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黄芪注射液体外对大鼠血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2活性的抑制作用
目的:探讨黄芪对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的抑制作用及其调节机制.方法:以黄芪注射液刺激体外培养的SD大鼠VSMC,Zymography法检测培养细胞上清液中MMP-2的活性,Western印迹法观察MMP-2蛋白水平变化.结果:黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性,且此作用呈浓度依赖性.结论:黄芪在体外抑制大鼠VSMC分泌MMP-2的活性,此作用为转录后调节.
关键词： 肌 平滑 血管/药物作用 黄芪注射液/治疗应用肽水解酶类/代谢 -
尼莫地平对内皮功能的影响
我们在临床上对患动脉硬化的患者应用尼莫地平进行观察,现报告如下.
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前列地尔对血管内皮保护作用的实验研究
目的:观察前列地尔(PGE1)短期干预对高脂饮食兔动脉粥样硬化(AS)及血管内皮功能的影响.方法:日本大耳白兔24只随机分为空白对照组、高脂对照组、氟伐他汀组、前列地尔组.于实验第8、12周测定一氧化氮(NO)与内皮素(ET),并对主动脉进行组织形态学观察.结果:氟伐他汀及前列地尔干预4周后,与高脂对照组比较,NO明显升高(P<0.01),ET明显下降(P<0.01),而两组之间无明显差异(P>0.05).结论:前列地尔通过升高血清NO、降低ET抑制AS斑块形成.
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溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径
目的:探讨溶血磷脂酸(LPA)刺激兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的信号转导途径.方法:在培养的家兔血管平滑肌细胞上,测定3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)参入和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果:LPA呈浓度依赖地刺激3H-TdR参入,并平行地激活MAPK,二者间呈显著正相关.乙二醇-双(氨基乙酯)-四乙酸(EGTA)、尼卡地平、ryanodine、thapsigargin、herbimycin A不影响LPA促VSMC增殖作用.PQ098059、 H7、佛波酯(PMA)及百日咳毒素(PTX)均可抑制LPA的促增殖和激活MAPK作用.结论:LPA浓度依赖地促进VSMC增殖,其细胞内信号转导与PTX敏感的G蛋白介导的蛋白激酶C(PKC)和MAPK途径有关.
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丝裂素活化蛋白激酶介导同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增生
目的:研究同型半胱氨酸(HCY)促进血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖及其机制.方法:采用同位素技术测定3H-TdR参入和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性.结果:HCY促进VSMC增殖,同时HCY增加MAPK活性,二者均具有剂量效应关系,而且二者之间呈显著正相关.结论:HCY促进VSMC增殖,可能是通过增加MAPK活性的途径实现的.
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钙信号在尾加压素-Ⅱ促血管平滑肌增殖中的作用
目的:探讨钙信号在尾加压素-Ⅱ(urotensin-Ⅱ,UⅡ)促血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)增殖中的作用.方法:在离体培养的VSMC上,用流式细胞仪和3H-TdR参入的方法探讨UⅡ的促增殖效应;在离体孵育的大鼠主动脉平滑肌组织上观察UⅡ对平滑肌45Ca2+摄入的影响;应用激光共聚焦显微镜检测UⅡ作用后细胞内游离钙的改变.结果:UⅡ(10-9～10-7molL-1)浓度依赖地刺激VSMC的DNA合成,并诱导细胞由静止向增殖状态转化.与对照组相比10-8 mol*L-1 UⅡ使细胞的增殖指数[(G2-M+S)%]增加192%(P<0.01).钙通道阻断剂尼卡地平和Ca2+螯合剂EDTA均可阻断UⅡ对VSMC的促增殖效应,其中UⅡ(10-8 mol*L-1)与尼卡地平(10-5 mol*L-1)共同孵育的VSMC DNA合成量仅为单纯UⅡ(10-8 mol*L-1)组的59.0%. UⅡ(10-10～10-8 mol*L-1)可浓度依赖地使胸主动脉对45Ca2+的摄入增加,尼卡地平(10-5 mol*L-1)也可显著对抗UⅡ(10-8 mol*L-1)对45Ca2+摄入的诱导作用(P值均小于0.01).用激光共聚焦显微镜观察发现UⅡ作用后细胞内Ca2+浓度迅速升高,持续约3 min,形成钙波.结论: UⅡ可通过促进细胞Ca2+摄取和增加细胞内Ca2+浓度,发挥其促进VSMC增殖的作用.
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辛伐他汀和氟伐他汀对高胆固醇喂养兔的血管内皮功能的影响
目的:观察辛伐他汀和氟伐他汀对高胆固醇喂养兔的血管内皮功能的影响.方法:共28只纯种日本大耳白兔,随机分为4组(每组7只):A组、B组和C组均先喂以1.5%(质量分数)的高胆固醇饲料4周,之后A组继续喂以1.5%(质量分数)的高胆固醇饲料4周,B组喂以1.5%(质量分数)的高胆固醇饲料加辛伐他汀5 mg.kg-1.d-14周,C组喂以1.5%(质量分数)的高胆固醇饲料加氟伐他汀20mg.kg-1.d-14周,D组喂以普通饲料共8周.8周后取血测定总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及高密度脂蛋白胆固醇.麻醉后分离胸主动脉去除脂肪和结缔组织,切成4 mm长的血管环置浴槽中做离体灌流实验,分别观察对乙酰胆碱、硝酸甘油和去甲肾上腺素的浓度反应曲线.结果:A组血清胆固醇水平明显升高,B组和C组则明显下降.A组血管对乙酰胆碱的内皮依赖性舒张功能明显减弱,且对去甲肾上腺素的收缩功能增强.而B组和C组这些功能接近正常对照的D组,B组和C组之间无显著性差异.4组血管对非内皮依赖性舒张剂硝酸甘油的反应相似.结论:辛伐他汀和氟伐他汀均可预防高胆固醇喂养兔的血管内皮功能失调,二者之间无显著性差异.
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17-β雌二醇对原代人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响
目的:阐明雌二醇对内皮细胞一氧化氮(NO)生成及一氧化氮合酶(cNOS) 基因表达的影响.方法:观察雌二醇作用于原代人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一定时间(1～24 h)后的NO产量,采用Greiss反应测定代谢产物NO-2的量及Northern杂交技术分析雌二醇作用于HUVEC 18 hcNOS mRNA的表达.结果:100、30、10及1nmol*L-1的雌二醇作用下,HUVEC分别于1、4、12及18 h起,NO-2产量有明显增高.0.1nmol*L-1雌二醇作用24 h内,NO-2产量与对照组比较差异无统计学意义.Northern 杂交结果表明:1～100nmol*L-1 雌二醇可明显促进cNOS mRNA的表达;而0.1nmol*L-1雌二醇无此效应.结论:雌二醇可促进HUVEC NO的生成及cNOS基因的表达,可能为雌激素保护作用的重要机制,雌二醇作用的阈浓度可能在0.1～1nmol*L-1之间.
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辛伐他汀和西立伐他汀对体外培养血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响
目的:观察辛伐他汀和西立伐他汀对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和迁移的影响.以探讨他汀类药可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用.方法:采用体外兔髂动脉VSMC培养技术,以3H-TdR的参入量表示VSMC的DNA合成情况,以Sarkar建立的方法测定VSMC的迁移距离,观察辛伐他汀和西立伐他汀对VSMC增殖和迁移的影响.结果:辛伐他汀10-8～10-5 mol@L-1对VSMC DNA合成的抑制率为14.0%～78.8%,西立伐他汀10-9～10-6mol@L-1对VSMC DNA合成的抑制率为0.9%～63.6%;辛伐他汀10-6～10-5mol@L-1、西立伐他汀10-7～10-6mol@L-1明显抑制VSMC迁移.两种药物对VSMC增殖和迁移的抑制呈剂量依赖关系.结论:辛伐他汀和西立伐他汀可剂量依赖性地抑制VSMC的增殖和迁移,这种非调脂作用可能在延缓动脉粥样硬化发生、发展,减少再狭窄发生率或减轻再狭窄病变方面有积极影响.
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L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡
目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.
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大黄素对血管平滑肌细胞增生抑制作用的机制
目的:观察大黄素对动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期时相的影响,了解大黄素抑制离体培养的平滑肌细胞增殖的作用机制.方法:指数增长期的平滑肌细胞同步化于G0期后,加入20 mg*L-1大黄素于含胎牛血清10%(体积分数)的细胞培养液中,24 h后分别用流式细胞仪进行细胞周期时相测定和抗PCNA蛋白单克隆抗体染色.结果:与对照组比较,用了大黄素以后,G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,下降率为75.5%,平滑肌细胞抗PCNA单克隆抗体染色呈阴性.表明PCNA蛋白的表达受到抑制,细胞受阻于G0期.结论:抑制PCNA蛋白表达、阻滞细胞周期的移行是大黄素抑制平滑肌细胞增殖的重要机制之一.
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IL-10 对尾加压素Ⅱ诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响
目的:探讨白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对血管活性肽尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及其作用机制.方法:在培养的大鼠主动脉VSMC上,采用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)参入测定VSMC DNA合成速率,Western blot及免疫沉淀法测定粘着斑激酶(focal adhension kinase,FAK)的表达及活性.结果:IL-10(10-10～10-8g@ml-1)呈浓度依赖的方式抑制UⅡ(10-8mol@L-1)诱导的VSMC3H-TdR参入增加(P＜0.05或P＜0.01)和FAK的活性上调(P＜0.05),但各组间FAK的蛋白表达差异无显著性.结论:IL-10可能通过抑制FAK活性的上调,而拮抗UⅡ刺激的VSMC的增殖.
关键词： 白细胞介素10/药理学 尿紧张素类/药理学 肌、平滑 血管/药物作用 -
C-型利钠利尿肽在球囊血管损伤中的作用
目的:在大鼠主动脉球囊剥脱模型上观察血浆和主动脉组织C-型利钠利尿肽(C-type natriuretic peptide,CNP)的质量浓度和mRNA表达的动态变化及外源性CNP对大鼠球囊损伤后内膜生成的影响,以探讨CNP在再狭窄中的作用.方法:放射免疫法测定CNP质量浓度,RT-PCR测定CNP mRNA的表达.结果:发现大鼠球囊损伤后血浆CNP的质量浓度升高, 内膜剥脱后第3天、10天、21天,血浆CNP水平分别增高80.7%(P<0.01),43.5%(P<0.05)和27.5%(P<0.05),而主动脉组织CNP含量在损伤后第3天下降46.6%(P<0.05),第10天,21天和28天CNP含量分别增加2.8倍(P<0.01)、1.6倍(P<0.05)和0.82倍(P<0.05).在血管损伤3天时CNP mRNA的表达减弱,而第10天和第21天CNP mRNA的表达明显增强.外源性CNP显著抑制球囊损伤后第7天和21天新生内膜的形成,内膜/中膜比值分别降低23%(P<0.05)和20%(P<0.05).结论:CNP参与血管球囊损伤后的修复过程,可能是机体内源性抗血管再狭窄的因子之一.
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金属硫蛋白对活性氧诱导的平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的:研究金属硫蛋白对活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用过氧化氢和甲萘醌分别作为内源性和外源性活性氧刺激平滑肌细胞增殖,应用细胞总蛋白定量,3H-TdR参入,细胞周期时相测定等方法测定细胞增殖.结果:过氧化氢(25μmol.L-1)和甲萘醌(0.5μmol.L-1)可诱导培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖, 使其蛋白总量增加,S期细胞比例增高,DNA合成率增加.金属硫蛋白可以抑制过氧化氢和甲萘醌诱导的血管平滑肌细胞增殖.结论:金属硫蛋白对预防由活性氧诱导的血管平滑肌细胞增殖所引起的疾病可能具有重要作用.
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一氧化氮及一氧化碳对碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞增殖作用的影响
目的:研究一氧化氮(NO)及一氧化碳(CO)对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)促平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖作用的影响及其机制.方法:以3H-TdR参入法测定平滑肌细胞增殖程度,放射活性法测定VSMC内蛋白磷酸化程度、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)活性.结果:孵育24 h后,bFGF刺激的VSMC增殖较对照组增加1.1倍(P<0.01),细胞内蛋白磷酸化程度增加38.2%(P<0.01),PKC及MAPK活性分别增加1.5和2.5倍(P<0.01);CO前体heme-L-lysinate(H-L-Lys)及NO前体L-Arginine(L-Arg)对静止期VSMC生长无显著影响,亦未引起细胞内蛋白磷酸化、PKC及MAPK活性发生显著改变; 5、10、20μmol.L-1 H-L-Lys使bFGF刺激的VSMC增殖分别减少43.4%、46.6%和47.6%(均P<0.01),细胞内PKC活性分别下降25.6%、31.8%和33.9%(均P<0.01),MAPK活性分别降低15.0%、25.5%和40.1%(均P<0.01); 5、10、20mmol.L-1 L-Arg使bFGF刺激的VSMC增殖分别降低30.2%、40.5%和51.9%(均P<0.01),细胞内PKC活性分别降低29.8%、28.9%和36.6%(均P<0.01),MAPK活性分别降低19.4%、32.4%和44.4%(均P<0.01);10 μmol.L-1 H-L-Lys和10 mmol.L-1 L-Arg引起bFGF促进的VSMC内蛋白磷酸化程度分别下降31.8%和37.4%(均P<0.01).结论:NO和CO可抑制bFGF刺激的大鼠VSMC增殖,其机制与它们抑制bFGF促进的细胞内蛋白磷酸化及PKC和MAPK活性有关.
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一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞HO-1 mRNA表达的影响
目的:研究一氧化氮(NO)供体sodium nitroprusside (SNP)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)HO-1 mRNA的表达及CO含量影响,以探讨NO对血红素加氧酶/一氧化碳(HO/CO)体系的调节作用.方法:体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,分别与10-3 molL-1和10-4 mol*L-1的SNP在常氧及低氧12和24 h条件下共同孵育.用荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)对大鼠PASMC HO-1 mRNA表达进行检测,并用分光光度计检测PASMC培养液中CO与NO相对含量的变化.结果:低氧使大鼠PASMC HO-1 mRNA的表达及CO含量呈一致性增高.给予SNP,HO-1 mRNA的表达在常氧及低氧时呈剂量和时间依赖性增高趋势,并伴随CO含量的一致性改变.结论:外源性NO能够诱导常氧及低氧大鼠PASMC HO-1 mRNA的表达,使PASMC CO释放增多,上调HO/CO体系功能.
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硫化氢作为心血管信号分子的研究
80年代末,首次发现内源性一氧化氮(nitric oxide, NO)作为体内气体信号分子具有舒张血管、抑制细胞增殖和抑制血小板聚集等多种效应,将生物医学科学研究带入了一个新阶段.90年代中叶,第2个气体信号分子一氧化碳(carbon monoxide, CO)获得证实.继续探索新的内源性气体信号分子是当前生物医学领域中倍受关注的问题.
关键词： 硫化氢/药理学 肌 平滑 血管/药物作用 内皮血管肽类/拮抗剂和抑制剂 -
大鼠平滑肌细胞增殖与西洛他唑抑制作用的体内实验
目的:以球囊损伤SD大鼠模型颈动脉内膜增生为基础,比较西洛他唑给药组和生理盐水对照组大鼠血管内膜增生强度和平滑肌细胞增殖能力方面的差异.方法:[1]实验于2004-01/12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所完成.实验选用健康雄性SD大鼠,体质量300～500 g.[2]建立动物模型:腹腔麻醉36只大鼠后,暴露左颈总动脉及颈内、外动脉,自颈外动脉向近心端插入2F Fogarty球囊导管至颈总动脉起始部,球囊充水0.10～0.15 mL,慢速回拉至颈内外动脉分叉处,反复3次,完成后结扎颈外动脉.[3]36只SD大鼠随机分为2组,每组18只,分别为生理盐水组,西洛他唑给药组(7.5×10-7mol/L).给药方式:灌肠给药,5 mL/次,术后即刻开始,持续给药28d.[4]观察并比较两组大鼠损伤血管壁各成分结构变化图像定量分析结果.应用免疫组化分析大鼠动脉血管壁增殖情况,并应用反转录聚合酶链式反应分析两组损伤的动脉半胱天冬酶3在mRNA水平表达变化.结果:大鼠36只均进入结果分析.[1]大鼠动脉血管壁增殖情况免疫组化分析结果:西洛他唑给药组Ki67免疫组化染色阴性,细胞增殖能力下降;生理盐水组Ki67免疫组化染色阳性,细胞增殖能力旺盛.[2]损伤血管壁各成分结构变化图像定量分析结果:西洛他唑给药组大鼠颈动脉血管壁损伤后28 d内膜增生面积明显小于生理盐水组[(0.015±0.002),(0.197±0.004)mm2,t=299.06,P＜0.01];管腔面积明显大于生理盐水组[(0.193±0.008),(0.011±0.008)mm2,t=118.21,尸＜0.01].两组大鼠损伤动脉中膜增生面积差异不明显(P＞0.05).[3]两组损伤的动脉半胱天冬酶3在mRNA水平表达反转录聚合酶链式反应分析结果:西洛他唑给药组平滑肌细胞中半胱天冬酶3表达明显高于生理盐水对照组.结论:[1]通过在体大鼠颈动脉内膜增生模型建立,有效地模拟了西洛他唑抑制体内血管平滑肌细胞增殖的发生过程.[2]西洛他唑能够有效抑制体内血管平滑肌细胞增殖并诱导其凋亡,抑制血管损伤后新生内膜的形成,为临床防治增生性血管疾病的提供理论依据.
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通络方剂抗氧化作用及对大血管内皮细胞的保护
目的:观察通络方剂对1型糖尿病大鼠血清抗氧化指标和大血管内皮细胞损害的影响,并与抗氧化剂α-硫辛酸作用效果进行比较.方法:实验于2005-09/11在解放军第二军医大学动物实验中心及免疫研究所完成.①选用雄性SD大鼠23只,4～6周龄.随机抽取5只作为正常对照组大鼠(只注射等体积枸橼酸钠缓冲液),其余大鼠按60 mg/kg剂量应用链脲佐菌素溶液,3 d后,以空腹血糖持续≥16.7 mmol/L,尿糖卅者为造模成功,造模成功15只,将其按随机数字表法分为3组,每组5只:模型组,通络方剂组,α-硫辛酸组.通络方剂组:每天上午灌胃通络方剂水溶液1g/kg,通络方剂超微颗粒由人参、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鳖虫、赤芍等药物组成,由以岭药业提供;α-硫辛酸组:每天上午灌胃α-硫辛酸(江苏常熟诚希化工有限公司)100mg/kg;其余2组均灌胃等体积的体积分数0.02的乙醇稀释液.②连续处理6周后,采用葡萄糖氧化酶法测血糖,采用可见光法检测过氧化氢酶活力,用TBA法测定丙二醛,用DTNB法定量测定谷胱甘肽过氧化物酶活力,比色法测超氧化物歧化酶活力与总抗氧化能力.透射电镜下观察胸主动脉内皮细胞的结构改变.结果:因造模失败脱失3只,其余均进入结果分析.①血清抗氧化指标:模型组血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶活力和总抗氧化能力明显低于正常对照组[(0.883±0.243)mkat/L,(2.056±0.219)mkat/L,(223.21±28.84)μkat/L,(5.25±0.84)kU/L;(2.826±0.199)mkat/L,(4.890±0.358)mkat/L,(387.91±13.00)μkat/L,(9.81±1.28)kU/L,P＜0.05],丙二醛水平明显高于正常对照组[(9.99±1.7),(2.42±0.89)μmol/L,P＜0.05].通络方剂组和α-硫辛酸组血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组[通络方剂组:(1.665±0.140),(3.771±0.258)mkat/L;α-硫辛酸组:(1.851±0.132),(4.141±0.186)mkat/L,P＜0.05],低于正常对照组(P＜0.05).②胸主动脉血管内皮结构透射电镜观察结果:模型组内皮细胞发生明显损害,通络方剂和α-硫辛酸组内皮细胞病变程度则明显改善.结论:通络方剂能提高糖尿病大鼠机体抗氧化能力,对糖尿病所致的大鼠血管内皮损害具有一定的保护作用.
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脑通定胶囊对犬脑血管作用的实验研究
目的:观察脑通定胶囊对麻醉Beagle犬脑血管的影响.方法:脑通定胶囊经十二指肠给药,观察药物对动物脑血流量(CBF)、脑血管阻力、ECG(Ⅱ)、血压、心率(HR)等的影响.结果:脑通定胶囊给药后30分钟,脑血流量逐渐增加,90分钟时脑血流量达到大,与空白组比较有显著差异(P＜0.01);给药45分钟时脑血管阻力明显减小;高中低剂量对心率、平均动脉压、舒张压和收缩压均无明显影响.结论:脑通定胶囊能有效增加脑血流量,减小脑血管阻力,对缺血性脑梗塞患者有较好的治疗作用.
关键词： @脑通定胶囊/药理学 血管/药物作用 脑/药物作用 犬
