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雌二醇对骨形态发生蛋白受体表达的影响
目的:研究骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,雌二醇对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)Ⅰ A,Ⅰ B mRNA表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用,试阐明绝经后高转换骨代谢始动环节的可能机制. 方法:SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代培养后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化, 17β-雌二醇( E2)处理培养细胞,观察 E2对骨髓基质细胞分化过程中骨形态发生蛋白受体Ⅰ A、Ⅰ B mRNA、碱性磷酸酶 (ALP)活性和Ⅰ型胶原合成的影响,β- actin作内对照半定量 RT- PCR分析骨形态发生蛋白受体Ⅰ A,Ⅰ B mRNA的表达,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量. 结果:E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,且呈剂量依赖性,随 E2浓度增加( 0～ 1× 103 nmol/L) BMPR-Ⅰ A mRNA从 (27.0± 3.4)%降至 (17.0± 1.8)% ( t=5.2,P< 0.01)和 (9.3± 1.6)% (t=9.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA随 E2浓度增加而增加,从 (2.0± 0.8)%增至 (4.8± 1.5)% ( t=3.3,P< 0.05)和 (17.2± 2.2)% (t=13,P< 0.01). Northern blot 结果显示在上述 E2浓度时 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达从 4.21± 0.36降至 1.24± 0.10( t=18.2,P< 0.01); BMPR-Ⅰ B mRNA的表达从 1.72± 0.11增至 3.73± 0.31( t=12.2,P< 0.01). ALP活性随 E2浓度增加而降低,从 (42.6± 2.5)U/g蛋白降至 (17.9± 2.0)U/g蛋白 ( t=15,P< 0.01) ,(10.8± 1.5)U/g蛋白( t=22,P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g蛋白( t=30,P< 0.01);细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而减少, Van Gieson染色由鲜红、淡红到黄色,红色越深,表明胶原越多. 结论:E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 BMPR-Ⅰ A mRNA的表达,降低 ALP的活性和Ⅰ型胶原含量,增加 BMPR-Ⅰ B mRNA的表达).
关键词： 雌二醇/药理学 骨髓基质细胞/细胞学 细胞培养 -
雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α1基因及成骨细胞生成的影响
目的研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的条件培养体系中, 17β-雌二醇( E2)对其核结合因子α 1 (Cbfα 1 )基因表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用.方法取自 1只 3月龄雌性 SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化.应用半定量 RT- PCR技术,观察不同浓度 E2对骨髓基质细胞分化过程中核结合因子α 1mRNA表达的影响,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量.结果 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 Cbfα 1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.E2浓度为 0,1× 10- 10, 1× 10- 8和 1× 10- 6mmol/L时, Cbfα 1 mRNA的表达量分别为 23.4%± 1.8%, 21.8%± 2.0%, 15.8%± 1.5% ( t=6.3, P< 0.01)和 5.8%± 0.8%( t=17.8, P< 0.01).Northern blot 结果显示 Cbfα 1 mRNA的表达量分别为 4.22± 0.11, 2.51± 0.12( t=21, P< 0.01), 1.88± 0.10( t=31, P< 0.01)和 1.17± 0.09( t=41, P< 0.01).ALP活性随 E2浓度增加而降低,在上述 E2浓度时, ALP活性分别为 (42.6± 2.5)U/g,(17.9± 2.0)U/g( t=15, P< 0.01) ,(10.8± 1.5) U/g( t=21, P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g( t=29, P< 0.01).细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而降低.结论 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 Cbfα 1mRNA的表达,减少成骨细胞的生成.
关键词： 雌二醇/药理学 骨髓基质细胞/细胞学 细胞培养 -
差速贴壁法分离培养早期人胚骨髓间充质干细胞
目的:探讨差速贴壁法从早期人胚股骨分离、纯化骨髓间充质干细胞(MSCs)的可行性,并观察培养细胞是否向神经元样细胞诱导分化.方法:取2～3月龄新鲜健康流产人胚股骨,切碎,接种玻璃培养瓶内培养8～12 h,待较多的成纤维细胞贴壁,立刻将未贴壁细胞转种至塑料培养瓶培养,并多次传代;用甲氧酚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)诱导培养的细胞,免疫细胞化学方法检测诱导后细胞神经元烯醇化酶(NSE)、神经巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达情况.结果:原代培养3 d可见塑料培养瓶内有长梭形细胞生长,至第10天前后形成集落样克隆,传至第4代后呈单层漩涡状排列的长梭形的成纤维样细胞,已无明显细胞克隆形成,经多次传代,细胞保持良好的增殖能力和稳定的性状;免疫细胞化学方法显示未诱导细胞NSE、Nestin、GFAP阴性,诱导后细胞NSE、Nestin呈阳性,GFAP阴性,间接证实培养所得细胞是MSCs.结论:差速贴壁培养法从早期人胚股骨中分离纯化MSCs,去除可能的成纤维细胞污染,是简便有效的,可供有关研究参考选择.
