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多重快速鉴别病原微生物的新技术:xMAP液态芯片
多指标同步分析(Flexible Multi-Analyte Profiling,xMAP)液态芯片技术是美国Luminex公司近年来开发的一种新型生物芯片技术.这种基于微球的芯片技术能够对单孔内多达100种不同的反应同时进行检测,与固相芯片或片膜芯片相比,具有多重、快速、灵敏度高(可达0.01pg)、重复性好(CV《5%)以及检测动态范围宽(可达0.2～32000pg/ml)等优点.目前,该技术已被广泛应用于各研究领域,尤其在核酸、蛋白质和其他生物分子的大规模分析中.
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Luminex Flexmap 3D液相芯片系统的应用及使用维护技巧
Luminex Flexmap 3D液相芯片系统是美国luminex公司于近年推出的新一代超高通量检测系统，该系统是基于Flexmap 3D技术（又称流式荧光技术、液态芯片），以抗体为基础，荧光编码微球为核心，整合激光检测、应用流体学、高速数字信号和计算机运算法则等多项技术，从而实现多因子的高通量检测。被誉为以功能基因组学和蛋白质组学为核心的后基因组技术，可广泛应用于临床诊断、生物医学研究、生物制药等领域，是医学诊断技术和疾病机制研究等的重要发展方向。
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液态芯片技术及其应用
液态芯片(liquid array)或液相芯片(liquid chip)也称悬浮芯片(suspension array),是20世纪70年代美国Luminex公司研制出的新一代生物芯片技术,利用带编码的微球体作为载体,流式细胞技术作为检测平台,对核酸、蛋白质等生物分子进行大规模测定.
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Luminex液态芯片在临床及科研中的应用
Luminex 液态芯片是一个多功能、多指标并行分析系统,集编码微球、激光技术、流式细胞、数字信号处理等技术于一体,具有高通量、既能检测蛋白,又能检测核算等特点,可广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究.本文就液态芯片技术的原理、特点及在临床和科研中的应用进行阐述.
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液态芯片技术联合检测IFN-γ和IP-10诊断结核性胸腔积液
目的：应用液态芯片技术联合检测胸腔积液中干扰素（IFN）-γ、IFN-γ诱导蛋白（IP）-10水平，探讨其在临床快速诊断及鉴别诊断结核性胸腔积液中的应用价值。方法选取渗透性胸腔积液患者，其中结核性胸腔积液组52例；恶性胸腔积液组38例。利用结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）测定其对结核杆菌反应的效应T细胞数量，即斑点形成细胞数（SFCs），同时利用液态芯片技术测定其IFN-γ和IP-10水平，通过Logistic逐步回归法评估IFN-γ和IP-10联合诊断时的价值，并比较两种诊断方法的价值。结果 T-SPOT.TB法诊断结核性胸腔积液的灵敏度为90.38%，特异度为84.21%，ROC曲线下面积（AUC）及95%CI为0.938(0.867~0.978)；IFN-γ、IP-10联合诊断结核性胸腔积液时的灵敏度为98.08%，特异度为97.37%，AUC及95%CI为0.995（0.951~1.000）。2种诊断方法灵敏度和特异度的差异不明显；2种方法诊断一致性良好（Kappa=0.703）；方法间AUC比较差异有统计学意义（Z=1.996， P<0.05），检测IFN-γ、IP-10水平联合诊断时AUC较大（AUC=0.995）。结论利用液态芯片技术同时检测IFN-γ、IP-10水平联合诊断结核性胸腔积液满足了临床快速、准确诊断及鉴别诊断结核性胸腔积液的需要。
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呼吸道感染致病菌16S rRNA基因V3、V6可变区序列分析及在液态芯片中应用的探索性研究
目的 探讨呼吸道感染致病菌16S rRNA基因V3、V6可变区在液态芯片系统的应用价值.方法 通过GenBank公布的呼吸道感染致病菌16S rRNA基因序列,设计并合成探针及引物,建立液态芯片检测系统,检测福建省立医院收集的52例呼吸道感染痰标本抽提的DNA,与测序结果比对,分析其灵敏度和特异度.结果 呼吸道感染致病菌16S rRNA基因V3、V6区均存在差异,应用液态芯片可在3.5h得到检测结果,铜绿假单胞菌16S rRNA V6探针,可检测浓度大于102/μl标本,检测灵敏度为100.0％,特异度为100.0％;金黄色葡萄球菌16S rRNA V3探针灵敏度为66.7％,特异度为98.0％;金黄色葡萄球菌16S rRNA V6探针灵敏度为0.0％.结论 呼吸道感染致病菌16S rRNA基因V3、V6可变区差异可应用于病原学诊断,但不适合检测所有的呼吸道感染致病菌.
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液态芯片的原理及其在临床诊断中的应用
液态芯片,是美国Luminex公司在流式细胞技术、ELISA技术和芯片技术基础上推出的多重分析技术平台,其大特点是一次反应多可同时检测500种指标,是唯一得到美国FDA批准的,也是唯一被纳入美国临床实验室质控网络的高通量诊断技术.被国际业界专家评价为临床诊断的趋势性技术之一.本文就液态芯片的技术原理及其在临床诊断中的应用做简要综述.
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液态芯片的高敏感性检测HIV-1 RNA
目的 建立高敏感的液态芯片检测血液HIV-1 RNA的方法.方法 抽提NASBA(nucleic acid sequence-based amplification)确定HIV-1 RNA载量的患者血浆RNA,对HIV-1引物进行生物素标记,行一步法RT-PCR扩增靶HIV-1 gag区片段.PCR产物与两个交联HIV-1特异探针的微球杂交,同时对于H1V-1病毒载量在100～790拷贝/ml样本进行荧光定量PCR检测.结果 对NASBA确定阳性的上海108例(载量170～3 300 000)、COBAS定量的北京86例阳性(栽量477～2 040 000)以及5例NIH的HIV标准品(＜100;273;1 610;11 300;33 800)的结果进行液态芯片多区段检测HIV-1 RNA,总阳性率为96.98%(193/199),液态芯片检测的敏感性与NASBA、COBAS方法相当(P＞0.05),对于HIV-1 RNA载量在180～790拷贝/ml的13个样本的荧光定量PCR未检测到信号,液态芯片检测结果为阳性.结论 多区段液态芯片法检测HIV-1 RNA灵敏度高、特异性强、重复性好,降低漏检率,而且具有操作简便、快速、低成本的特点,将液态芯片技术应用于血液筛查将有助于提高HIV-1阳性血液的检出率和输血的安全性.
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4051例妇女子宫颈上皮细胞HPV感染与基因分型调查
目的 探讨妇女宫颈细胞中26种人乳头瘤病毒(HPV)感染的基因型分布情况.方法 采用流式荧光-液态芯片技术对4 051例女性宫颈上皮细胞标本进行HPV基因型别检测.结果 HPV阳性患者共1 299例,其中高危型1 026例(78.98％),低危型HPV 273例(21.02％).高危型HPV常见型别分别为52、16、58、56、18型,低危型分别为61、44、6型；在阳性患者中有两种型别以上HPV感染者335例(25.79％).HPV分型检测的妇女大多集中在26 ～ 30岁及31～35岁；16型在＜ 25岁及41～45岁年龄段感染率较高,出现两个高峰；52型在整个年龄段上感染率处于较高水平,未出现明显高峰；58型在＞50岁老年妇女中感染率较高.结论 HPV感染型别普遍化、两极分化明显,对于＜25岁及＞50岁妇女应加强随访.流式荧光-液态芯片技术可用于宫颈细胞HPV感染的检测.特异性强、敏感性高.
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液态芯片技术测定肿瘤标志物的可行性评价
甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异抗原(PSA)、糖类相关抗原125( CA125)是临床广泛应用的肿瘤标志物.液态芯片技术是新发展的一种高灵敏度、高通量的标记免疫分析技术,可在同批次内对多种分析物进行快速检测[1].本文对液态芯片技术和化学发光免疫分析技术检测AFP、CEA、PSA、CA125的结果进行比对分析,现报告如下.1材料与方法1.1标本 收集本院体检和就诊者检测AFP、CEA、PSA、CA125的新鲜血清,于-20℃保存待测.
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液态芯片技术在临床实验室诊断中的应用
液态芯片(1iquid chip)是近年来新出现的一种临床应用型生物芯片,是以分类编码微球作为反应及信号检测载体,在液相反应体系中实现蛋白质、核酸等多种生物大分子的同步检测.既保持了生物芯片高通量的特性,又具有高灵敏度、高准确度、高精密度和线性测定范围宽及易操作等特点,在临床实验诊断领域具有广阔的应用前景.现就其基本原理、检测、特点在各临床诊断方面的应用作一综述.
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转化生长因子-β1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-γ在乳腺肿瘤患者血清中的水平
目的 检测乳腺肿瘤患者血清中细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-γ(TNF-γ)的水平,探讨这些细胞因子在乳腺肿瘤发生发展过程中的作用.方法 选取乳腺癌患者100例(恶性组)和乳腺良性肿瘤患者100例(良性组),健康女性72例(正常组),应用液态芯片(Luminnex)技术检测3组血清细胞因子TGF-β1、IL-6、干扰素(IFN)-γ的水平,采用t检验比较3组血清细胞因子水平的差异,采用Mann Whitney检验和Kruskal Wallis检验比较细胞因子水平与乳腺癌临床病理持征的关系.结果 3组TGF-β1水平不同,恶性组、良性组、正常组血清TGF-β1水平分别为(26.78±5.79)、(20.01±4.41)、(13.39±4.03)μg/L,差异有统计学意义(P＜0.01);良性组比正常组血清TGF-β1水平高,差异有统计学意义(P＜0.05).在恶性组患者中,淋巴结阳性较阴性血清TGF-β1水平高,差异有统计学意义(P＜0.05);不同临床分期TGF-β1水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05).3组IL-6、IFN-γ水平差异均无统计学意义(P＞0.05).恶性组血清IL-6、IFN-γ与患者临床病理特征均无相关(P＞0.05).结论 TGF-β1在乳腺恶性肿瘤、良性肿瘤和正常人群中的表达差异有统计学意义,同时与乳腺癌淋巴结转移和临床分期相关.
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卵巢癌血清新型肿瘤标志物研究与应用现况
卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤之一,死亡率高居榜首,早期诊断率仅30％,提高早期诊断水平对改善预后具有重要意义.近年来,筛查技术发生了巨大革新,各种新型肿瘤标志物被相继发现,联合检测多种肿瘤标志物、液体活检、液态芯片技术等在肿瘤早期筛查中日益重要,对于提高卵巢癌早期诊断水平、改善治疗效果、降低患者病死率等具有重要意义.本文对卵巢癌诊断相关肿瘤标志物新进展进行综述.
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多肿瘤标志物液态芯片技术检测恶性肿瘤的临床应用价值
目的探讨多肿瘤标志物液态芯片技术检测恶性肿瘤的临床应用价值.方法利用多肿瘤标志物液态芯片技术分析121例恶性肿瘤患者、42例良性疾病患者、39例正常对照者血清中9种常见肿瘤标志物的水平,分析该方法的灵敏度、特异性和检出肿瘤的阳性率.结果该方法对恶性肿瘤的检测有较好的灵敏度和特异性(分别为81.8%和76.5%),对肺癌、肝癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌、胰腺癌和前列腺癌等常见肿瘤进行9项指标联合检测的阳性率均高于单一标志物的检测(P<0.05).结论多肿瘤标志物液态芯片定量检测是一种较好的肿瘤标志物检测方法,可以明显提高恶性肿瘤诊断的敏感性,同时也可以作为高危人群的早期肿瘤筛查手段之一,对肿瘤防治具有一定的意义.
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液态芯片监测铜绿假单胞菌多重耐药基因的研究
目的 建立以液态芯片为检测手段的快速、高通量的铜绿假单胞菌多重耐药基因监测技术平台,探索建立能够常规应用于临床并解决现行临床表型测定局限性的分子生物学技术.方法 针对铜绿假单胞菌中常见的OPRD2、TEM、OXA10、AAC3、AAC6、VIM、VEB、IMP共8个耐药基因序列进行分析,依次对这8个耐药基因设计多重PCR扩增引物和序列特异的核酸探针,选取临床鉴定的含各耐药基因的耐药菌株作为阳性参比品进行检测工艺优化,进行铜绿假单胞菌多重耐药基因液态芯片监测平台的研发.结果 初步建立了铜绿假单胞菌多重耐药基因液态芯片监测平台,组装了铜绿假单胞菌多重耐药检测液态芯片试剂盒1套.选择了8株含各耐药基因铜绿假单胞菌阳性菌株,用组装的试剂盒重复检测10次,耐药基因检测阳性率为100％,各耐药基因检测信号间无交叉,灵敏度、特异度以及重复性都很好.利用此平台进行了一定数量的临床标本检测分析.从检测结果来看,40份标本中,18份标本耐药基因阳性,其中含多耐药基因的标本有9份,占50％.18份阳性标本的耐药基因与耐药表型分析结果一致.结论 此监测平台是将一种多重扩增技术和芯片技术-悬浮阵列技术相结合的方法,具有特异性高、可组合筛查、检测通量高的优势.
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采用xMap技术检测肺癌患者外周血单个核细胞microRNA的表达变化及其意义
目的 探讨外周血单个核细胞中microRNA(miRNA)在肺癌患者和正常对照者中的差异及其临床意义.方法 采用RNA-DNA嵌合探针,利用液态芯片(xMap)技术检测30例肺癌患者治疗前和30例正常对照者外周血单个核细胞中miR-20a、miR-21、miR-31、miR-126、miR-145、miR-222、miR-372的表达量.结果 肺癌患者外周血单个核细胞中miR-145、miR-20a、miR-222、miR-21、miR-372高于正常对照者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 利用RNA-DNA嵌合探针,采用xMap检测技术,能准确快速地检测肺癌患者外周血单个核细胞中miRNA,其表达的变化可能与肺癌的发生、发展有密切关系,对肺癌的早期诊断可能有一定价值.
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采用液态芯片技术调查重庆地区妇女HPV感染及亚型分布
目的 调查重庆地区女性人乳头状瘤病毒(HPV)感染状况及亚型分布特点.方法 采用液态芯片技术对重庆地区424例妇女进行HPV基因分型检测以分析HPV感染情况.结果 424例患者中共检出HPV阳性者114例,阳性率为26.89%.检出率较高的高危型有HPV16(11.84%),HPV52(11.18%),HPV31(10.53%),HPV58(7.89%);检出率高的低危型是HPV6(12.50%).HPV单一感染占70.18%,多重感染占29.82%;不同年龄段人群HPV阳性率有差异,20～29岁年龄段妇女HPV阳性率高(31.82%,42/132).结论 本地区HPV感染在亚型及年龄分布上具有一定的特点,且与其他地区存在差异.
