ (PAC),均显著高于栽培茯苓中对应成分[0.2％(DTA),0.12％ (eDTA),0.16％ (PAC)].另外,3种成分含量比例的线性回归分析结果表明,DTA与eDTA和PAC的含量比例呈显著负相关,相关系数(R2)分别为0.858 7,0.971 7.该结果表明DTA为茯苓中三萜酸类成分生合成途径中的重要中间体.结论:发酵培养17 d的茯苓菌丝体中DTA,eDTA,PAC含量之和为栽培茯苓中含量的5.55倍,说明在本发酵培养条件下,发酵培养生产茯苓中三萜酸类有效成分技术可行.
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HPLC测定不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸
目的 建立一种测定茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸的方法,并比较不同产地茯苓中猪苓酸C和去氢土莫酸量的差异.方法 应用HPLC法测定猪苓酸C、去氢土莫酸的量,色谱柱为Ailtima-C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水-磷酸(70 : 29.85 : 0.15);体积流量为1 mL/min;检测波长为244 nm;进样量为20 μL;柱温为30℃.结果 测得8个产地茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量分别为0.188 6～0.575 6、0.113 7～0.216 7 mg/g,其中以浙江产茯苓药材中猪苓酸C、去氢土莫酸量高,四川次之,其他几个产地的量相对较低;猪苓酸C定量测定的线性范围为0.179 2～2.240 0 μg(r2=0.999 9).平均加样回收率为98.88%,RSD为1.77%;去氢土莫酸测定的线性范围为0.137 2～1.715 0(r2=1),平均加样回收率为97.76%,RSD为0.62%.结论 所建立的色谱方法可以简便、准确测定茯苓中猪苓酸C、去氢土莫酸的量,重现性好;各产地茯苓中的猪苓酸C、去氢土莫酸的量差别较大,有必要建立猪苓酸C、去氢土莫酸的定量控制方法.
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HPLC-ESI-MS/MS同时测定八珍益母丸中9种有效成分
目的 建立了HPLC-ESI-MS/MS法同时测定八珍益母丸中盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、党参炔苷、毛蕊花糖苷、白术内酯Ⅰ和猪苓酸C9种有效成分的分析方法.方法 HPLC法采用色谱柱Waters Atlantis T3柱(150 mm×4.6 mm,3.0 μm),流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.5 mL/min,进样量10μL;质谱采用电喷雾离子源、负离子模式(ESI-),通过多反应监测(MRM)同时对八珍益母丸中的9种有效成分进行定量分析.结果 八珍益母丸中9种有效成分盐酸水苏碱、盐酸益母草碱、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、党参炔苷、毛蕊花糖苷、白术内酯Ⅰ和猪苓酸C的线性范围分别为0.04～40.00 μg/mL (r=0.999 2)、0.04～40.00 μg/mL (r=0.999 3)、1.0～100.0 μg/mL (r=0.999 1)、0.2～20.0 μg/mL (r=0.999 6)、0.2～20.0 μg/mL (r=0.997 5)、0.05～5.00 μg/mL (r=0.999 4)、0.1～10.0 μg/mL (r=0.999 4)、0.1～10.0 μg/mL (r=0.999 2)、0.1～10.0 μg/mL (r=0.999 2),平均加样回收率分别为99.7％、98.1％、98.5％、101.5％、99.5％、98.4％、99.1％、101.2％、100.1％,RSD值分别为0.52％、0.64％、1.08％、1.12％、0.39％、0.74％、0.91％、0.54％、0.47％.9批八珍益母丸样品中9种有效成分的质量分数分别为0.423～0.752、0.505～0.722、0.613～1.300、0.102～0.184、0.195～0.255、0.021～0.035、0.034～0.072、0.039～0.063、0.051～0.095 mg/g.结论 所建立的分析方法简单、灵敏度高、专属性好,可应用于不同厂家、不同生产批次的八珍益母丸中有效成分的测定及质量控制.
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桂枝茯苓胶囊中三萜类成分UPLC指纹图谱研究
目的 建立桂枝茯苓胶囊(GFC)三萜类成分UPLC指纹图谱方法,为评价GFC的质量提供新方法.方法 采用Agilent Zorbox Eclipse Plus HD C18(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.2 mL/min,柱温30℃,检测波长为210 nm.采用Q-TOF/MS对指纹图谱中共有峰进行指认.结果 得到分离度和重复性良好的GFC三萜类成分指纹图谱,确定了20个共有峰,其中1～7、10、12、14～17号峰共13个共有峰来自于茯苓,8、11号峰来自于桂枝,9号峰来自于白芍和牡丹皮,13号峰来自于桃仁、白芍、牡丹皮和桂枝.10批成品指纹图谱相似度在0.90以上.UPLC-Q-TOF/MS共鉴定出15个成分,分别为常春藤皂苷(1)、去氢土莫酸(2)、土莫酸(3)、猪苓酸C(4)、3-表去氢土莫酸(6)、茯苓酸D(7)、α-亚麻酸(9)、去氢茯苓酸(10)、齐墩果酸(11)、茯苓酸(12)、亚油酸(13)、棕榈油酸甲酯(15)、棕榈酸(16)、棕榈酸乙酯(17)、胡萝卜苷(18).结论 建立的UPLC指纹图谱有较好的精密度、重复性和稳定性,适用于GFC的质量控制.
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HPLC法同时测定桂枝茯苓胶囊中4种茯苓三萜酸成分
目的 建立HPLC法同时测定桂枝茯苓胶囊(GFC)中4种茯苓三萜酸成分(去氢土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢茯苓酸、去氢茯苓酸)的方法.方法 色谱柱为Diamonsic C18柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2％甲酸水溶液;梯度洗脱:0～70min,50％～85％乙腈;70～80min,85％～100％乙腈;80～90 min,100％乙腈;检测波长242 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温40℃.结果 去氢上莫酸、猪苓酸C、3-表去氢茯苓酸、去氢茯苓酸在HPLC中达到基线分离,线性范围分别为0.408～2.04 (r=0.999 9)、0.192～0.96 (r=0.999 5)、0.078～0.39 (r=0.999 5)、0.075 6～0.378 (r=0.999 5)μg/mL;平均加样回收率分别为97.5％、98.5％、97.2％、102.3％,RSD分别为1.4％、1.6％、1.2％、1.8％;测定了6批GFC,结果显示去氢土莫酸平均量为0.070 mg/粒,猪苓酸C平均量为0.015 mg/粒,3-表去氢茯苓酸平均量为0.030 mg/粒,去氢茯苓酸平均量为0.061 mg/粒.结论 该方法可行、重现性好,可用于GFC的质量控制.
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HPLC法测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸
目的 建立HPLC波长切换法同时测定威喜丸中猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸的方法.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.05％磷酸溶液,梯度洗脱;0～24.0 min在248 nm波长下检测猪苓酮B和猪苓酮A,24.0～50.0 min在210nm波长下检测去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;进样量为10 μL.结果 猪苓酮B、猪苓酮A、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸分别在5.79～115.80、1.66～33.20、3.28～65.60、7.07～141.40、1.46～29.20、0.88～17.60 μg/mL与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为98.75％、97.60％、98.23％、99.49％、97.10％、96.81％,RSD值分别为0.75％、1.66％、1.44％、0.90％、1.15％、1.38％.结论 本方法简便、准确、重复性好,为威喜丸的质量控制提供了实验依据.
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HPLC法同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸
目的 建立高效液相同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢上莫酸、猪苓酸C和茯苓酸成分的分析方法.方法 补益资生丸甲醇提取,分析采用Hypersil C18色谱柱;以乙腈-0.05％磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;体积流量1.2 mL/min;白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的检测波长为220 nm,去氢土莫酸、猪苓酸C检测波长为241 nm,茯苓酸为210 nm.结果 白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸质量浓度分别在4.12～82.40 μg/mL (r=0.999 8)、6.55～ 131.00μg/mL(r=0.999 4)、4.30～86.00 μg/mL(r=0.999 9)、5.35 ～ 107.00μg/mL(r=0.999 2)、4.40～88.00μg/mL (r=0.9997)时与其峰面积线性关系良好;平均加样回收率(n=6)分别为99.0％、97.6％、99.1％、97.0％、97.9％,RSD分别为1.2％、1.6％、1.2％、0.91％、1.5％.结论 暂定本品标准为每丸中含白术内酯Ⅲ不得低于0.26 mg,白术内酯Ⅰ不得低于0.15 mg,去氢土莫酸不得低于0.40 mg,猪苓酸C不得低于0.14 mg,茯苓酸不得低于0.20 mg.
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HPLC法同时测定小儿消积化虫散中6种成分的含量
目的:建立HPLC梯度洗脱法同时测定小儿消积化虫散中天名精内酯酮、莪术二酮、莪术醇、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸的含量.方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为210 nm,流速为0.9 ml·min-1,柱温为30℃,进样体积为10μl.结果:天名精内酯酮、莪术二酮、莪术醇、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸分别在1.19～29.75,2.46～61.50,1.52～38.00,3.09～77.25,0.87～21.75,3.78～94.50μg·ml-1范围内线性关系良好,r均≥0.9992;平均加样回收率分别为97.76％,98.07％,98.70％,99.49％,96.98％和100.07％,RSD分别为1.31％,1.06％,1.26％,0.75％,1.41％和0.62％(n=6).结论:本文所建立的方法操作简便、数据准确、重复性好,能够同时对小儿消积化虫散中6种成分进行含量测定,为提高和完善小儿消积化虫散的质量控制标准提供了有效的方法.
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HPLC法同时测定杜仲补天素片中6种成分的含量
目的:建立同时测定杜仲补天素片中麦角甾苷、吉奥诺苷B1、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Kromasil C18,流动相为乙腈-0.2％磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 mL/min,检测波长为330 nm(麦角甾苷和吉奥诺苷B1)、210 nm(去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸),柱温为35℃,进样量为10μL.结果:麦角甾苷、吉奥诺苷B1、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸检测质量浓度线性范围分别为3.71～74.20 μg/mL(r=0.999 9)、4.35～87.00 μg/mL(r=0.999 5)、3.86～77.20μg/mL(r=0.999 9)、5.05～101.00 μg/mL(r=0.999 1)、4.20～84.00 μg/mL(r=0.999 7)、4.73～87.40μg/mL(r=0.999 6);定量限分别为0.322、0.187、0.105、0.381、0.214、0.452μg/mL,检测限分别为0.108、0.059、0.032、0.131、0.072、0.149 μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2.0％;加样回收率分别为96.20％～99.53％(RSD=1.23％,n=6)、96.99％～100.67％ (RSD=1.47％,n=6)、96.64％～100.08％ (RSD=1.28％,n=6)、97.47％～100.59％ (RSD=1.18％,n=6)、97.97％～100.83％(RSD=1.25％,n=6)、96.81％～99.61％(RSD=1.09％,n=6).结论:该方法操作简便、快速、准确,可用于杜仲补天素片中麦角甾苷、吉奥诺苷B1、去氢土莫酸、猪苓酸C、去氢茯苓酸和茯苓酸含量的同时测定.
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茯苓中三萜化合物的分离与鉴定
目的:分离茯苓药材中的三萜化舍物,并对其进行鉴定.方法:使用溶剂法和色谱技术对茯苓药材中三萜化合物进行分离纯化;根据理化常数和波谱数据对三萜化合物的结构进行鉴定.结果:从茯苓药材中分离得到乙酰茯苓酸和猪苓酸C2种三萜化合物.结论:本方法简便、快速,可为茯苓药材的质量控制提供科学依据.
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HPLC同时测定参苓白术胶囊中的5种有效成分
目的 采用HPLC法同时测定参苓白术胶囊中5种有效成份的含量.方法 采用梯度洗脱法测定制剂中去氢土莫酸、猪苓酸C、茯苓酸、薯蓣皂苷元和尿囊素的含量.结果 5.27～105.40 μg· mL-1(r=0.9998)去氢土莫酸、4.30 ～ 86.00 μg·mL-1(r =0.9995)猪苓酸C、5.25 ～105.00μg·mL-1(r=0.9997)茯苓酸、4.26～85.20 μg· mL-1(r=0.9994)薯蓣皂苷元和6.91 ～ 138.20 μg· mL-1(r=0.9999)尿囊素与其峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为97.77％、97.27％、98.13％、96.93％、99.37％,RSD分别为1.42％、1.07％、0.96％、1.10％、0.56％(n=6).结论 所用方法简便、快捷、重复性好,可用于该制剂的质量控制.
