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半枝莲总黄酮微丸的制备及含量测定
目的 制备半枝莲总黄酮微丸并建立其含量测定方法.方法 采用挤出滚圆法制备半枝莲总黄酮微丸,采用正交实验法优化佳制备工艺,采用吸光光度法测定半枝莲总黄酮(以野黄芩苷和木犀草素计)含量.结果 按照佳工艺制得的半枝莲总黄酮微丸外形美观,圆整度良好,大小均匀,平均得率为97.06%;半枝莲总黄酮含量以野黄芩苷计5.02mg/g,RSD为1.60%;以木犀草素计2.03mg/g,RSD为0.84%.结论 佳制备工艺稳定可行,所建立的含量测定方法准确可靠,可用于半枝莲总黄酮微丸制备及质量控制.
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莲草口服液的质量标准控制方法探讨
目的 建立莲草口服液的质量标准.方法 采用高效液相色谱法对莲草口服液中的主要成分野黄芩苷、对香豆酸进行含量测定.结果 野黄芩苷进样蕈在0.208～1.042μg范围内与峰面积线性关系良好,(r=0.9999)(n=5),平均回收率为100.3%,RSD=0.81%(n=6);对香豆酸进样量在0.079～0.394μg范围内与峰面积线性关系良好,(r=0.9994)(n=5),平均回收率为99.6%,RSD=0.94%(n=6).结论 建立了莲草口服液的含量测定方法.该方法精确,重现性好,操作简便,可作为莲草口服液质量控制标准.
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双黄连注射剂中野黄芩苷致敏家兔后血清中特异性抗体的测定
目的 ELISA法检测双黄连注射剂中小分子半抗原成分野黄芩苷致敏家兔血清中的特异性抗体效价.方法 取新西兰兔,随机分为野黄芩苷组和对照组,采血,制备血清.分别将野黄芩苷与野黄芩苷组家兔血清体外孵育,与弗氏完全佐剂混合制成野黄芩苷-血浆蛋白完全抗原.多次免疫动物后获得针对双黄连注射剂中过敏性半抗原成分野黄芩苷的特异性抗体,ELISA法检测抗血清的抗体效价,间接竞争ELISA法测定血清的特异性,采用ELISA试剂盒检测抗血清中IgE抗体的含量.结果 对照组家兔抗血清中无额外的特应性抗体产生.野黄芩苷组抗血清中产生了高滴度的抗体,该抗体是由野黄芩苷致敏产生的,具有一定的特异性.野黄芩苷组家兔抗血清中产生了高滴度的IgE型抗体,比对照组高出了63.3%,提示野黄芩苷有潜在的致敏性.结论 野黄芩苷在此实验条件下对家兔能够产生特异性的高效价抗体,可能具有潜在的致敏性.
关键词： 双黄连注射剂 野黄芩苷 致敏性 免疫球蛋白E(IgE) -
HPLC同时测定灯盏细辛提取物中3种有效成分的含量
目的:建立同时测定灯盏细辛提取物中野黄芩苷,3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,大连依利特C18色谱柱(4.6mm x 250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％磷酸(22:78),检测波长330 nm,流速1 mL· min-1,柱温35℃.结果:野黄芩苷,3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸分别在0.032 7～1.3080 μg(r=0.9999),0.048 2 ～1.928 0μg(r =0.999 9),0.058 3～2.332 0 μg(r =0.999 8)呈良好的线性关系,加样回收率分别为99.74％(RSD=1.9％),100.23 ％(RSD=1.4％),99.33 ％(RSD=1.3％).结论:本法简便、快捷,结果准确、重复性好,可用于灯盏细辛提取物中3种有效成分的含量测定.
关键词： 灯盏细辛提取物 野黄芩苷 3 5-二-O-咖啡酰奎宁酸 4-二-O-咖啡酰奎宁酸 含量测定 -
HPLC同时测定茵山莲颗粒中5个有效成分的含量
目的:建立多波长同时测定茵山莲颗粒中绿原酸、栀子苷、野黄芩苷、甘草酸和五味子醇甲含量的HPLC法.方法:采用Wonda SilTM-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈(A)-0.4％磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0～5 min,86％B;5～35 min,86％ ～20％ B;35～45 min,20％B),流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长分别为325 nm(绿原酸),240 nm(栀子苷),335 nm(野黄芩苷),250 nm(甘草酸),220 nm(五味子醇甲).结果:绿原酸、栀子苷、野黄芩苷、甘草酸和五味子醇甲5个成分的线性范围分别为0.008 5～ 0.170 μg(r=0.999 5),0.046 2～0.924 μg(r =0.999 0),0.021 6～ 0.432 μg(r=0.999 2),0.019 7 ～0.394 μg(r =0.999 3),0.004 5 ～0.090 μg(r=0.999 9);平均加样回收率95.8％ ～ 98.4％.3批样品中上述5个成分的含量分别为1.105～1.134,5.139 ～5.204,2.546～2.603,2.208 ～2.231,0.352～0.361 mg·g-1.结论:该方法符合方法学验证要求,可用于茵山莲颗粒的5个指标性成分的同时测定.
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灯盏花素滴丸的溶出度研究
目的:建立灯盏花素滴丸的溶出度测定方法.方法:采用Agilent TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-四氢呋喃-0.1％磷酸溶液(14∶14∶72)为流动相,流速0.8 mL·min-1,检测波长335 nm.应用桨法,以磷酸盐缓冲液(pH 6.8)为溶出介质,转速为50 r·min-1,对灯盏花素滴丸中野黄芩苷进行了溶出度测定.结果:野黄芩苷的线性范围为20.8 ～416 μg·L-1(r =0.9999),平均回收率(n=6)为99.92％ (RSD 0.43％).采用试验确定的方法,灯盏花素滴丸在20 min时累积溶出率可达70％.结论:灯盏花素滴丸批内和批间样品的累积溶出率差异较小,说明所建立的方法重复性较好,可用于灯盏花素滴丸的质量控制.
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半枝莲总黄酮AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺优选
目的:优选半枝莲总黄酮提取液的前处理工艺及AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺.方法:以野黄芩苷转移率、溶液颜色及澄清度为指标,考察半枝莲提取液的前处理工艺.以野黄芩苷转移率和出膏率为指标,采用单因素试验考察洗脱剂浓度、水洗量、洗脱流速等对半枝莲总黄酮AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺的影响.结果:前处理工艺为调节提取液pH 3.0～3.3,离心2次,野黄芩苷转移率达90％.AB-8型树脂纯化的佳工艺条件为径高比1∶5,上样液质量浓度0.17g·mL-1,药材量-树脂体积(1∶2),上样流速2 BV·h-1,水洗量4.5 BV,洗脱溶剂40％乙醇,洗脱剂用量5.5 BV,洗脱流速4 BV·h-1;野黄芩苷转移率约93％,质量分数约8％,出膏率约2.5％.结论:提取液的前处理工艺可显著降低半枝莲纯化物的出膏率和颜色,优选的AB-8型大孔吸附树脂纯化工艺稳定可行,适用于工业化生产.
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灯盏花素凝胶剂的制备及质量控制
目的:制备灯盏花素凝胶剂,并以野黄芩苷含量、凝胶pH等为质量控制指标,建立质量控制方法.方法:以灯盏花素为主药,卡波姆940等为基质,制备灯盏花素凝胶剂.对其性状进行评价,测量pH,建立高效液相色谱法测定野黄芩苷含量的方法,并进行初步稳定性研究.结果:灯盏花素凝胶剂性状稳定、pH在6.00 ～7.00,符合2010年版《中国药典》规定,凝胶中野黄芩苷含量不少于8 mg·g-1,且初步稳定性良好,可长期存放.结论:灯盏花素凝胶剂的质量稳定,控制方法简便可行,结果准确可靠,重复性好,可作为本制剂的质控标准.
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HPLC法测定茵山莲颗粒剂中野黄芩苷含量
目的:建立茵山莲颗粒剂含量测定方法.方法:采用液相色谱法对茵山莲颗粒剂中野黄芩苷含量加以测定.以shim-pak clc-ODS(4.6mm×150mm,5 μm)为色谱柱,以甲醇-0.025 mol·L-1磷酸水(37:63)为流动相,检测波长为335 nm.结果:野黄芩苷对照品进样量在(0.1216～0.608)μg范围内线性关系良好,方法的回收率为97.38%(n=5),RSD=1.7%.结论:该试验含量测定方法快速,准确,方法的稳定性,重复性良好.可用于茵山莲颗粒剂的质量控制.
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灯盏花素分散片的处方及工艺研究
目的 制备灯盏花素分散片,确定工艺流程.方法 以崩解时限和片剂硬度为指标,采用单因素考察和正交设计安排试验,通过综合加权评分对灯盏花素分散片处方进行筛选、优化.结果 按优选处方制备的灯盏花素分散片可在3 min内完全崩解并且全部通过2号筛,符合<中华人民共和国药典>对分散片的要求,其体外溶出度明显优于普通片.结论 通过验证,所选处方及工艺可操作性强、重现性好,能适应工业大生产的要求.
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野黄芩苷镇痛作用的实验研究
目的:研究野黄芩苷的镇痛作用.方法:采用小鼠热板和小鼠扭体试验模型,观察药物对疼痛反应的影响.结果:腹腔注射200mg/kg野黄芩苷30～90min,小鼠对热刺激的痛阈值明显升高(与溶媒组比较P＜0.01或0.05),镇痛强度与阿司匹林相近(P＞0.05),但弱于25mg/kg吗啡(P＜0.01).皮下注射50～200mg/kg 野黄芩苷皆可显著抑制醋酸所致小鼠的扭体反应(与溶媒组比较P＜0.01或0.05),各剂量组间差异不显著(P＞0.05),镇痛强度弱于5mg/kg吗啡(P＜0.01);1.5mg/kg野黄芩苷侧脑室给药亦可显著抑制小鼠的扭体反应(与溶媒组比较P＜0.05).结论:野黄芩苷具有显著的镇痛作用,其机制与中枢作用有关.
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高效毛细管电泳法测定灯盏花素固体分散体中野黄芩苷含量
目的 建立高效毛细管电泳法测定灯盏花素固体分散体中野黄芩苷含量的方法.方法 电泳条件:石英毛细管柱(60 cm×75 μm),运行缓冲液40 mmol/L硼砂溶液(25 ℃,pH＝9.0),分离电压20 kV,进样时长同为5 s,温度为25 ℃,检测波长为280 nm.结果 野黄芩苷在0.1～4 mg/mL范围内呈良好的线性关系,加样回收率为99.35%,RSD＝0.47%(n＝9).结论 毛细管电泳法用于测定灯盏花素中野黄芩苷的含量稳定可行.
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灯盏花中单体成分对体外培养大鼠视网膜神经细胞的影响
目的:考察咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷对体外培养视网膜神经细胞存活的影响,探讨灯盏花中具视神经保护作用的有效成分.方法:采用胰酶消化法将18只出生2～3 d的乳鼠视网膜制成细胞悬液,接种于经多聚鸟氨酸(HA)和层粘连蛋白(LN)包被的96孔板中.于培养3 d后,分别加入PBS液及不同含量的咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷溶液继续培养2 d,采用MTT比色法测量其存活细胞的吸收值,同时对部分细胞行Nissel体染色检查. 结果:Nissel体染色检查结果表明,培养5 d的存活细胞大部分均为神经细胞.与空白对照组比较,咖啡酸含量在3.9～1 000 μg·mL-1、东莨菪内酯、野黄芩苷含量在250～1 000 μg·mL-1时,其吸收值均明显增加(P<0.05,P<0.01),且有一定的量效关系.结论:咖啡酸、东莨菪内酯、野黄芩苷三者均能促进体外培养的视网膜神经细胞存活,且咖啡酸活性强.
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UPLC-MS/MS研究注射用复方荭草中原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷的大鼠组织分布
目的:建立同时测定大鼠静脉注射复方荭草后组织器官中原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷含量的UPLC-MS/MS分析方法,研究3种指标成分在大鼠体内的分布特征.方法:采用Acquity UPLC系统,BEH C18柱(2.1 mm×50mm,1.7 μm,美国Waters公司),流动相为乙腈-0.1％甲酸水梯度洗脱,流速为0.35 mL·min-1.采用电喷雾电离源(ESI),扫描方式为多反应离子监测(MRM)；组织样本采用机械匀浆、甲醇沉淀处理供测定.结果:3种成分的线性关系良好(r＞0.99),准确度、日内和日间精密度、提取回收率均符合生物样品的分析要求.大鼠注射复方荭草后原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷主要分布在肾、肺、心等器官中,在脑中分布少.结论:指标成分分布研究表明,大鼠静脉给予注射用复方荭草后,体内分布具有不均衡的特征,血流充沛组织的分布相对较多；药物在体内各组织器官消除迅速,无蓄积情况；建立的方法可特异、灵敏、快速地同时测定大鼠组织中的原儿茶酸、异荭草素和野黄芩苷.
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HPLC测定扶正散结片中野黄芩苷的含量
扶正散结片是新开发的中药复方制剂,处方由半枝莲、白花蛇舌草、白花丹、小叶金花草、白英、山豆根、紫草、人工牛黄、石上柏、制半夏、蒲葵子、防己、八月札、人参、三七、龙血竭、蟾酥、绞股蓝、制草乌、甘草等20味药精制而成,具有清热解毒、消肿化瘀、止血定痛、益气固本等功效,用于肺癌、肝癌等的治疗.半枝莲是方中的君药,有清热解毒,化瘀利尿的功效[1],而野黄芩苷是半枝莲中的有效成分之一[2].
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HPLC法测定复方斑蝥胶囊中野黄芩苷的含量
复方斑蝥胶囊为卫生部颁品种(WS3-B-3272-98),由斑蝥、刺五加、半支莲等11味中药组成,具有破血消淤、攻毒蚀疮等功效.用于原发性肝癌、肺癌、直肠癌等.临床上应用较好.该品种原标准中无含量测定项,为更好地控制其质量,参照文献[1],作者研究了该品种的含量测定方法.方中半支莲具有清热解毒之功效,是主要药味之一,故选用半支莲中的野黄芩作为含量测定指标.
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灯盏细辛注射液中绿原酸和野黄芩苷的含量测定
灯盏细辛注射液广泛应用于心脑血管疾病的治疗,该注射液的原药材灯盏细辛是菊科植物短亭飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz的干燥全草,又名灯盏花、东菊.灯盏细辛的化学成分主要有黄酮类,咖啡酸酯类等[1-3],药理研究报道其主要有抗脑缺血、抗心肌梗死、降低血液胆固醇及纤维蛋白、保护微血管内皮、抗肝纤维化、抗炎等作用[4-5].绿原酸和野黄芩苷是灯盏细辛注射液中两种主要活性成分.本实验采用高效液相色谱法,测定灯盏细辛注射液中绿原酸和野黄芩苷的含量,为灯盏细辛注射液的质量控制提供一定的依据.
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野黄芩苷体外促成骨分化作用研究
目的：研究野黄芩苷的体外促成骨分化作用。方法利用荧光素酶报告基因系统检测野黄芩苷对稳定转染bmp2启动子的 MC3T3-bmp2-Luc细胞中bmp2转录活性的影响；体外培养小鼠颅骨来源的前体成骨细胞系 MC3T3-E1和小鼠多能间充质干细胞样成纤维细胞 C3H10T1/2，采用 MTT的方法检测野黄芩苷对细胞增殖的影响；p-NPP 法检测野黄芩苷对成骨细胞内碱性磷酸酶活性的影响以及通过茜素红染色的方法考察野黄芩苷对钙化结节形成的影响；Real-time PCR进一步验证野黄芩苷长时间诱导后对成骨细胞bmp2 mRNA水平的影响。结果野黄芩苷可以在20μmol/L显著上调bmp2转录活性（P <0.001）；在1~20μmol/L的剂量浓度范围内，野黄芩苷作用72 h后对 MC3T3-E1细胞增殖不明显但也无杀伤作用。野黄芩苷在两种实验用细胞中均能剂量依赖地上调 ALP的活性，其中10μmol/L和20μmol/L为显著（P <0.05），并且在 C3H10T1/2细胞中该作用呈时间依赖性。同时也观察到24 d诱导后，野黄芩苷（5~10μmol/L）可以增加成骨细胞钙化结节的数目，且诱导12 d后，在5~20μmol/L浓度下上调bmp2 mRNA的水平。结论野黄芩苷具有体外促成骨分化的活性，有潜力成为抗骨质疏松候选化合物。
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HPLC法测定复方竹叶石膏颗粒中野黄芩苷的含量
目的 建立测定复方竹叶石膏颗粒中野黄芩苷含量的方法.方法 用HPLC法定量分析处方中的野黄芩苷.色谱柱:VP-ODS(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相:甲醇-10％乙腈的0.1％磷酸溶液(20∶80)；检测波长:335 nm;流速:1.0 ml ·min-1.结果 野黄芩苷在67.20～448.00 μg范围内呈良好的线性关系,该线性回归方程为:Y=1507X-1545,r=1.0000(n=5).平均回收率为99.58％,RSD为1.15％(n=6).结论 该方法准确、灵敏度高,重复性好.
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HPLC法同时测定丹灯通脑胶囊中四组分含量
目的:建立HPLC同时测定丹灯通脑胶囊中葛根素、野黄芩苷、丹酚酸B与丹参酮ⅡA的方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Inerstil-ODS-SP(250 mm ×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱;流速1 mL· min-1;检测波长为280 nm;柱温为30℃.结果:葛根素、野黄芩苷、丹酚酸B、丹参酮ⅡA分别在3.85 ～115.41 μg·mL-1(r2 =0.999 8)、5.77 ～ 173.22 μg· mL-1 (r2 =0.999 9)、11.47 ～ 344.07μg·mL-1 (r2 =0.999 8)和2.08 ～62.04 μg·mL-1(r2 =0.999 9)质量浓度范围内与峰面积具有良好的线性关系;平均回收率(n=9)分别为100.4％,100.4％,99.4％和99.8％.结论:该方法简便、专属、重复性好,可作为丹灯通脑胶囊的质量控制方法.
