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内源性一氧化碳对大鼠主动脉球囊损伤后新生内膜形成及丝裂素活化蛋白激酶活性的影响
目的:探讨内源性血红素加氧酶(heme oxygenase, HO)/一氧化碳(carbon monoxide, CO)系统对大鼠主动脉球囊损伤后新生内膜形成及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)激活的调节作用.方法:采用大鼠主动脉内膜球囊拉伤模型,观察HO抑制剂锌卟啉-9(zinc protoporphyrin IX, ZnPP-9)或其底物血红素-左旋-赖氨酸盐(heme-L-lysinate, HLL)对血管壁细胞3H-TdR掺入和MAPK活性的影响,同时观察血管平滑肌HO活性和CO生成的变化.结果:内膜拉伤后2周血管3H-TdR掺入和MAPK活性明显增加,同时HO活性和CO的产生增加;ZnPP-9使血管的3H-TdR掺入和MAPK活性增加更为明显(分别比单独拉伤组增加34.6%和39.2%,均为P<0.01);而HLL使血管的3H-TdR掺入和MAPK活性则明显降低(比单独拉伤组分别减少29.45%和33.6%,均为P<0.01).结论:HO活性上调或CO产生增加是血管对机械拉伤的一种保护性应激反应;内源性HO/CO系统直接参与新内膜形成中血管壁细胞的增殖调节,HO活性诱导有可能成为临床上防治血管增殖性疾病的一种新途径.
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一氧化氮及一氧化碳对碱性成纤维细胞生长因子促血管平滑肌细胞增殖作用的影响
目的:研究一氧化氮(NO)及一氧化碳(CO)对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)促平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖作用的影响及其机制.方法:以3H-TdR参入法测定平滑肌细胞增殖程度,放射活性法测定VSMC内蛋白磷酸化程度、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)及丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)活性.结果:孵育24 h后,bFGF刺激的VSMC增殖较对照组增加1.1倍(P<0.01),细胞内蛋白磷酸化程度增加38.2%(P<0.01),PKC及MAPK活性分别增加1.5和2.5倍(P<0.01);CO前体heme-L-lysinate(H-L-Lys)及NO前体L-Arginine(L-Arg)对静止期VSMC生长无显著影响,亦未引起细胞内蛋白磷酸化、PKC及MAPK活性发生显著改变; 5、10、20μmol.L-1 H-L-Lys使bFGF刺激的VSMC增殖分别减少43.4%、46.6%和47.6%(均P<0.01),细胞内PKC活性分别下降25.6%、31.8%和33.9%(均P<0.01),MAPK活性分别降低15.0%、25.5%和40.1%(均P<0.01); 5、10、20mmol.L-1 L-Arg使bFGF刺激的VSMC增殖分别降低30.2%、40.5%和51.9%(均P<0.01),细胞内PKC活性分别降低29.8%、28.9%和36.6%(均P<0.01),MAPK活性分别降低19.4%、32.4%和44.4%(均P<0.01);10 μmol.L-1 H-L-Lys和10 mmol.L-1 L-Arg引起bFGF促进的VSMC内蛋白磷酸化程度分别下降31.8%和37.4%(均P<0.01).结论:NO和CO可抑制bFGF刺激的大鼠VSMC增殖,其机制与它们抑制bFGF促进的细胞内蛋白磷酸化及PKC和MAPK活性有关.
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一氧化碳调节低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡
目的: 探讨一氧化碳对低氧大鼠肺血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将大鼠随机分为4组:常氧对照组(n=7)、低氧组(n=6)、低氧+锌原卟啉组(低氧+ ZnPP组,n=6)及低氧+低浓度一氧化碳组(低氧+低浓度CO组,n=5).应用Bcl-2、Caspase-3多克隆抗体和NF-κΒ单克隆抗体经免疫组织化学检测技术及原位缺口末端标记法(TUNEL)对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行凋亡定位及半定量分析.结果: (1)低氧组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase-3表达积分低于对照组,NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显高于对照组;(2)低氧+ ZnPP组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数明显低于对照组和低氧组,平滑肌细胞Caspase-3表达积分明显低于对照组,与低氧组无差异;NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显高于对照组和低氧组;(3)低氧+低浓度CO组大鼠肺动脉平滑肌凋亡细胞百分数和平滑肌细胞Caspase-3表达积分明显高于对照组、低氧组及低氧+ZnPP组,NF-κΒ阳性细胞百分数和平滑肌细胞Bcl-2表达积分明显低于低氧组及低氧+ZnPP组,与对照组差异无显著性.结论: CO促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡,同时还伴有Bcl-2和NF-κΒ的变化.
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外源性一氧化碳分子释放剂CORM-2对抗大鼠离体心脏缺血复灌损伤及其作用机制
目的:研究外源性一氧化碳(carbon monoxide,CO)对大鼠离体心脏缺血复灌的作用及其机制.方法:采用Langendoff离体心脏灌流模型,用结扎心脏冠脉前降支30 min造成心肌缺血,松开结扎120 min作为再灌.观察心脏收缩功能、心肌酶学和心肌梗死面积等指标.结果:25 μmol/LCORM-2(外源性CO释放剂)显著改善了离体心脏缺血复灌时心功能的损伤,降低了乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)的释放,减少了梗死面积,但对冠脉流量的影响不大.10 μmol/LCORM-2可减少LDH、CK和心肌梗死面积,但对心功能的影响不明显;而100μmol/L CORM-2却可增加缺血复灌心肌LDH的释放,加重心功能的损害.可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME、线粒体ATP依赖性钾离子通道阻断剂(mitoKATP)5-HD和血红素氧化酶-1(HO-1)抑制剂Znpp均可不同程度地阻断25μmol/LCORM-2缩小缺血心肌梗死面积的作用.L-NAME和Znpp可阻断CORM-2降低LVEDP的作用,但是CORM-2增高LVDP和
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内源性一氧化碳调节肺动脉平滑肌细胞增殖的信号转导
目的探讨内源性一氧化碳(CO)抑制肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的细胞内信号转导机制.方法培养的大鼠PASMC低氧24 h,采用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)参入法检测DNA合成率;Western-Blot检测细胞外信号调节激酶(ERK)的蛋白表达.结果低氧使PASMC的3H-TdR参入增加137.28%(P<0.01); 血红素氧合酶(HO)诱导剂氯化血红素(Hemin)以浓度依赖的方式抑制低氧PASMC的3H-TdR参入,分别降低19.14%、29.94%、43.97%(P均<0.01);HO抑制剂锌原卟啉(ZnPP)促使低氧PASMC的3H-TdR参入增加37.89%(P<0.01);MEK1抑制剂PD98059降低了低氧和低氧+ZnPP组PASMC的3H-TdR参入34.88%和23.94%(P均<0.01).低氧使PASMC的ERK蛋白表达增加409%;Hemin以浓度依赖的方式抑制低氧PASMC的ERK表达,分别降低33.99%、45.97%、66.01%(P均<0.01);ZnPP促使低氧PASMC的ERK表达增加57.76%,(P<0.01),PD98059降低了低氧和低氧+ZnPP组PASMC的ERK表达34.88%和24.78%(P均<0.01).结论内源性CO抑制低氧PASMC增殖的作用可能通过MAPK来介导.
