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层粘连蛋白、纤粘连蛋白、IV型胶原在人月经周期子宫内膜中的表达
目的研究细胞外基质蛋白层粘连蛋白(LN)、纤粘连蛋白(FN)和IV型胶原(IVCL)在正常人月经周期子宫内膜中的表达. 方法采用免疫组织化学方法检测49例正常月经周期子宫内膜中LN、FN、IVCL蛋白的表达.结果 LN主要分布于腺上皮及腔上皮基底膜,分泌中期表达强.FN主要分布于间质,腔上皮及腺上皮基底膜也均有表达,分泌中期含量丰富.IVCL在腺上皮基底膜的表达分泌中期强,在间质的表达分泌早期强,分泌中、晚期表达逐渐减弱.LN、FN、IVCL在血管基底膜上均有表达,无周期性变化.结论 LN、FN、IVCL在月经周期子宫膜中的表达随月经周期而变化.
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整合素在着床中的作用
近年来,细胞外基质成分(extracellular matrix,ECM)与细胞表面受体相互作用的机制,随着研究的深入已经越来越清楚.这种受体命名为整合素(integrin),是一种完整的跨膜糖蛋白,由两种不同亚单位组成的异二聚体,包括纤粘连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(lamimin,LN)、胶原(collagen,COL)及玻璃粘连蛋白(vitronectin,VN)等受体.整合素和ECM相互作用促进细胞的粘附、生长、迁徙、增殖及分化[1].子宫、输卵管及早期胚胎中广泛存在整合素和ECM.在精卵识别过程中,整合素起调节作用,促使胚泡粘附于子宫内膜上皮,使滋养层细胞侵入子宫内膜,并调节随后的胚胎生长[2].本综述主要讨论整合素在着床中的作用.
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基质金属蛋白酶在多发性硬化中作用的研究进展
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一种与蝌蚪尾巴退化有关的间质蛋白酶,由Gross在1962年首次发现,并将其命名为MMP-1[1].随后按其发现的顺序,MMPs家族已命名至MMP-28.越来越多的资料证实,MMPs是一类依赖于锌和钙离子的蛋白水解酶,主要的生理作用是降解细胞外基质(extracellular matrix,ECM),如胶原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白等[2].MMPs主要由巨噬细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞和内皮细胞产生,当这些细胞受外界特定信号刺激时,促使MMPs合成增加并分泌至ECM[3].MMPs与多发性硬化(multiple sclerosis,MS)的关系近年来受到广泛关注.
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WWOX基因对卵巢癌PEO1细胞黏附能力的影响
目的 观察WWOX基因转染细胞对卵巢癌PEO1细胞黏附能力的影响,并探讨其作用机制.方法 利用已构建的WWOX转染细胞、质粒转染细胞及PEO1母细胞进行黏附实验,观察不同细胞对纤粘连蛋白(Fn)介导的细胞黏附性.利用整合素α和β介导的细胞黏附实验,筛选出与卵巢癌细胞黏附有关的整合素.利用筛选出的整合素,进行封闭卵巢癌细胞表面整合素的功能实验,流式细胞检测整合素的表达情况.结果 在Fn包被的培养孔中培养2 h后,WWOX转染细胞对Fn的细胞黏附性明显低于PEO1母细胞和质粒转染细胞(均P<0.01).在质粒转染细胞中,整合素α2和α3的表达明显高于WWOX转染细胞(均P<0.05),而整合素β1、β2的表达无明显变化(P>0.05);封闭整合素α3后,所有转染细胞对Fn的黏附性明显降低,与非特异性抗体IgG相比,差异有统计学意义(P<0.05),而封闭整合素α2后,与非特异性抗体IgC相比,差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞检测结果显示,在WWOX转染细胞中,整合素α3的表达明显低于质粒转染细胞(P<0.05).结论 WWOX基因通过调节卵巢癌细胞与细胞外基质的相互作用,降低整合素α3活性,进而降低卵巢癌细胞对Fn介导的黏附性.
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血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的子宫内膜上皮细胞增殖和转分化的影响
目的 了解血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对子宫内膜上皮细胞(EECs)增殖和活性的影响.方法 体外分离、培养和鉴定EECs.试验分4组:对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组和AngⅡ+Ang-(1-7)组,采用噻唑蓝(MTT)法观察各组EECs增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测各组EECs中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮性钙粘附素(E-cadherin)的表达水平;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和纤粘连蛋白(FN)的含量.结果 在48和72 h时,AngⅡ组EECs数量明显增加;细胞中α-SMA蛋白的表达升高(77.67±1.78),E-cadherin的表达降低(26.56±2.09);ColⅠ和FN分泌均增加(0.8320±0.0292,0.752 8±0.071 2),与对照组相比,其差异有统计学意义(P＜0.05).Ang-(1-7)+AngⅡ组的EECs数量减少;细胞胞质中α-SMA的含量降低(33.58±1.34),而E-cadherin的含量升高(66.86±2.76);Col Ⅰ和FN分泌均减少(0.635 5±0.026 5,0.557 3±0.038 5),与AngⅡ组相比,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Ang-(1-7)不仅可拮抗AngⅡ刺激的EECs增殖,还可抑制其活性.
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TGF-β1对子宫内膜基质细胞的增殖和活性的影响
目的 观察和分析TGF-β1对子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)增殖和活性的影响.方法 体外分离、培养和鉴定ESCs.实验分组:对照组和TGF-β1组,对照组:加入不含血清的培养液;转化生长因子-β1(TGF-β1)组:不含血清的培养液+不同浓度的TGF-β1,通过噻唑蓝法检测各组细胞的增殖率;用ELISA法检测各组细胞培养液中Ⅰ型胶原(Collagen type Ⅰ,Col Ⅰ)和纤黏连蛋白(Fibronectin,FN)的含量.免疫印迹法检测各组细胞胞质中的MMP-9及TIMP-1的表达水平.结果 TGF-β1可以促进ESCs增殖,并呈剂量依赖性;使细胞分泌Col Ⅰ (0.736 6±0.042 4)和FN(0.713 1±0.046 8)的量增多,细胞内MMP-9含量减低,而TIMP-1含量升高;与对照组比较,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能使子宫内膜基质细胞增殖,并使其活性增加.
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血管紧张素Ⅱ对人子宫内膜上皮细胞增殖和活力的影响
目的 观察和分析血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人子宫内膜上皮细胞(EECs)增殖和活力的影响.方法 分离原代EECs并常规培养.试验分为对照组和AngⅡ组.对照组:加入不含血清的培养液;AngⅡ组:加入不同浓度的AngⅡ,通过噻唑蓝(MTT)染色察看各组细胞的增殖率;用ELISA法分析各组孵育液中Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和纤粘连蛋白(FN)的含量.免疫细胞化学技术分析各组EECs胞质内的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和上皮性钙粘附素(E-cadhenn)的表达水平.结果 不同浓度AngⅡ组的EECs增殖率均显著升高,且表现为剂量依赖的趋势;细胞内α-SMA含量(71.71±1.47)升高,E-cadherin含量(25.32±1.43)降低;Col Ⅰ和FN分泌量(0.774 7±0.048 0;0.758 0±0.042 0)均增加,与对照组比较,其差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AngⅡ能使子宫内膜上皮细胞增殖,并刺激使其发生活力改变.
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芪贞汤对人大肠癌纤维粘连蛋白黏附能力的影响
[目的]探讨扶正解毒活血法中药芪贞汤对人大肠癌高转移细胞株L-10细胞纤维粘连蛋白黏附能力的影响.[方法]通过体外细胞培养法,观察该方对L-10细胞纤粘连蛋白黏附能力的阻碍作用.[结果]芪贞汤对L-10细胞纤维粘连蛋白黏附能力明显抑制,并且显示了芪贞汤高浓度优于低浓度,有明显的浓度依存性;随着时间的推移,其抑制作用在变化,当作用120 min时,阻碍作用达到高峰,随后其阻碍作用逐渐减低.[结论]扶正解毒活血法中药芪贞汤对人大肠癌高转移细胞株L-10细胞具有明显的抗纤维粘连蛋白黏附能力的作用,从而提示芪贞汤有可能通过抑制纤维粘连蛋白黏附能力,实现抑制癌的浸润和转移的作用.
关键词： 扶正解毒活血法 芪贞汤 人直肠癌高转移细胞株L-10 纤粘连蛋白 -
PP1195一个新的与纤粘连蛋白相互作用促进肝癌细胞迁移的基因
目的:PP1195是新近获得的一个基因,酵母双杂交发现PP1195与纤粘连蛋白(Fibronectin,FN)相互作用.本文旨在说明该基因与FN间的关系及对肝癌细胞浸润和迁移能力的影响.方法:采用体外翻译表达PP1195基因和FN基因产物,体外结合实验观察两者之间的作用;采用细胞粘附实验观察PP1195基因表达对Hep3B细胞与FN结合能力的影响;采用细胞侵袭重建基底膜和划痕实验观察该基因表达对肝癌细胞浸润和迁移能力的影响.结果:表明PP1195和FN有相互结合作用;诱导PP1195基因表达可显著增加Hep3B细胞与FN的结合能力;以及SMMC7721细胞的浸润和迁移能力.结论:PP1195基因是一个新的与纤粘连蛋白相互作用并能够增加肝癌细胞浸润和迁移能力的基因.
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乙酰肝素酶在中枢神经系统表达调控的研究进展
乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)是哺乳动物体内唯一能降解硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfateproteoglcans,HSPGs)的β-D-葡萄糖醛酸内切酶.HSPGs是细胞表面、基底膜和细胞外基质中重要的多聚糖成分.主要由一个核心蛋白和数个与之共价连接的线性硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)侧链组成.HS通过特殊的位点与基底膜和细胞外基质中的Ⅳ型胶原、纤粘连蛋白以及层粘连蛋白结合并相互作用.
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输卵管妊娠中整合素β3及细胞基质成分层粘连蛋白及纤粘连蛋白表达的研究
目的:探讨整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白在输卵管妊娠发生中起到的作用.方法:采用流式细胞定量分析技术检测输卵管妊娠患者输卵管黏膜上皮、宫内膜及正常输卵管黏膜上皮、正常宫内早孕宫蜕膜组织中整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白表达.结果:整合素β3的表达输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P＜0.05)及正常输卵管上皮(P＜0.05),低于正常子宫蜕膜,但差异无显著性(P＞0.05); 输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于正常子宫蜕膜(P＜0.05),高于正常输卵管上皮,差异无显著性(P＞0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P＜0.05).层粘连蛋白的表达输卵管妊娠组输卵管上皮明显高于子宫内膜上皮(P＜0.05)及正常输卵管上皮(P＜0.05), 低于正常子宫蜕膜, 但差异无显著性(P＞0.05); 输卵管妊娠组子宫内膜上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P＜0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P＞0.05); 正常输卵管上皮明显低于子宫蜕膜上皮(P＜0.05).纤粘连蛋白的表达输卵管妊娠组输卵管上皮高于子宫内膜上皮(P＜0.05)及正常输卵管上皮(P＜0.05),低于正常子宫蜕膜但差异无显著性(P＞0.05);输卵管妊娠组子宫内膜上皮低于正常子宫蜕膜(P＜0.05),高于正常输卵管上皮但差异无显著性(P＞0.05);正常输卵管上皮明显低于正常子宫蜕膜(P＜0.05).结论:整合素β3、层粘连蛋白及纤粘连蛋白参与胚泡异位着床于输卵管内,可能在输卵管妊娠发生过程中起到一定的作用.
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纤粘连蛋白在实验性牙周炎鼠牙龈组织中的表达
目的:观察分析大鼠实验性牙周炎牙龈组织中纤粘连蛋白(fibronectin,FN)的表达及意义..方法:26只8周龄雄性Wistar大鼠,随机分为局部丝线结扎高糖软食4周和8周两组,每组实验动物10只,空白对照组3只.运用免疫组化方法,观察分析FN在健康牙龈组织中、牙周炎牙龈组织中的表达及意义.结果:健康牙龈组织中,FN相对均匀弥漫表达于整个牙龈结缔组织基质内;牙周炎牙龈组织中,FN表达具有部位特异性,即上皮下结缔组织上部基质内FN表达明显下调;结合上皮根端基底细胞基底面下FN表达明显上调,表达强度和范围随结合上皮根向增生程度的增加而增强.结论:炎性刺激下调炎症中心区牙龈结缔组织基质内FN表达;炎症刺激上调结合上皮根端基底细胞基底面下FN表达,其表达强度和范围随结合上皮根向增生程度的增加而增强扩大,暗示FN参与牙龈结合上皮根向增生迁移活动.
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纤粘连蛋白诱导Hela细胞黏附及MMP-2基因表达
目的观察纤粘连蛋白(fibronectin,FN)诱导的Hela细胞的黏附及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)基因的表达,探讨恶性肿瘤细胞侵袭、转移发生的机制.方法无血清培养Hela细胞,以FN作为细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分,用MTT法检测Hela细胞的黏附率及光镜下计数Hela细胞的铺展率并观察Hela细胞形态的变化;用明胶酶谱法检测MMPs的活性.结果无FN作用的Hela细胞不发生黏附及铺展,亦无明显MMPs基因表达;当纤粘连蛋白浓度为5～10μg/ml时,黏附率及铺展率大;黏附的Hela细胞启动MMP-2基因的表达,纤粘连蛋白浓度为5～10μg/ml时,MMP-2活性大.结论 FN可诱导Hela细胞黏附,进而引发一系列细胞内信号转导机制,启动MMP-2基因表达,促进肿瘤细胞的侵袭与转移.
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VitC对丙烯酰胺诱导小脑损伤的保护作用
目的探讨大剂量VitC对丙烯酰胺(ACR)诱导小鼠脑损伤的保护作用.方法连续小鼠腹腔注射不同剂量ACR(25 mg/kg·d)为染毒组,VitC组在小鼠染毒的同时腹腔注射VitC(50 mg/kg·d),正常对照组以等量生理盐水注射.在用药第5天、10天分离小脑采用硫巴比妥酸法(TBA)测定过氧化脂质(LPO)的含量,采用逆转录-聚合酶链反应检测鼠纤粘连蛋白(fibronectin,Fn)基因的表达.结果 ACR组小脑LPO与正常对照组比较均有显著差异(P<0.05);且低剂量ACR组(第5天、10天)之间,VitC组与ACR组比较均有显著性差异(P<0.05).ACR组Fn基因表达明显上调,VitC组Fn表达下降.结论 ACR神经毒性与氧自由基增多密切相关,VitC能够减轻ACR神经毒作用.ACR对Fn基因表达的影响,可能介导其神经毒作用.
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整合素α5及其配体纤粘连蛋白抗体对胚泡着床的影响
目的:研究整合素α5及其配体纤粘连蛋白对小鼠胚泡着床的影响.方法:在小鼠子宫角注射整合素α5抗体、纤粘连蛋白抗体及正常抗鼠IgG.结果:整合素α5及纤粘连蛋白抗体有显著抑制小鼠胚泡着床的效应,而正常抗鼠IgG对小鼠胚泡着床的影响不明显.结论:整合素α5及其配体纤粘连蛋白参与了小鼠胚泡的着床.
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细胞外基质对人毛乳头细胞特性的影响
目的 观察不同细胞外基质(ECM)对体外培养的人毛乳头(DP)细胞特性的影响.方法 将新鲜分离的人DP接种至已预先分别被Ⅳ型胶原蛋白、纤粘连蛋白、基质胶(Matrigel)或透明质酸钠凝胶包被的培养板,显微镜下观察DP细胞的迁出和生长;采用同样方法进行第4代DP细胞的培养,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖活性,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测不同ECM对DP细胞相对特殊标志物表达的影响.结果 Ⅳ型胶原蛋白和纤粘连蛋白组中的DP在接种36 h即有细胞迁出,Matrigel组则至少需4d,透明质酸钠凝胶组中一直未见细胞迁出.Ⅳ型胶原蛋白和纤粘连蛋白组与对照组类似,细胞均可呈现出聚集性生长趋势;DP细胞在Matrigel包被的培养孔中央呈贴壁生长,在周围则聚集形成球样结构;细胞无法在透明质酸钠凝胶表面贴壁生长.细胞培养5d后,Ⅳ型胶原和纤粘连蛋白组中DP细胞吸光度(A)值(1.36±0.28和1.31 ±0.18)明显高于对照组(1.21±0.12),差异有统计学意义(P＜0.05);Matrigel和透明质酸钠凝胶两组中DP细胞A值(1.08±0.21和0.26±0.05)明显低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Real-time PCR结果显示:与对照组比较,Matrigel组中仅神经细胞黏附分子(NCAM)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)基因的表达显著增加,而多能蛋白聚糖(Versican)的表达无变化.透明质酸钠凝胶组中Versican、NCAM和α-SMA基因的表达均显著降低,而Ⅳ型胶原和纤粘连蛋白组中Versican、NCAM和α-SMA蛋白的表达无明显变化.Western blot结果显示:与对照组比较,各组DP细胞内Versican、NCAM和α-SMA蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在平面培养条件下,外源性的ECM(Matrigel、Ⅳ型胶原、透明质酸钠凝胶和纤粘连蛋白)虽然可改变DP细胞的生长特性,但并不能影响与DP细胞生物学功能相关的特性.
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去甲斑蝥素对高糖刺激的HK-2细胞FN,ColⅣ和TGF-β1mRNA及蛋白表达的影响
目的:观察去甲斑蝥素(NCTD)对高糖刺激的HK-2细胞外基质和TGF-β1表达的影响.方法:常规培养HK-2细胞,无血清DMEM培养基同步培养24 h,细胞分为正常葡萄糖组(C,D-glucose 5.5 mmol/L)、甘露醇对照组(M,5.5 mmol/L D-glucose+24.5 mmol/L mannitol)、高糖组(HG,30 mmol/L D-glucose)、高糖+NCTD干预组(30 mmol/L D-glucose+0.5～40 mg/L NCTD).台盼蓝排斥实验检测NCTD对高糖刺激的细胞毒性.MTT法检测NCTD对高糖刺激的细胞增殖的影响.收集培养6,24,48 h后细胞总RNA及蛋白,用RT-PCR检测细胞FN,ColⅣ和TGF-β1 mRNA的表达,采用Western印迹检测FN,ColⅣ和TGF-βl蛋白的表达.结果:不同浓度NCTD作用72 h后,浓度超过5 mg/L的NCTD对高糖环境下的HK-2细胞有明显的毒性.RT-PCR和Western印迹结果显示:30 mmol/L D-葡萄糖可引起HK-2细胞FN,ColⅣ和TGF-β1 mRNA及蛋白水平的升高(P＜0.05),而5 mg/L NCTD可抑制高糖刺激的FN,ColⅣ和TGF-β1的表达(P＜0.05).相同渗透浓度的D-甘露醇组对上述指标均无影响(P＞0.05).结论:NCTD能下调HK-2细胞FN,ColⅣ及TGF-β1的表达.
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小剂量60Co放疗对血管纤粘连蛋白及细胞基质金属蛋白酶-2基因表达的影响
目的探讨小剂量60Co放射治疗对血管纤粘连蛋白和细胞基质金属蛋白酶-2基因表达的影响及其机制.方法以0、7、14、28Gy 60 Co射线辐射培养的大鼠主动脉平滑肌细胞,观察其对纤粘连蛋白(fibonectin ,FN)及细胞基质金属蛋白酶-2 (matrixmetalloproteinase-2 ,MMP-2)mRNA表达的影响.结果 7Gy放疗组对细胞MMP-2及FN mRNA表达与对照组比较无显著差异,而14Gy、28Gy放疗组FN mRNA分别为72.05±5.82和49.77±5.62,较对照组(95.17±6.41)比较有显著差异(P＜0.05).MMP-2mRNA在14Gy、28Gy放疗组分别为64.25±3.81和42.17±3.16,较对照组(82.52±6.50)比较有显著差异(P＜0.05).结论 14、28Gy 60 Co射线辐射可以抑制MMP-2合成和FN等胞外基质的代谢.
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增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白在早期自然流产患者胎盘中的表达
目的:观察增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白在早期自然流产患者胎盘中的表达情况.方法:通过免疫组织化学方法观察30例早期自然流产患者胎盘中增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白的表达.结果:早期自然流产患者较正常早期妊娠胎盘中增殖细胞核抗原、纤粘连蛋白的表达减弱(P＜0.05).结论:研究提示早期自然流产患者胎盘中滋养细胞增殖、粘附能力下降.
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纤维蛋白支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响
观察纤维蛋白-纤粘连蛋白-层粘连蛋白复合支架移植对大鼠脊髓损伤后神经再生和胶质瘢痕形成的影响,评价该支架移植修复脊髓损伤的可行性.本研究将圆柱状复合支架移植人大鼠脊髓完全横断缺损部位,同时以该模型动物作为对照组.分别于术后4 w、8 w、12 w对动物下肢运动功能进行BBB评分.然后取出支架/脊髓组织,用免疫荧光双标和免疫印迹技术分析损伤部位神经纤维再生和胶质细胞增生情况;并用透射电镜观察支架移植部位的组织学结构.结果显示:术后4～12 w支架移植组动物BBB评分明显高于对照组(P＜0.05).于术后4 w,移植组町见支架内有少量神经纤维,此后神经纤维逐渐增多,而胶质细胞增生不明显;对照组脊髓损伤局部可见坏死空洞,空洞周边胶质细胞增生明显.免疫印迹检测结果表明,移植组神经丝蛋白(NF-200)相对含量高于对照组;对照组胶质纤维酸性蛋山(GFAP)的相对含量高于实验组.以上结果提示:纤维蛋白支架移植可促进大鼠脊髓损伤后神经再生,并抑制胶质瘢痕形成.纤维蛋白(原)作为生物材料用于构建修复脊髓损伤的组织工程支架具有良好的应用前景.
