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流式细胞术检测调节性T细胞方法的建立
目的 建立流式细胞术(FCM)检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)的方法 ,并观察紫杉醇联合卡铂治疗对晚期肺癌和乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Tregs数量的影响.方法 19例晚期肺癌和10例乳腺癌患者均给予紫杉醇联合卡铂方案化疗,于化疗前1 d和化疗后第7天采集患者外周血,分别加入鼠抗人CD4-FITC(异硫氰酸荧光素)/CD8-PE(藻红蛋白)/CD3-PerCP(多甲藻叶绿素蛋白)、CD25-FTTC/CDl27-PE/CD4-PerCP、CD3-FITC/CD(16+56)-PE/CD45-PerCP单抗,并以分别加入同型鼠抗人IgGl-FITC、Igol-PE、IgGl-PerCP抗体作为阴性对照.采用流式细胞术(FCM)检测化疗前后外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞和CD4+CD25+Tregs、NK细胞所占比例并进行数据分析.实验重复3次.结果 与化疗前比较,晚期肺癌和乳腺癌患者化疗后外周血CD4+CD25+Tregs的比例均明显降低(6.82%±3.11%vs.5.48%±2.13%,P=0.045;6.38%±1.84%VS.3.88%±1.69%,P=0.007);晚期肺癌患者化疗后外周血CD4+T细胞的比例升高(48.84%±16.44%VS.56.35%±14.50%,P=0.006),CD8+T细胞的比例降低(51.18%±16.44%vs.43.65%±14.50%,P=0.006),CD4+/CD8+T细胞比值升高(1.12±0.60VS.1.57±0.88,P=0.008),而CD3+T细胞和NK细胞的比例均无明显变化;乳腺癌患者化疗后外周血CD3+、CIM+、CD8+T细胞、NK细胞的比例和CD4+/CD8+T细胞比值均无明显变化.结论 成功建立了FCM检测CD4+CD25+Tregs的方法 ,联合应用CD4、CD25、CDl27检测CD4+CD25+Tregs简便可行、重复性好,检测结果 可靠、准确,比较适用于临床检验.紫杉醇联合卡铂能够降低晚期肺癌和乳腺癌患者外周血CD4+CD25+Tregs的数量.
关键词： 流式细胞术 T淋巴细胞 调节性 白细胞介素7受体α亚单位 抗原 CD4 白细胞介素2受体α亚单位 -
白介素7受体α基因缺陷导致严重联合免疫缺陷病一例
目的 探讨我国首例白介素7受体α(IL-7Rα)基因缺陷患儿的临床特征和基因突变类型.方法 患儿为男性,5月龄,生后15 d开始反复出现发热、咳嗽、腹泻,伴卡介苗接种处破溃、流脓和左腋下包块.采用PCR方法扩增患儿及父母IL-7Rα基因组DNA.采用RT-PCR扩增患儿及父母IL-7Rα mRNA.PCR产物直接进行双向序列测定.结果 患儿的免疫球蛋白IgG 6867 mg/L,IgA249 mg/L,IgM 206 mg/L,IgE 2.3 U/ml.淋巴细胞分类T淋巴细胞(CD3~+)0,B淋巴细胞(CD19~+)58%,NK细胞(CD16~+CD56~+)42%.基因分析患儿为IL-7Rα基因的复合杂合突变.在第4内含子剪接位点+1位发生突变[intron4(+1)GA],患儿父亲为此突变基因的携带者;第5外显子638位核苷酸发生无义突变(638 CT,R206X),患儿母亲为此突变基因的携带者.第4内含子剪接位点突变[intron4(+1)GA]为首次报道的突变类型.RT-PCR检测发现患儿IL-7Rα mRNA表达明显降低.患儿IL-7Rα cDNA经巢式PCR扩增并T-A克隆,测序发现外显子4出现64个核苷酸缺失(496-559del,K158fs160X).结论 通过临床筛查和基因分析,鉴定出我国首例IL-7Rα基因复合杂合突变[intron4(+1)GA和638 CT]患儿.
关键词： 重症联合免疫缺陷 白细胞介素7受体α亚单位 突变 -
再生障碍性贫血患者CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞及T淋巴细胞亚群表达的研究
[目的]探讨再生障碍性贫血(AA)患者CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞(Treg)和T淋巴细胞亚群的表达及其在疾病发生发展过程中的意义.[方法]采用流式细胞术分别检测本院28例AA患者和20例健康对照组外周血CD4+ CD25+ CD1271ow/-Treg的比例以及T淋巴细胞亚群的表达.[结果]AA患者组CD4+ CD25+ CD127low/-/CD4+ Treg为(4.60±2.11)％,健康对照组为(7.50±1.62)％,两组比较差异具有显著性(P＜0.05).外周血T淋巴细胞亚群的表达AA组为CD3+ CD4+/CD3+ (Th):(42.47±5.22)％,CD3+ CD8+/CD3+ (Ts):(47.46±7.06)％,Th/Ts:0.92±0.19,健康对照组分别为CD3+ CD4+/ CD3+(Th):(53.28±4.92)％,CD3+ CD8+/CD3+ (Ts):(37.06±6.08)％,Th/Ts:1.52±0.33,两组比较差异均具有显著性(P＜0.01).[结论]AA患者CD4+ CD25+ CD127low/-Treg细胞数量的减少可能使免疫活性细胞逃避机体对它们的免疫调节,导致体内诱导免疫耐受机能不足,从而促进疾病的发生发展.AA患者存在T淋巴细胞亚群的失调,CD4+T淋巴细胞减低,CD8+T淋巴细胞增多导致CD4+/CD8+比值降低可能是其重要的免疫学发病机制,进行CD4+ CD25+ CD127low/-Treg和T淋巴细胞亚群的检测有助于评估AA患者免疫功能状态及辅助诊断和指导治疗.
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抗逆转录病毒治疗对中国HIV感染者IL-7/IL-7R的影响
目的 探讨抗逆转录病毒治疗对中国HIV感染者IL-7/IL-7R的影响.方法 选取HIV感染者35例,健康对照者30例.对HIV感染组治疗前、治疗1年后及健康对照组血浆IL-7水平、CD4+、CD8+T细胞上IL-7R(CD127)的表达、CD4+T细胞数量进行分析比较.结果 中国HIV感染者治疗前血浆IL-7水平[(8.98±3.77) pg/ml]较健康人群[(3.84±0.86)pg/ml]升高(P＜0.05),CD4+T细胞[(202.65±121.54)个/μl]、CD4+ CD127+T细胞[(60.25±11.75)％)]及CD8+CD127+T细胞[(46.27±12.10)％]则较健康人群[(766.99±103.21)个/μl、(76.89 ±20.01)％、(81.27±12.35)％]下降(P＜0.05).抗逆转录病毒治疗(ART)治疗后血浆IL-7水平[(5.55±1.35) pg/ml]较治疗前下降(P＜0.05),CD4+T细胞[(450.58 ±152.85)个/μl]、CD4+ CD127+T细胞[(69.82±15.24)％]及CD8+ CD127+T细胞[(59.23±14.73)％]较治疗前升高(P＜0.05),但仍未能达到健康对照组水平(P＜0.05).结论 ART可以使HIV感染者血浆IL-7水平及T淋巴细胞上CD127表达较治疗前恢复,但仍不能达到健康人群水平.
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白细胞介素-7受体α联合细菌鞭毛蛋白对异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病作用的初步探讨
目的 分析白细胞介素(IL)-7受体α(IL-7Rα)、细菌鞭毛蛋白单用及联合作用于小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型的疗效,探讨其可能机制.方法 以BALB/C(H-2d)雌性小鼠为受鼠,均接受9 Gy 60Co全身照射,取C57BL/6(H-2b)供鼠骨髓细胞1×107个和脾细胞2×107个经尾静脉输注给受鼠.将受鼠分为单纯照射移植组(A组)、IL-7Rα干预组(B组)、细菌鞭毛蛋白干预组(C组)、IL-7Rα联合细菌鞭毛蛋白干预组(D组),每组6只,观察受鼠的症状、体征、生存时间及造血功能恢复情况.结果 A组小鼠生存期为(22.5±2.30)d,30d生存率为50.0％(3/6), 、且出现明显的倦怠、食欲缺乏、脱毛、弓背等aGVHD表现；B组小鼠生存期为(25.83±3.49)d,30 d生存率为33.3％(2/6),aGVHD表现较A组轻；C组小鼠生存期为(26.33±3.52)d,30 d生存率为33.3％(2/6),亦出现aGVHD表现,程度同B组；D组小鼠生存期为(30.17±2.86)d,30 d生存率为66.7％(4/6),aGVHD表现较前3组轻.4组小鼠外周血白细胞计数均于移植后第7天降至低,后逐渐恢复,A组较3组干预组恢复慢,B、C两组移植后第14、21、28、30天外周血恢复比较,差异均无统计学意义(均P＞ 0.05)；D组小鼠外周血较B、C组恢复快,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).4组小鼠移植后第2周CD3+T细胞比例均明显下降,第3周开始逐渐上升,与A组比较,B、C、D3组小鼠CD3+T细胞比例上升明显,B、C两组移植后第2、3、4周比较,差异均无统计学意义(均P＞ 0.05)；D组小鼠较B、C组小鼠T细胞亚群CD3+T细胞恢复快(均P＜0.05).结论 通过全身照射能成功建立aGVHD小鼠模型；外源性IL-7Rα、细菌鞭毛蛋白均可减轻aGVHD的发生,两者单用无明显差异,二者联合干预aGVHD小鼠模型与单一干预比较,aGVHD发生更轻,造血恢复会更快.
