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樟脑丸对雌性小鼠生殖细胞和脏器的影响
目的:探索由对二氯化苯制成的樟脑的生殖毒性.方法:采用卵母细胞体外培养、体外受精等方法研究樟脑丸对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响.结果:接触樟脑丸3 d组和5 d组对小鼠的卵巢和肝脏有明显的毒性作用,5 d组能显著降低超排卵数;樟脑丸对卵母细胞生发泡破裂没有影响,但抑制卵母细胞第一极体的释放,影响其存活率及降低体外受精率.结论:本实验结果提示,樟脑丸可能影响超排卵小鼠卵母细胞的成熟,明显降低卵母细胞的体外受精的能力,并表现有明显的生殖细胞毒性.
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表皮生长因子调节小鼠生发泡期卵母细胞发育成熟的实验研究
目的:观察表皮生长因子(EGF)对生发泡期(GV期)卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(FP)形成的影响.方法:体外培养的昆明种雌性小鼠GV期卵母细胞分为卵丘卵母细胞复合体(COC)组及去卵丘裸卵(DO)组,观察不同浓度(0、2、5、10、15 μg/L)EGF对体外培养0、4、8、12、24、36、48 h COC、DO各组GVBD、FP形成的影响.结果:(1)EGF可促进DO组的卵母细胞成熟分裂,培养48 h EGF各组与对照组相比,有显著性差异(P<0.05);(2)COC组培养36 h后EGF各组成熟率均显著大于对照组(P<0.05);(3)不论是否存在EGF,COC组成熟分裂率均显著高于DO组(P<0.05);(4)EGF作用呈剂量依赖性.结论:EGF不仅可促进COC组GVBD发生、FP形成,而且可不通过卵丘细胞直接刺激卵母细胞成熟,EGF对COC促进作用强于DO,并呈剂量依赖性.
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内皮素-1调节小鼠生发泡期卵母细胞体外成熟作用的实验研究
目的 研究内皮素-1(ET-1)对小鼠未成熟卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PBⅠ)排出的影响. 方法 昆明系雌性小鼠生发泡(GV期)卵母细胞分为去卵丘裸卵(DO)组及卵丘卵母细胞复合体(COC)组,在体外培养条件下,观察ET-1对两组GVBD、PBⅠ形成的量效和时效关系. 结果 (1) DO在10-9、10-8、10-7、10-6mol/L ET-1作用3、6、9、12、24 h对其成熟分裂无明显影响(P＞0.05);(2)COC在10-8mol/L ET-1作用6 h能显著抑制GVBD率(P＜0.05),在 10-7、10-6mol/L ET-1作用6 h极显著抑制GVBD率(P＜0.01);在10-8mol/L ET-1作用12 h明显抑制PBⅠ率(P＜0.05), 10-7、10-6mol/L ET-1作用12 h极显著抑制PBⅠ率(P＜0.01). 结论 ET-1对COC体外成熟具有抑制作用并呈剂量依赖性,对DO体外成熟无明显影响.
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卵胞浆内单精子注射中小鼠卵细胞第一极体位置和形态对受精率和受精卵质量的影响
目的探讨卵胞浆内单精子注射(ICSI)中成熟卵细胞第一极体位置、形态对受精和胚胎质量的影响.方法6～10周龄雌性小鼠经促超排卵,收集成熟卵细胞,按第一极体形态不同分三级,将同一级别极体随机分7组(1、2、3、6、10、11、12点位)分别行ICSI,观察其受精及卵裂情况.结果Ⅰ级极体在11点位受精率高(P=0.002 4),3点位低(P=0.0001);Ⅰ级极体在11点位产生的高评分原核多(P=0.000 1),3点位少(P=0.000 1).Ⅰ级极体的受精率高、高评分原核多,Ⅱ级和Ⅲ级之间无明显差异.结论ICSI时卵细胞第一极体位置及形态对正常受精和胚胎质量会产生影响,尽可能将第一极体远离固定针、注射针及精子,卵细胞的第一极体呈圆形、光滑且完整,才能产生高受精率和高质量原核.
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两步极体活检对小鼠卵母细胞体外受精和胚胎发育的影响
目的 评价两步活检一、二极体对小鼠卵母细胞体外受精(IVF)和相应胚胎发育的影响.方法 8～12周龄雌、雄昆明小鼠.雌鼠促排卵,取成熟卵母细胞行卵胞浆内单精子注射(ICSI),序贯培养胚胎至囊胚孵出.分别于ICSI后激光透明带打孔活检第一极体,两步活检一、二极体,在受精后打孔同时活检一、二极体.比较各处理组与对照组受精、卵裂、优质胚胎、囊胚形成、扩张和孵出情况.结果 两步活检一、二极体和同时活检一、二极体受精率、卵裂率、优质胚胎率和囊胚形成率与对照组均无明显差异.启动孵出率明显高于对照组;完全孵出率虽高于对照组,但无统计学意义.结论 一、二极体活检不影响小鼠卵母细胞IVF和相应胚胎发育,而且可能有助于胚胎孵出,是安全可行的植入前遗传学诊断(PGD)活检取材方法,以两步活检法为佳极体活检方案.
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敌百虫对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响
有机磷类农药对人体健康的影响早已为人所知,但是其潜在的生殖毒性却是近年来关注的热点.其进入体内的途径主要有皮肤与消化道,特别是食入有机磷农药污染的蔬菜可在体内逐渐聚集,影响多种组织细胞和器官功能的作用.
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6种金属元素对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响
为研究镉、铅、镍、锰、铬、铝元素的生殖毒性,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法,观察它们对卵母细胞成熟和受精能力的影响.结果显示除了铝外,其它各金属元素均可以明显降低小鼠超排卵数;6个剂量组均可以抑制卵母细胞的成熟,显著降低卵母细胞第一极体释放率、体外受精率和细胞存活率,对体内卵母细胞的生发泡破裂没有影响,但是对体外培养卵母细胞的生发泡破裂有明显的抑制作用(铝组除外).结果提示,这些金属元素被人体过量吸收后,可以破坏育龄妇女卵母细胞正常成熟,使受精能力下降,甚至导致不孕或不育.
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汞对雌性小鼠生殖功能及脏器的影响
为探讨汞化合物对脏器及生殖的毒性,采用卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究了汞对小鼠脏器系数、卵母细胞成熟和受精能力的影响.结果表明,0.5和1.5mg/kg BW汞对小鼠的肝脏、肾脏有明显的毒性作用,1.5mg/kg BW组还对卵巢有明显的毒性作用,并能显著降低超排卵的卵母细胞数;汞对体内卵母细胞生发泡破裂没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,影响卵母细胞的存活率并降低体外受精(IVF)率.结果提示,氯化汞可以影响卵母细胞的成熟,明显破坏卵母细胞的体外受精能力,损伤或降低小鼠的生殖能力.
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钴对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响
[目的]研究钴的生殖毒性.[方法]采用卵母细胞体外培养和体外受精的方法.[结果]氯化钴降低体内(0 h)第一极体释放率和卵母细胞存活率(P＜0.01),降低卵母细胞(24 h)的体外受精率(P＜0.01),且有剂量依赖性增加,随着体外培养时间的延长,2个剂量组的第一极体释放率与各自0 h相比有显著提高,除了6.0 mg·kg-1组外,48 h后3.0 mg·kg-1剂量组的IVF率与24 h时相比显著提高,3.0 mg·kg-1和6.0 mg·kg-1两组的IVF率在48 h和72 h时与对照组比差异均有显著性(P＜0.05,P＜0.01).[结论]实验结果提示,氯化钴能够抑制卵母细胞的体内成熟,降低卵母细胞的体外受精能力,具有明显的生殖毒性.
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褪黑素抑制小鼠卵母细胞的体外成熟
目的:探讨褪黑素(MT)对小鼠卵母细胞的体外成熟的影响.方法:通过卵母细胞自发、次黄嘌呤(HX)阻滞和激素诱导成熟三种体外培养模型研究了褪黑素(MT)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响.结果:①0.1 g/L、0.02g/L、0.004 g/L及0.0008 g/L浓度的MT均能显著抑制小鼠卵丘卵母细胞复合体(CEOs)自发成熟过程中第一极体(PB1)的释放(P＜0.01);②动力曲线分析表明,MT对自发成熟的CEOs的GVBD和PB1有显著的推后作用,与对照组相比,处理组的GVBD和PB1分别被推后8～10 h和3～4 h;③0.1 g/L和0.02 g/L两有效浓度的MT还能显著抑制促性腺激素(FSH)诱导的HX阻滞的CEOsGVBD的发生(P＜0.05),对PB1的排出虽有一定的抑制作用,但没有统计学意义;④MT和次黄嘌呤(HX)对CEOs的自发成熟有协同抑制作用(P＜0.01),但在裸卵(DO)自发成熟的阻滞中没有协同效应.结论:MT是调节哺乳动物卵母细胞成熟的重要激素之一,其作用机制可能是通过卵丘细胞实现的.
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香烟烟雾水溶物对雌性小鼠生殖毒性的研究
为了研究香烟的生殖毒性,采用灌服香烟烟雾水溶物后观察其对小鼠怀孕率和胚胎发育的影响,以及取出卵母细胞进行体外培养和体外受精的方法,观察香烟烟雾水溶物对超排卵的卵母细胞数目、卵母细胞的成熟和受精能力等的影响.结果表明,香烟烟雾水溶物可以极显著地降低小鼠的妊娠率,抑制胚胎发育,显著性地抑制卵母细胞的体内成熟,降低第一极体的释放率和卵母细胞的体外受精率,使卵母细胞存活率显著降低.结果还显示,香烟烟雾水溶物对小鼠生殖作用的损害和对卵母细胞成熟的抑制作用可能是可逆的,停止灌服香烟烟雾水溶物和将卵母细胞以及受精卵培养在正常的培养液中,小鼠的生育能力又能基本恢复正常,卵母细胞的第一极体的释放率以及体外受精率都明显提高.提示,香烟烟雾水溶物可以破坏卵母细胞的成熟和减数分裂,降低小鼠的生殖能力和生育能力,但这种毒性作用是可以逆转的,戒烟后又可恢复正常.香烟中对生殖毒性较大的物质可能是其中的一些含量较高的重金属元素.
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香烟烟雾水溶物对小鼠卵母细胞成熟和IVF的影响
采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究不同产地3种香烟的烟雾水溶物对小鼠卵母细胞成熟和受精能力的影响.结果显示3种香烟烟雾水溶物对卵母细胞生发泡破裂都没有影响,但可以显著地抑制卵母细胞第一极体的释放、降低卵母细胞的体外受精率和体外存活率.结果提示,香烟烟雾中影响生殖作用的主要成分是其中的水溶性成分,它们可以破坏卵母细胞的成熟、降低卵细胞的受精能力,对生殖细胞和生育能力有一定的毒性作用;不同产地、不同品牌香烟烟雾水溶物毒性作用相似.
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砷对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对小鼠生殖作用的影响.方法采用小鼠卵母细胞体外培养、体外受精的方法研究As2O3对卵母细胞成熟和体外受精的影响.结果 As2O3对小鼠卵母细胞生发泡破裂、超排卵的卵母细胞数目没有影响,但可以抑制卵母细胞第一极体的释放,降低体外受精率和卵母细胞的存活率.结论 As2O3可以破坏卵母细胞的成熟、降低卵母细胞的受精能力,对生殖细胞和生育能力有一定的毒性作用.
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硝酸铅、氯化镍对体外培养小鼠卵母细胞成熟的影响
采用卵母细胞体外培养的方法研究了硝酸铅、氯化镍对小鼠卵母细胞成熟的影响.结果表明,硝酸铅、氯化镍都能抑制小鼠卵母细胞第一极体的释放,降低卵母细胞的质量和体外存活率,但是对卵母细胞生发泡破裂没有影响.提示, 硝酸铅、氯化镍有明显的生殖毒性.
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卵细胞第一极体形态与受精卵及胚胎质量关系的研究
目的探讨卵细胞第一极体形态与原核期受精卵形态、卵裂期胚胎质量的关系.方法取性成熟期的雌、雄昆明小白鼠25对,给雌鼠进行控制性超排卵,收集其成熟卵母细胞,按其第一极体形态进行分组,采用卵胞浆内单精子显微注射技术将雄鼠的精子注入卵细胞内,评估卵细胞受精后原核期受精卵形态及卵裂期胚胎质量.结果 1级极体卵细胞比2、3级极体卵细胞的正常受精率明显高(P<0.01),且3级极体卵细胞受精后高评分原核少于1、2级极体(P<0.05),高评分原核发育成的高质量胚胎明显多于低评分原核(P<0.01),而由低评分原核产生的低质量胚胎(C级和D级)多于高评分原核(P<0.01).结论通过卵细胞第一极体形态可预测受精卵及卵裂期胚胎质量.
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采用第一极体进行植入前诊断的实验研究
目的:建立采用第一极体植入前染色体非整倍体诊断的方法.方法:取试管婴儿后的未受精卵细胞,激光打孔法行第一极体活检,固定后行多色荧光原位杂交(FISH),分析极体中13,16,18,21和22号染色体的核型情况.结果:活检成功率为94.7%,FISH成功率为86.7%,61.5%的极体核型正常,38.5%的极体为非整倍体.结论:激光打孔结合FISH法是一种快速有效的极体植入前诊断方法.
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第一极体形态学与人类卵细胞非整倍体相关关系的研究
目的:探讨第一极体的形态学和卵细胞染色体非整倍体异常间的相关性,为使用第一极体作为移植胚胎的筛选指标提供理论依据.方法:采用多色荧光原位杂交法分析卵细胞中13,16,18,21和22号染色体的核型,并结合第一极体的形态学进行相关分析.结果:72.3%的卵细胞核型正常,27.7%的卵细胞为非整倍体;在4组具有不同形态第一极体的卵细胞中,非整倍体的发生率分别为14.7%,17.4%,29.7%和61.1%.第1组卵细胞非整倍体的发生率与第4组相比,差异有高度显著性(P＜0.001).结论:第一极体的形态学和卵细胞的染色体非整倍体异常之间存在一定的相关性.由于其非整倍体的发生率高,由具有异常大小第一极体的卵细胞发育而来的胚胎不适用于移植.
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第一极体位置对卵母细胞显微注射受精后受精和胚胎发育的影响
目的研究第一极体位置对卵母细胞显微注射受精后受精和胚胎发育的影响.方法回顾分析了782个经卵母细胞浆内单精子注射(ICSI)的卵母细胞,分别分析第一极体位于12点和6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率和卵裂胚胎的发育质量.结果第一极体位于6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率、卵裂胚胎发育质量均略高于12点位置,但差异均无显著性(P＞0.05).结论显微注射受精时的第一极体位置对卵母细胞的受精和胚胎发育的影响不大.
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卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射受精率和胚胎质量的关系
目的:了解人卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后正常受精率、卵裂率和优质胚胎率的关系.方法:选择行ICSI治疗的110个周期中1 017枚人卵母细胞.将卵母细胞第一极体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种类型,采用3种来源的精子[手淫取精精子、附睾穿刺/睾丸活检(PESA/TESA)取精精子、冷冻精液精子]授精.ICSI操作后,了解各型第一极体卵母细胞受精率、卵裂率和优质胚胎率.结果:手淫取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和卵裂率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅲ、Ⅳ型正常受精率低于Ⅰ和Ⅱ型,Ⅱ型卵裂率低于Ⅰ和Ⅲ型.PESA/TESA取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和取卵后第3天优质胚胎率比较,差异有统计学意义(χ2=8.488和6.789,P=0.044和0.034),Ⅰ型正常受精率低于Ⅱ和Ⅲ型,Ⅰ和Ⅲ型第3天优质胚胎率高于Ⅱ型.冷冻精液取精患者各指标比较,差异无统计学意义.结论:排除精子来源对受精的影响,正常受精可能和卵母细胞第一极体形态有关.
关键词： 卵母细胞 卵胞浆内单精子显微注射 第一极体 胚胎 -
显微注射受精时第一极体位置和卵母细胞膜穿破类型对受精和胚胎发育的影响
回顾分析了782个经卵母细胞浆内单精子注射(ICSI)的卵母细胞,第一极体位于12点和6点时,卵母细胞膜穿破方式为显微注射针直接进入胞浆内,卵膜穿破,不形成凹痕(A)及显微注射针进入卵母细胞内,回吸少量胞浆,卵膜在细胞中部穿破,形成轻微的凹痕(B)两种类型时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率和卵裂胚胎的发育质量.结果显示:第一极体位于12点和6点时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率、卵裂胚胎发育质量差异均无显著性.卵母细胞膜穿破方式为A类型时的卵母细胞存活率、卵母细胞受精率、卵裂胚胎发育质量均显著低于B类型组.提示:显微注射受精时的第一极体位置对卵母细胞的受精和卵裂的影响不大,但不同卵母细胞膜穿破类型会影响受精和胚胎发育.
