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17-β雌二醇对原代人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响
目的:阐明雌二醇对内皮细胞一氧化氮(NO)生成及一氧化氮合酶(cNOS) 基因表达的影响.方法:观察雌二醇作用于原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一定时间(1～24 h)后的NO产量,采用Greiss反应测定代谢产物NO-2的量及Northern杂交技术分析雌二醇作用于HUVEC 18 hcNOS mRNA的表达.结果:100、30、10及1nmol*L-1的雌二醇作用下,HUVEC分别于1、4、12及18 h起,NO-2产量有明显增高.0.1nmol*L-1雌二醇作用24 h内,NO-2产量与对照组比较差异无统计学意义.Northern 杂交结果表明:1～100nmol*L-1 雌二醇可明显促进cNOS mRNA的表达;而0.1nmol*L-1雌二醇无此效应.结论:雌二醇可促进HUVEC NO的生成及cNOS基因的表达,可能为雌激素保护作用的重要机制,雌二醇作用的阈浓度可能在0.1～1nmol*L-1之间.
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雌孕激素联合疗法对绝经后妇女骨密度和血脂的影响
目的:研究雌孕激素联合方案(雌二醇2 mg/醋酸炔诺酮1 mg)对绝经后妇女心血管危险因素(血脂、血压和体重),骨密度,绝经症状和阴道出血情况的影响.方法 :采用双盲、随机、安慰剂对照的平行临床研究,安慰剂及激素组各60例均治疗12个月.结果: (1)用药后激素组TC、TG、LDL-C分别下降13.3%(P<0.05)、8.2%、21.4%(P<0.001),HDL-C上升2.0%;安慰剂组用药后TC、LDL-C分别下降1.6%、13.2%,TG及HDL-C分别上升17.4%及17.8%,P>0.05.用药后两组间在调整基线后比较,激素组TC、TG明显低于安慰剂组(P<0.05),而HDL-C及LDL-C的变化无差异.两组患者用药前后血压及体重无明显变化.(2) 用药后激素组腰椎及髋关节骨密度(BMD)分别增加6%及3%(P<0.001),安慰剂组BMD分别增加1%及2%(P<0.05),用药后激素组与安慰剂组BMD相比差异均有显著性.(3)激素组对更年期症状评分的降低程度大于安慰剂组,但两组评分用药前后差异无显著性.(4)激素组突破出血在前3个月及后3个月的发生率分别为61.6%及22.8%,子宫内膜厚度>5 mm的患者内膜活检无增生.结论:雌孕激素联合使用能提高骨密度、预防骨质疏松,改善血脂,缓解更年期症状,防止子宫内膜增生.虽然用药的前3个月阴道出血率较高,但激素组无患者因阴道出血中断治疗.
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雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响
目的:研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,雌二醇对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)Ⅰ A,Ⅰ B mRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用,试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制. 方法:SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化, 17β-雌二醇( E2)处理培养细胞,观察 E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体Ⅰ A、Ⅰ B mRNA、碱性磷酸酶 (ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响,β- actin作内对照半定量 RT- PCR分析骨形态发生蛋白受体Ⅰ A,Ⅰ B mRNA的表达,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量. 结果:E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,且呈剂量依赖性,随 E2浓度增加( 0～ 1× 103 nmol/L) BMPR-Ⅰ A mRNA从 (27.0± 3.4)%降至 (17.0± 1.8)% ( t=5.2,P< 0.01)和 (9.3± 1.6)% (t=9.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA随 E2浓度增加而增加,从 (2.0± 0.8)%增至 (4.8± 1.5)% ( t=3.3,P< 0.05)和 (17.2± 2.2)% (t=13,P< 0.01). Northern blot 结果显示在上述 E2浓度时 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达从 4.21± 0.36降至 1.24± 0.10( t=18.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA的表达从 1.72± 0.11增至 3.73± 0.31( t=12.2,P< 0.01). ALP活性随 E2浓度增加而降低,从 (42.6± 2.5)U/g蛋白降至 (17.9± 2.0)U/g蛋白 ( t=15,P< 0.01) ,(10.8± 1.5)U/g蛋白( t=22,P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g蛋白( t=30,P< 0.01);细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而减少, Van Gieson染色由鲜红、淡红到黄色,红色越深,表明胶原越多. 结论:E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,降低 ALP的活性和Ⅰ型胶原含量,增加 BMPR-Ⅰ B mRNA的表达).
关键词： 雌二醇/药理学 骨髓基质细胞/细胞学 细胞培养 -
雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α1基因及成骨细胞生成的影响
目的研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的条件培养体系中, 17β-雌二醇( E2)对其核结合因子α 1 (Cbfα 1 )基因表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用.方法取自 1只 3月龄雌性 SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化.应用半定量 RT- PCR技术,观察不同浓度 E2对骨髓基质细胞分化过程中核结合因子α 1mRNA表达的影响,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量.结果 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 Cbfα 1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.E2浓度为 0,1× 10- 10, 1× 10- 8和 1× 10- 6mmol/L时, Cbfα 1 mRNA的表达量分别为 23.4%± 1.8%, 21.8%± 2.0%, 15.8%± 1.5% ( t=6.3, P< 0.01)和 5.8%± 0.8%( t=17.8, P< 0.01).Northern blot 结果显示 Cbfα 1 mRNA的表达量分别为 4.22± 0.11, 2.51± 0.12( t=21, P< 0.01), 1.88± 0.10( t=31, P< 0.01)和 1.17± 0.09( t=41, P< 0.01).ALP活性随 E2浓度增加而降低,在上述 E2浓度时, ALP活性分别为 (42.6± 2.5)U/g,(17.9± 2.0)U/g( t=15, P< 0.01) ,(10.8± 1.5) U/g( t=21, P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g( t=29, P< 0.01).细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而降低.结论 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 Cbfα 1mRNA的表达,减少成骨细胞的生成.
关键词： 雌二醇/药理学 骨髓基质细胞/细胞学 细胞培养 -
不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1和PPAR-γ2 mRNA表达的影响
背景:绝经后骨质疏松的病理生理机制尚未完全阐明,研究表明骨丢失与雌激素缺乏相关,后者可导致多种细胞因子生成增加,继而引起成骨细胞和破骨细胞生成增多,骨吸收增强.雌二醇能否改变骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1和PPAR-γ2 mRNA的表达进而影响其向成骨细胞分化尚不清楚.目的:研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中,17β-雌二醇对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2(PPAR-γ2)mRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用.设计:非随机对照研究.地点和对象:所有实验均在成都军区总医院检验科和成都百奥生物技术有限公司完成,分离骨髓基质细胞所需大鼠由成都中医药大学实验动物研究中心提供.干预:1,25(OH)2D3和地塞米松诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化,用不同浓度[(0～1)×10-6mol/L]雌二醇对细胞分化过程进行干预.主要观察指标:应用半定量RT-PCR及Northern blot技术,观察不同浓度雌二醇对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1及PPAR-γ2 mRNA表达的影响.结果:雌二醇能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1 mRNA的表达,雌二醇浓度为[(0～1)×10-6mol/L]时,Cbfα1 mRNA的表达量从(25.0±3.3)%降至(19.8±2.2)%(t=2.62,P＜0.05),(14.5±1.3)%(t=5.92,P＜0.01)和(6.5±1.9)%(t=9.72,P＜0.01);雌二醇能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR-γ2 mRNA的表达,在上述雌二醇浓度时,PPAR-γ2 mRNA的表达从(1.75±0.5)%增至(9.5±2.1)%(t=7.18,P＜0.01)和(19.3±3.0)%(t=11.5,P＜0.01);Northern blot结果显示随着雌二醇浓度的增加,Cbfα1 mRNA的表达量从4.42±0.39降至1.88±0.16(t=12.0,P＜0.01)和1.19±0.11(t=15.8,P＜0.01);PPAR-γ2mRNA的表达量从1.31±0.12增至2.81±0.22(t=10.5,P＜0.01)和4.02±0.36(t=14.2,P＜0.01).细胞ALP活性明显受雌二醇的抑制,在上述雌二醇浓度时ALP的活性从(42.6±2.5)降至(3.6 ±0.7)U/g蛋白(t=29,P＜0.01).Ⅰ型胶原含量均随雌二醇浓度增加而降低.结论:雌二醇抑制体外培养的骨髓基质细胞向成骨细胞分化而促进其向脂肪细胞分化.
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17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞C反应蛋白及其mRNA表达的影响
目的:探讨17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)生成的影响及其相关机制.方法:采用免疫细胞化学法观察17β-雌二醇对正常状态大鼠VSMCs CRP表达的影响,免疫印迹法检测其对Ang-Ⅱ刺激大鼠VSMCs CRP及p-ERK1/2表达的影响,RT-PCR方法检测其对Ang-Ⅱ刺激状态大鼠VSMCs CRP mRNA表达的影响.结果:本实验所选用17β-雌二醇浓度(1、10、100 nmol/L)不影响正常状态大鼠VSMCs形态及CRP表达,但呈浓度依赖性抑制Ang-Ⅱ刺激的大鼠VSMCs CRP(r=-0.834,P＜0.01)、p-ERK1/2(r=-0.712,P＜0.05)及CRP mRNA(r=-0.856,P＜0.01)的表达.结论:17β-雌二醇可以抑制Ang-Ⅱ刺激的大鼠VSMCs CRP及其mRNA表达,其作用机制与抑制ERK1/2信号转导通路相关.
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17β-雌二醇对神经干细胞分裂分化作用的观察
目的探讨雌激素对神经干细胞分裂分化的作用.方法大鼠神经干细胞培养模型加入剂量为10 mg/L 17β-雌二醇和10 mmol/L BrdU,分别在培养4、12 h取出细胞,进行免疫细胞化学标记.结果培养4 h,雌二醇组单位面积细胞总数和BrdU标记细胞与对照组比较差别无显著性(P=0.259, P=0.067),培养12 h,雌二醇组细胞BrdU胞核着色变浅,胞浆有着色,有40%的细胞可见明显突起,单位面积的细胞总数较对照组无显著性改变(P=0.06), BrdU标记细胞数目减少(P=0.003), 提示分裂细胞减少.另一方面,培养12 h时的雌二醇处理组BrdU免疫荧光阳性细胞的光密度(OD)显著高于对照组(P<0.01).结论 17β-雌二醇可以抑制大鼠神经干细胞分裂,促进神经干细胞分化.
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17-β雌二醇对受力后盆底功能障碍性疾病患者阴道壁成纤维细胞的生物学影响
目的 研究雌激素对体外培养的盆底功能障碍性疾病( pelvic floor dysfunction,PFD)患者阴道壁成纤维细胞受力后胶原蛋白Ⅰ (Col Ⅰ)、类赖氨酰氧化酶1(LOXL1)和纤维粘连蛋白(FN)表达的影响,探讨其在PFD发病中的作用.方法 选取2009年10月至2010年9月河北医科大学第二医院接受手术治疗的女性PFD患者的阴道壁组织12例.采用组织块法和酶消化法进行阴道壁成纤维细胞的原代培养,传代后进行细胞受力,加药,提取细胞mRNA,测定Col Ⅰ、LOXL1及FN的表达水平.结果 受力前、后Col Ⅰ(1.1872±0.0733 vs 1.5035±0.0733,t=-4.815,P＜0.01)、LOXLI(0.7724±0.1873 vs 1.0855±0.0805,t=-5.111,P＜0.01)表达上升,其差异有统计学意义.FN (0.4290±0.1168 vs 0.4215±0.0830)的表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).高浓度的17-β雌二醇作用下,Col Ⅰ (3.0809±0.1862)、LOXL1(1.5863±0.3241)、FN( 1.1418±1.0030)的表达均上升,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 17-β雌二醇使受力后的PFD患者阴道壁成纤维细胞合成细胞外基质( Extracellular matrix,ECM)成分增加.力和雌激素在PFD的发病机制中可能起了比较重要的作用.
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2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究
目的 探讨2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制.方法 以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位(△Ψm),比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性.结果 与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降(100%vs 70.5%),凋亡率明显增加(5.3%vs 40.5%):卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降(100%vs 61.8%),凋亡率明显增加(5.4%vs36.9%);此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的△Ψm,提高caspase-3和caspase-8活性.而预先以Z-VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应.结论 2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡.
关键词： 雌二醇/药理学 卵巢肿瘤/病理生理学 细胞凋亡/药物作用 -
β-雌二醇纳米粒抗肝纤维化的效果及对TGF-β1和CTGF的影响
目的 研究自行制备的肝靶向聚氰基丙烯酸正丁酯β-雌二醇纳米粒(E2-PBCA-NP)抗肝纤维化的效果,以及对猪血清诱导的肝纤维化动物模型肝脏TGF-β1、CTGF表达的影响.结果 将SD大鼠随机分成5组,除正常对照外,其余4组均腹腔注射猪血清(0.5 ml/次,2次/周)构建大鼠免疫性肝纤维化模型.β-雌二醇治疗组、β-雌二醇纳米粒治疗组、空白纳米粒组在第9周给予腹腔注射干预药物,2次/周;在12周末处死老鼠,Masson染色观察肝脏纤维化改变,RT-PCR检测肝组织中TGF-β1和CTGFm-RNA的含量,免疫组化观察TGF-β1及CTGF蛋白的表达.结果 与模型组比较,β-雌二醇纳米粒和13一雌二醇治疗组均能显著逆转猪血清诱导的肝纤维化,肝纤维化分期好转(P<0.05);β-雌二醇纳米粒治疗组与β-雌二醇治疗组2组比较差异有统计学意义(P<0.05);β-雌二醇纳米粒治疗组与β-雌二醇治疗组肝组织TGF-β1、CTGF mRNA和蛋白的表达下降(P<0.01),但β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒治疗组之间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 纳米化后的β-雌二醇仍具有抗肝纤维的作用,与无纳米化B.雌二醇比较,抗肝纤维的作用更强.β-雌二醇纳米粒能够抑制TGF-β1及其下游信号CTGF的表达.
关键词： 雌二醇/药理学 肝硬化 转化生长因子β 胞间信号肽类和蛋白质类 纳米结构 -
雌二醇预测卵巢的反应性探讨
目的:探讨促排卵周期雌二醇(E2)对卵巢功能的反应性.方法:对69例在开封市妇产医院不孕症科治疗的患者,根据基础E2水平分两组:研究组29例,E2＞290 pmol/L;对照组40例,E2＜290 pmol/L,观察两组对卵巢的反应性.结果:研究组窦细胞个数、成熟卵泡个数、用尿促性腺激素(HMG)的量及用药天数有统计学差异(P＜0.05).结论:E2对预测卵巢的的储备功能和反应性有参考价值.
