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人骨肉瘤中Bcl-2和PCNA的表达
目的:研究骨肉瘤中Bcl-2和PCNA表达的生物学意义.方法:用免疫组织化学S-P法,研究 30例骨肉瘤和 15例正常骨中Bcl-2和PCNA表达情况.结果:骨肉瘤组与正常骨组,骨肉瘤Ⅱ、Ⅲ级组与Ⅰ级组,骨肉瘤生存组与死亡组相比, PCNA指数差异有显著性 (P<0.05).骨肉瘤组与正常骨组相比,Bcl-2差异有显著性(P<0.05).骨肉瘤Ⅱ、Ⅲ级组与Ⅰ级组,骨肉瘤生存组与死亡组相比,Bcl-2差异无显著性(P>0.05).骨肉瘤中Bcl-2和PCNA表达呈显著相关性(P<0.05).结论:细胞凋亡抑制和过度增殖协同作用导致骨肉瘤的发生.PCNA指数可作为反映骨肉瘤分级和预后的指标.Bcl-2不能作为判断骨肉瘤分级和预后的指标.
关键词： 骨肉瘤/病理学 基因表达 基因 Bcl-2 增殖细胞核抗原/分析 -
微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的研究
目的:以人成骨肉瘤细胞系为研究对象,探讨微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡及其适宜作用剂量、作用时间.方法:以微波不同作用剂量和时间,作用于人成骨肉瘤细胞 .采用形态学观察,四唑兰显色法,软琼脂集落形成实验,FCM等方法观察微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡.结果:寻找到了微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的佳作用剂量和时间,分别为100 W/m2和1 h.结论:微波辐射可诱导成骨肉瘤细胞凋亡.
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硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡作用的体外实验
目的:探索有机硒在体外对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用.方法:以硒酸酯多糖为实验药物,通过MTT法检测细胞活力,荧光显微镜、扫描电镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪分析凋亡峰及细胞周期等,研究其对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用.结果:硒酸酯多糖作用骨肉瘤细胞1、2、4、6 d及浓度为0、30、60、120μg/Ml后细胞生长曲线呈明显下降趋势,差异有统计学意义,P＜0.05.形态学观察可见早期和晚期凋亡细胞,细胞周期主要受阻于S期.结论:硒酸酯多糖可在体外诱导人骨肉瘤细胞凋亡.
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人骨肉瘤组织细胞凋亡的检测及其临床意义
目的:探讨骨肉瘤细胞凋亡率的预后价值及影响因素.方法:对骨肉瘤石蜡组织Tunel染色,检测组织凋亡指数(apoptotic index, AI),及其与患者预后、病理类型、分期、肿瘤大小、血清ALP的关系.结果:远期生存时间>3年者较≤3年者凋亡检测阳性率明显增高(81.8%,35.3%);AI分级水平也明显增高,P＝0.016.肿瘤直径≥10 cm者较<10 cm者凋亡检测阳性率高(83.3%,31.3%);AI分级水平增高,P＝0.003.血清ALP水平升高者较正常者凋亡检测阳性率低(30.8%,73.3%);AI分级水平降低,P＝0.020.AI与病理类型、肿瘤分期无关,P＝0.893、0.981.结论:骨肉瘤凋亡指数结合血清ALP可作为判断骨肉瘤恶性程度和预后的有价值的指标.
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骨外黏液样软骨肉瘤研究进展
骨外黏液样软骨肉瘤(extraske-letal myxoid chondrosarcoma,EMC)是一类罕见的软组织恶性肿瘤,主要发生于四肢深部.其组织病理学为分叶状结构,肿瘤细胞排列成丝带状由小叶周边向中心放射状分布;电镜下部分肿瘤细胞质内可见神经内分泌颗粒;免疫组化显示肿瘤细胞表达波形蛋白(vimentin),部分表达NSE、Syn、CgA及S-100,CK和EMA可灶性表达于上皮样分化区.其粘液样基质奥新兰染色阳性,并抗透明质酸酶.由于该肿瘤生长缓慢,局部复发率高,使肿瘤细胞发生退变或间变,从而形成复杂的病理组织学图像,极易造成病理诊断错误,须与骨黏液样软骨肉瘤、脊索瘤及软组织多种黏液性肿瘤鉴别.由于该肿瘤有特异性的细胞遗传学改变,因此,目前主要研究方向为筛选出为特异性的肿瘤融合基因作为病理诊断指标,并找出基因治疗的有效途径.
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KiSS-1基因对骨肉瘤MG63细胞增殖与黏附能力影响的研究
目的:观察人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人骨肉瘤MG63细胞增殖、黏附能力的影响.方法:PSNAV2.0-KiSS-1转染骨肉瘤MG63细胞,经G418筛选稳定表达KiSS-1基因的MG63细胞,应用RealtimePCR、蛋白质印迹法检测KiSS-1基因的表达情况.CCK-8法检测各组肿瘤细胞增殖能力的变化,并通过各组肿瘤细胞与血管内皮细胞、层粘连蛋白FN、人工基质胶Matrigel的黏附情况评估KiSS-1基因对MG63细胞黏附能力的影响.结果:PSNAV2.0-KiSS-1转染的MG63细胞稳定、能高效表达KiSS-1基因.转染KiSS-1基因的骨肉瘤MG63细胞随培养时间延长,特别是48 h后较MG63细胞组增殖能力明显减慢,F=10.05,P＜0.05;转染后细胞与脐血管内皮细胞、FN、Matrigel黏附能力比较明显降低(P＜0.05).结论:KiSS-1基因能显著降低人骨肉瘤MG63细胞的增殖和黏附能力,可能在骨肉瘤的基因治疗中发挥重要作用.
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热休克蛋白90阻止剂增强热诱导骨肉瘤细胞杀伤的研究
目的:探讨热休克蛋白90(heat shock protain 90,HSP90)分子伴侣复合物阻止剂17-丙烯胺基-17去甲氧基格尔德霉素(17-allylamide-17-demethoxgeldanamycin,17-AAG),对热诱导的骨肉瘤SOSP-9607细胞杀伤作用的影响.方法:采用干细胞集落形成实验、流式细胞术(flow cytometry,FCM)和吖啶橙荧光染色等方法观察比较单纯热疗组与热疗联合17-AAG治疗组对骨肉瘤SOSP-9607细胞活力、凋亡率及形态学影响.结果:干细胞集落形成实验显示,热疗联合17-AAG治疗组较单独热疗对骨肉瘤SOSP-9607细胞的杀伤效应明显增强,P＝0.036;Annexin V-FITC染色流式细胞术结果显示,热疗联合17-AAG治疗组所致凋亡率(52.2%)大于单纯热疗组(17.5%);用吖啶橙荧光染色法观察到热疗联合17-AAG治疗组明显见骨肉瘤SOSP-9607细胞固缩着色不均而且较深,细胞核浓缩、裂解等凋亡特征.结论:HSP90分子伴侣复合物阻止剂17-AAG能增强热诱导的骨肉瘤SOSP-9607细胞的杀伤作用.
关键词： 热休克蛋白质类/代谢 骨肉瘤/病理学 骨肿瘤/病理学 细胞凋亡 -
基因工程腺病毒治疗裸鼠骨肉瘤肺转移的实验研究
节数分别为4.20±2.33和3.57±2.20,差异无统计学意义,t=0.745,P＝0.463;两组肺转移总结节数分别为11.00±6.43和9.57±6.17,差异也无统计学意义,t=0.611,P=0.547.结论:H101不能明显抑制裸鼠骨肉瘤的局部肿瘤生长和远处转移.
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RNA干涉技术抑制骨肉瘤细胞MG63中Survivin基因表达的研究
目的:构建人Survivin基因的siRNA真核表达载体, 探讨其对骨肉瘤细胞MG63中Survivin基因表达的干涉作用.方法:应用pSilencer 3.0-H1 neo构建Survivin特异性RNA干涉载体,转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞.HE染色观察细胞形态学变化,透射电镜观察细胞超微结构.应用RT-PCR、间接免疫荧光和western blot等方法检测Survivin的mRNA和蛋白水平变化.流式细胞仪检测细胞周期变化.结果:成功构建了Survivin基因siRNA真核表达载体PsvA和PsvB,获得了稳定转染的MG63细胞.与野生型MG63、阴性对照和MG63/PsvA细胞相比,MG63/PsvB细胞增殖反应明显减弱,差异有统计学意义,P＜0.01.MG63/PsvB细胞中Survivin mRNA 和蛋白表达减少.与野生型MG63、阴性对照和MG63/PsvA细胞相比,MG63/PsvB凋亡率增加7倍(P＜0.01).结论:特异性siRNA能够明显抑制Survivin基因在MG63细胞中的表达, 为进一步研究survivn在MG63细胞中的生物学功能和作用机制奠定了基础.
关键词： 骨肉瘤/病理学 微管相关蛋白质类/代谢 基因表达 -
促凋亡基因PDCD5在骨肉瘤U2-OS细胞表达及对其促凋亡作用的研究
目的:观察外源性PDCD5基因对骨肉瘤细胞系U2-OS的促凋亡作用.方法:扩增重组质粒PCI-neo-PDCD5,采用脂质体转染的方法,将PDCD5基因转染骨肉瘤细胞U2-OS,RT-PCR检测转染后表达情况;撤除血清培养16 h后,四甲基偶氮唑盐MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况;Annexin V-染色流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法分析凋亡通路.结果:转染骨肉瘤细胞U2-OS后,RT-PCR检测到PDCD5的表达,MTT实验发现撤除血清后转染重组质粒组细胞的增殖被明显抑制.于转染空载体和对照组细胞相比,存活细胞明显减少,P＜0.001.Annexin V染色,流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,与转染空质粒组(凋亡率为1.47%)相比,其凋亡率为10.28%.经PDCD5处理的细胞中,Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的表达与对照组比较,差异均有统计学意义.结论:PDCD5基因可以在转染的骨肉瘤细胞系U2-OS细胞中表达,并在撤出血清因素的诱导作用下可显著抑制转染细胞的生长,并通过线粒体激活途径发挥促凋亡作用并诱导细胞发生凋亡.
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骨肉瘤组织CRM1基因表达预后意义的分析
目的:分析CRM1基因在骨肉瘤手术标本中的表达及其预后价值.方法:采用蛋白质印迹法检测57例骨肉瘤手术标本和5例正常软骨组织标本中的CRM1基因表达,并进一步分析其对于骨肉瘤患者的预后价值.结果:CRM1基因在骨肉瘤组织中的表达显著高于在正常组织中的表达;CRM1基因高表达和血清碱性磷酸酶水平升高显著相关(P=0.001),但和血清乳酸脱氢酶水平升高无关(P=0.065).单因素分析表明,CRM1基因高表达和肿瘤大小以及病理学分级之间显著相关(P值分别为0.014和0.003),而和其他临床病理特点无关.Kaplan-Meier生存分析表明,CRM1基因高表达对于骨肉瘤患者的无进展生存期和总生存期差异有统计学意义(P值分别为0.016和0.008).而多因素分析表明,CRM1基因高表达对于骨肉瘤患者是一个独立预后因素(95%CI, 1.27～5.39).结论:CRM1基因高表达与骨肉瘤患者的血清碱性磷酸酶水平升高、肿瘤大小以及病理学分级显著相关;是骨肉瘤的独立预后因素.
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骨肉瘤组织Livin和Caspase-3表达及其临床意义
目的:探讨骨肉瘤组织Livin和Caspase-3的表达及其临床意义.方法:用SABC免疫组化方法检测Livin和Caspase-3在45例骨肉瘤及30例骨软骨瘤组织中的表达.结果:Livin在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中阳性表达率分别为62.2%和3.3%,P=0.000;Caspase-3在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中阳性表达率分别为35.6%和83.3%,P=0.001.骨肉瘤组织中Livin和Caspase-3的表达呈显著负相关,r=-0.666,P=0.000.Livin的高表达与骨肉瘤组织分型无关,与Price病理分级和肺转移有关,Caspase-3的低表达与分化程度及肺转移有关.结论:骨肉瘤组织中存在Livin表达增强并伴有Caspase-3表达减低.联合检测Livin和Caspase-3的表达将对骨肉瘤的早期诊断,判定恶性程度和预后具有指导意义.
关键词： 骨肉瘤/病理学 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 细胞凋亡 免疫组织化学 -
DNA损伤修复基因APE1在骨肉瘤中的表达及其与血管生成的关系
目的:探讨DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apuinic/apyrimidic endonuclease, APE1)在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展以及血管生成的关系.方法:免疫组化SP法检测三种骨肉瘤细胞株(HOS、U-2OS、Sa-OS-2)、10例正常骨、10例良性骨瘤和60例骨肉瘤组织中APE1蛋白表达,并根据CD34和FⅧ-Rag染色结果计数微血管密度(microvessel density,MVD).结果:1)APE1蛋白在三种骨肉瘤细胞株呈强阳性表达,主要定位于肿瘤细胞的胞核,60例骨肉瘤组织中43例(72%)呈高表达,17例呈低表达,且显著高于正常骨及良性骨瘤,χ2=30.997,P＝0.000. 2)APE1表达的程度和预后密切相关.3)APE1强表达组中的瘤内MVD为46.4±26.7,显著高于弱表达组的33.3±20.7,t=2.277,P=0.030.结论:APE1在骨肉瘤中过度表达与骨肉瘤分化以及MVD密切相关,有可能作为骨肉瘤抗血管生成治疗中一个新的靶向分子.
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乳腺原发骨肉瘤一例
患者女,70岁.发现右乳肿块20余年,生长迅速1年,于2001年3月28日入院.查体:右乳外限有一约8 cm×7 cm×7 cm 的肿块,不规则,质硬,边界清,与皮肤及胸肌无黏连,腋下及锁骨上下均未触及肿大淋巴结.针吸细胞学检查可见增生乳管上皮细胞和纤维间质细胞,部分细胞增生明显.乳房钼靶片示右乳房外上象限巨大肿块,类似葫芦型,边界尚清,密度不均,内有斑片状钙化影,相应血管较对侧明显增粗,考虑为恶性肿瘤.于4月5日行右乳腺癌改良根治术.术后病理检查见肿物呈分叶状,边界清楚,但未见包膜,切面呈灰白、灰红多色性,质硬韧不一.镜检:瘤组织呈多样性,在梭形纤维肉瘤样组织中可见有明显的骨样组织及骨组织形成,在骨小梁样组织周围有显著异型的骨母细胞样细胞围绕,二者间有移行关系.病理诊断:乳腺骨肉瘤,腋窝淋巴结第一水平0/13、第二水平0/3转移.
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7例骨肉瘤CT分析
1 资料与方法1.1 一般资料:经手术病理证实的7例骨肉瘤,男性3例,女性4例;年龄10～33岁;病程短10 d,长2年,平均3.2个月.其中骨肉瘤6例,皮质旁型骨肉瘤1例.临床表现:疼痛7例,肿胀7例,功能障碍5例,软组织肿块5例,2例有明确外伤史.病变部位:股骨远端4例(窝内1例为皮质旁型),胫骨近端2例,右髂骨1例.
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苦参碱抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究
目的探讨苦参碱对人骨肉瘤细胞株MG-63的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法应用MTT比色法检测不同作用浓度以及不同作用时间苦参碱对MG-63细胞的增殖作用的影响;流式细胞仪分析不同浓度加药组及对照组第3天MG-63细胞周期的改变,并通过分析细胞DNA含量测定凋亡;应用透射电镜观察经不同浓度苦参碱处理3天后MG-63细胞的形态改变.结果苦参碱对MG-63细胞增殖具有抑制作用,其增殖抑制作用随作用时间延长及药物浓度升高更加明显,具有时间和剂量依赖性.流式细胞仪检测可见经苦参碱处理后G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降及低G1期细胞出现,并形成亚二倍体峰(凋亡峰).对照组和0.25,0.50,0.75,1.0,1.25 mg/ml各处理组中,凋亡细胞比例分别为1.2%、6.7%、21.5%、32.9%、45.8%和51.9%,在实验范围内苦参碱诱导细胞凋亡作用与药物浓度呈一定相关.透视电镜可见典型的细胞凋亡形态改变:细胞皱缩,胞膜结构保持完整,胞核固缩,核碎裂,染色质浓缩边集,形成新月形胞核,胞浆空泡化明显,细胞表面有较多浓缩的胞质突起.结论苦参碱对人骨肉瘤细胞MG-63的增殖具有明显的抑制作用,使细胞阻滞于G0/G1期,并且能诱导其凋亡,其作用具有时间和剂量依赖性.
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BMP-2在颌骨骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的研究BMP-2在颌骨骨肉瘤(osteosarcoma,OS)中的表达,探讨其与OS的生物学行为及预后的相关性.方法采用原位杂交和免疫组化方法对21例颌骨骨肉瘤标本进行BMP-2及其mRNA的检测.结果 21例颌骨骨肉瘤标本中17例有BMP-2 mRNA表达(81.0%),15例有BMP-2蛋白质表达(71.4%),阳性信号主要位于梭形或多边形肿瘤细胞胞浆中,在肿瘤性骨小梁的边缘,可见立方状骨母细胞呈强阳性反应.12例出现淋巴结转移的颌骨骨肉瘤标本BMP-2及其mRNA表达均为阳性,而表达阴性的颌骨骨肉瘤标本中无1例出现淋巴结转移.结论 BMP-2在颌骨骨肉瘤的发生、发展及生物学行为中起一定作用,并可能与颌骨骨肉瘤的预后有一定关系.
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可溶性AZURIN分子重组子构建对人骨肉瘤U2OS细胞的杀伤和诱导凋亡
目的:研究可溶性细菌氧化还原蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞的生长抑制效应及凋亡诱导作用.方法:用PCR方法由假单胞菌染色体DNA扩增AZURIN基因片段,将其融合插入原核表达载体pQE30中,并在M15大肠杆菌表达可溶性的AZURIN蛋白.该蛋白经纯化和复性后,诱导人骨肉瘤U2OS细胞,通过MTT法、Hoechest 33258荧光染色法及倒置显微镜观察凋亡细胞;流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率、线粒体膜电位变化和DNA断裂实验检测细胞增殖和细胞凋亡.结果:AZURIN的蛋白纯度达99.1%以上.用50～200 mg/L的蛋白诱导人骨肉瘤U2OS细胞12 h以上细胞的生长和增殖被显著抑制,并且观察到典型的凋亡细胞、凋亡小体、凋亡峰及DNA的片段化等凋亡的特征性变化,线粒体跨膜电位随着AZURIN作用的时间和浓度的增加而逐渐降低,对照组和50 mg/L AZURIN、100 mg/L AZURIN、200 mg/L AZURIN组细胞线粒体跨膜电位分别降低(7.76±0.47)%、(9.01±0.87)%、(24.13±2.12)%、(37.48±3.59)%(P<0.01).细胞的凋亡率也呈剂量依赖和时间依赖关系,作用48 h时凋亡率达峰值(35.8±3.78)%.结论:利用大肠杆菌制备的小分子蛋白AZURIN对人骨肉瘤U2OS细胞有明显的增殖抑制效应和凋亡诱导作用,线粒体途径可能是AZURIN诱导细胞凋亡的机制之一.
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极低频电磁场诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其机制研究
目的：探索极低频电磁场对人骨肉瘤细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法：采用50 Hz、1 mT 的极低频电磁场作用于人骨肉瘤细胞MG－63，通过MTT法检测MG－63细胞的存活率，通过流式细胞术检测MG－63细胞的凋亡率及活性氧水平，并检测 MG－63细胞给予活性氧抑制剂 N－乙酰半胱氨酸（ NAC ）及p38 MAPK抑制剂SB203580作用后细胞凋亡率的变化；通过蛋白质印迹法检测极低频电磁场处理及NAC干预后MG－63细胞p38 MAPK蛋白水平。结果：极低频电磁场能够显著抑制MG－63细胞的存活率，诱导MG－63细胞凋亡及活性氧生成；给予2．5 mmol／L NAC或SB203580干预后MG－63细胞凋亡率显著下降；极低频电磁场处理MG－63细胞后胞内p38 MAPK表达增多，而NAC干预后磷酸化p38 MAPK减少。结论：极低频电磁场可诱导人骨肉瘤细胞MG－63凋亡，其机制可能与活性氧生成增加、p38 MAPK激活有关。
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MiR-34b、靶基因CDK6在骨肉瘤组织中的表达及其临床意义
[目的]探讨miR-34b、靶基因细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)在骨肉瘤中的表达水平及临床意义.[方法]收集2016年3月至2017年3月在本院行开放手术切除术的骨肉瘤组织51例及相应的癌旁正常骨组织(距癌组织边缘至少2cm),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测骨肉瘤组织及癌旁正常组织中miR-34b、CDK6mRNA水平,采用免疫组织化学法(S-P)检测骨肉瘤组织及癌旁正常组织中CDK6蛋白表达水平,分析miR-34b、CDK6表达的相关性及二者与骨肉瘤临床病理特征的相关性.[结果]骨肉瘤组织中miR-34bmRNA表达水平为0.34±0.16,明显低于癌旁组织的1.06±0.13,其差异有统计学意义(Z＝24.942,P＝0.000);骨肉瘤组织中CDK6mRNA表达水平为4.37±0.46,明显高于癌旁组织的1.03±0.12(Z＝50.174,P＝0.000),骨肉瘤组织CDK6蛋白阳性表达率较癌旁组织CDK6蛋白阳性表达率高(78.43％vs17.65％,χ2＝37.744,P＝0.000);miR-34b与CDK6表达呈现明显负性相关(r＝－0.483,P＝0.000);miR-34b、CDK6表达与骨肉瘤患者年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置无明显相关性(P＞0.05),与Enneking分期、肿瘤转移密切相关(Z＝2.509、3.962,P＝0.016、0.000;2＝6.451、4.217,P＝0.040、0.040).[结论]miR-34b可能通过调控骨肉瘤组织中靶基因CDK6表达,参与骨肉瘤的发生发展.
关键词： 微RNAs 骨肉瘤/病理学 细胞周期蛋白依赖激酶6
