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单核体文献资料
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猴头菌原生质体制备及单核体鉴定研究
目的通过优化猴头菌原生质体的制备条件，结合荧光染色鉴定及分子鉴定获得高纯度的单核体，为进一步开展猴头菌基因组水平的研究提供材料。
方法对三类酶系统、溶壁酶浓度、无机和有机两类稳渗剂、pH 3.5~6.5、酶解温度20~40℃、培养基成分以及菌龄为48~144 h 菌丝的原生质体制备条件进行考察。其中三类酶系统分别为：1.5%的单一酶系统（溶壁酶、纤维素酶、蜗牛酶），1.5%的纤维素酶和蜗牛酶的混合酶系统，2%的溶壁酶系统；溶壁酶浓度：1%、1.5%、2%、3%、4%；培养基成分的考察：碳源种类筛选及综合培养基中添加成分的筛选。将制得的原生质体稀释后涂板再生及鉴定，以选取单核菌丝。单核菌丝的鉴定方法包括：性状、显微及分子鉴定。其中显微鉴定的观察方法包括一般显微观察和 DAPI 荧光染色观察；分子鉴定扩增的是单核菌丝的核糖体内转录间隔区（ITS）序列。
结果在马铃薯培养基中静置培养72 h 的猴头菌丝，用2%的溶壁酶液，以0.6 mol/L KCl 为渗透压稳定剂，在 pH 5.5、温度30℃的条件下酶解3 h，原生质体的释放量大；再生的单核体经形态及分子生物学鉴定证明是猴头菌。结论通过原生质体制备及再生方法获得的猴头菌的单核菌丝可以为猴头菌活性次生代谢产物相关基因的发掘奠定基础。
