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消化系统恶性肿瘤miRNA研究的新进展
microRNA(miRNA)是一类存在于真核生物中长度约22 bp的非编码小RNA分子.miRNA通过与靶基因mRNA的3'端非编码区(3'UTR)结合,在转录后水平调控基因表达,来参与机体不同时期不同组织生长发育的重要过程.已知有一些miRNA基因定位在染色体脆性位点,还有部分miRNA基因存在于一些与肿瘤相关的基因组序列中,而且人们发现在肿瘤组织中多种miRNA的表达谱发生变化,进一步的研究证实miRNA与肿瘤细胞的生长分化迁移、肿瘤血管的生成及肿瘤耐药机制的形成等诸多方面都有着千丝万缕的联系.
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喉癌、喉咽癌脆性组氨酸三联体基因杂合性缺失和微卫星不稳定
目的 探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH)和微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)与喉癌、喉咽癌发生发展的关系.方法 选取FHIT基因内的三个微卫星位点D3S1234、D3S4103、D3S1300进行PCR扩增,应用单链长度多态性分析-银染技术进行LOH和MSI分析.结果 ①D3S4103、D3S1234、D3S1 300的杂合率分别为76.32%、71.05%和78.95%;②喉癌、喉咽癌总LOH发生率分别是:D3S4103(48.28%)、D3S1234(37.04%)、D3S1300(33.33%);③喉癌、喉咽癌D3S1234、D3S1300、D3S4103的总LOH发生率与患者年龄、性别、吸烟、肿瘤分化程度、肿瘤部位、T分期和肿瘤复发与否的关系均无统计学意义(P＞0.05);④喉癌、喉咽癌总MSI发生率分别是:D3S1234(18.42%)、D3S1300(28.95%)、D3S4103(21.05%);⑤喉癌、喉咽癌FHIT基因D3S1234、D3S1 300、D3S41 03的总MSI发生率与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤部位、肿瘤分化程度和T分期的关系无统计学意义(P＞0.05);⑥复发喉癌、喉咽癌病例FHIT基因总MSI发生率为83.33%,原发病例总MSI发生率为30.77%,复发病例MSI阳性率显著高于原发病例,差异具有统计学意义(P=0.004).结论 ①FHIT基因在喉癌、喉咽癌中既存在杂合性丢失,又存在微卫星不稳定,但以前者为主;②FHIT基因参与了喉癌、喉咽癌的发生,可能是喉癌、喉咽癌候选抑癌基因之一;③FHIT基因微卫星不稳定与喉癌、喉咽癌复发可能相关.
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脆性组氨酸三联体在喉癌中的表达
目的 探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidinetriad,FHIT)在喉鳞状细胞癌(简称喉癌)中的表达,并分析其与p53、增殖细胞核抗原(proiife ratingcell nuclear antigen,PCNA)以及临床病理学特征的关系.方法 采用免疫组化SP法检测60例喉鳞癌、25例癌旁组织、25例喉角化症和20例声带息肉标本中FHIT表达,使用同样方法检测实验组60例喉癌中突变型p53和PCNA的表达水平,结合喉癌患者的临床病理学特征进行分析.结果 ①在喉癌、癌旁组织和喉角化症中均检测到不同程度FHIT缺失/低表达,在喉癌中高,缺失/低表达率分别为61.7%(37/60)、36.0%(9/25)、32.0%(8/25);声带息肉中未见FHIT缺失/低表达(0/20);②喉癌中FHIT缺失/低表达率高于癌旁组织、喉角化症和声带息肉(x2=4.682,P=0.030;x2=6.243,P＜0.01 3;x2=22.946,P=0.000);癌旁组织和喉角化症中FHIT缺失/低表达率均明显高于声带息肉(x2=6.891,P=0.009;x2=5.749,P=0.01 7);喉角化症中FHIT缺失/低表达率略低于癌旁组织,但差异无统计学意义(x2=0.089,P=0.765);③FHIT表达与喉癌患者年龄、性别、肿瘤的原发部位、颈部淋巴结转移情况、临床分期及组织病理学分级均无明显相关性(P＞0.05);④FHIT与p53表达无明显相关性(g=0.103,P=0.434);FHIT与PCNA表达具有明显负相关性(g=-0.413,P=0.001).结论 FHIT缺失/低表达在喉癌的发生中可能起到重要作用,是喉癌发生的早期事件,可能与肿瘤的恶性增殖有关.
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miR-34a对肿瘤发生发展调控作用的近研究进展
真核生物基因组中超过97％的转录产物是不编码蛋白质的RNA,miRNA作为其中的一类非编码的单链小分子RNA,长约20～25个核苷酸,通过与其靶基因mRNA完全或部分互补结合在转录后水平发挥广泛的调节作用,包括生长发育、病毒防御、造血、器官形成、细胞增殖和凋亡等.目前已经识别的人类miRNAs约900种,调控至少30％基因的表达,其中半数miRNA的基因位于肿瘤相关的染色体脆性位点[1].癌基因的激活和抑癌基因的失活是导致肿瘤发生发展的主要原因,p53的突变是肿瘤中常见的基因突变,而miR-34a的表达受p53的直接调控,同时miR-34a可以通过其靶基因调控肿瘤增殖、侵袭迁移等多种生物学活性[2].
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FHIT基因与肿瘤研究进展
FHIT基因定位于人类染色体3p14.2区域,含有脆性位点FRA3B,该基因不仅在多种肿瘤中存在变异,其外显子在正常人群中也存在一定的多态性.FHIT基因在肿瘤中的改变主要是以缺失为主,包括外显子/或内含子的缺失,也有外源序列的插入.目前,人们普遍认为FHIT基因是一个抑癌基因,与多种肿瘤的发生和发展有关,本文就FHIT基因的发现,FHIT基因的结构与功能以及FHIT基因的变异与多种肿瘤的关系加以总结,以供参考.
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WWOX基因与肺癌关系的研究进展
WWOX基因位于染色体16q23.3～24.1区域,并跨越了普通染色体脆性位点FRA16D,被认为是与肺癌等肿瘤相关的抑癌基因.肺癌是目前人类发病率和病死率高的恶性肿瘤,对WWOX基因的研究将有助于临床对肺癌的早期诊断、治疗及预防.
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脆性位点基因WWOX mRNA在肝细胞癌中的表达及临床病理意义
目的 检测WWOX野生型mRNA及其异常转录剪接体在肝细胞癌中的表达情况,并分析其临床病理意义.方法 采用Real-time RT-PCR和RT-PCR方法检测44例肝细胞癌(HCC)、相应癌旁肝组织和5例正常肝组织中WWOX野生型mRNA及转录剪接体Variant1、Variant4及Variant6的表达,同时分析WWOX mRNA的表达与临床病理参数的关系.结果 (1)在HCC中,WWOX野生型mRNA的表达较癌旁肝组织明显降低(P<0.01);随着HCC组织学分级的升高和分化程度的降低,WWOX野生型mRNA的表达量逐步减少(P<0.05);术后复发组WWOX野生型mRNA的表达低于非复发组(P<0.05).(2)通过RT-PCR方法检测到了WWOX异常转录剪接体Variant4和Variant6,并经过测序证实;Variant4在HCC中的出现率为70.5%,明显高于癌旁肝组织的38.6%和正常肝组织的40%(P<0.01),其表达在肝硬化和无肝硬化组中有差别(P<0.05);Variant6在HCC、癌旁肝组织、正常肝组织中的检出率分别为72.7%,81.8%和80.0%(P<0.05);这两型异常转录剪接体的出现与HCC的大小、组织学类型、组织学分级、分化、血管侵犯、包膜破坏、卫星病灶等病理特征及患者的性别、甲胎蛋白水平、复发情况均无关.结论 WWOX野生型mRNA表达的下调可能在HCC的发生发展中起重要作用;WWOX异常转录剪接体Variant4可能为致癌因素致癌作用的一个分子靶点.
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染色体不稳定性及HPV、CMV感染与宫颈癌发病的关系
目的 ：探讨染色体数目畸变、脆性位点发生率、姐妹染色单体交换发生率、细胞内微 核发 生率、宫颈分泌物内人乳头状瘤病毒(HPV)感染、巨细胞病毒(CMV)感染与子宫颈癌的关系。 方法：对30例子宫颈癌患者，做外周血细胞培养，分析染色体畸变、姐妹 染色单体交换、脆点和微核。用PCR方法扩增宫颈分泌物HPV16-DNA、HPV18 -DNA、CMV-DNA。结果：染色体畸变，姐妹染色单体交换发生率，脆性 位点、细胞内微核发生率与正常对照组差异有显著性，宫颈癌组HPV1 6-DNA、HPV18-DNA和CMV-DNA感染阳性率分别为50％、46.67％和53.33％，3者 均为阳性者占20％。结论：染色体不稳定性增加及HPV、CMV感染与宫颈癌 发病相关。
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鼻咽癌FRA3B脆性部位的微卫星不稳定性分析
目的探讨鼻咽癌染色体脆性部位FRA3B区域的微卫星不稳定性(Microsatellite Instability, MSI) .方法选择FRA3B区域附近的6个微卫星多态标记对30例鼻咽癌进行MSI分析.结果 MSI的发生率为63.33%(19/30),其中复制错误(Replication Errors, RER)阳性率为36.67%(11/30).MSI频率较高的3个位点为D3S1547(30.8%)、D3S1313(34.6%)和D3S1300(37.5%).临床Ⅰ～Ⅱ期患者MSI频率高于Ⅲ～Ⅳ期(P＜0.05).结论揭示FRA3B脆性部位的MSI为鼻咽癌形成过程中的早期分子事件,可能参与了鼻咽癌的发病.
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鼻咽癌FRA3B脆性部位的杂合性丢失与临床病理特征的关系
目的 研究鼻咽癌染色体脆性部位FRA3B区域的等位基因杂合性丢失(loss of heterozygosity,LOH)情况,并探讨LOH与鼻咽癌临床病理特征及EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染的关系.方法 选择FRA3B区域的8个微卫星多态标记对40例鼻咽癌组织进行LOH分析.结果 77.5%(31/40)的鼻咽癌在FRA3B脆性部位出现LOH,丢失频率较高的2个位点是D3S1300(55.6%)和D3S2757(50.0%),其共同缺失区为D3S4103-D3S4260.LOH与鼻咽癌的临床病理特征(肿瘤T分期、颈淋巴结转移、临床分期、肿瘤分化程度、肿瘤复发情况及EBV壳抗原IgA抗体滴度)相关,临床Ⅲ～Ⅳ期、低分化鳞癌、肿瘤复发和抗体滴度≥1:40者LOH频率明显高于临床Ⅰ～Ⅱ期、中分化鳞癌、无肿瘤复发及抗体滴度＜1∶40者(P＜0.05).结论 FRA3B脆性部位的LOH为鼻咽癌的频发事件,可能参与了鼻咽癌的发生发展,共同缺失区D3S4103-D3S4260可能是其优先作用的分子靶点.
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脆性位点基因FHIT和WWOX在肝细胞癌中的表达及其意义
目的 探讨脆性位点基因脆性组氨酸三聚体基因(FHIT)和含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与临床病理特征的关系. 方法采用免疫组织化学染色方法评价142例HCC及其癌旁肝组织和15例正常肝组织中FHIT和WWOX的表达情况,结合临床病理资料进行分析.统计学分析采用Kruskal-Wallis H检验对2或多个独立样本的计数资料或等级资料进行分析,Wilcoxon符号秩检验对2个配对样本的等级资料进行分析,Spearman秩相关进行指标间的相关性分析.结果 68.3%和77.5%的HCC患者中出现FHIT和WWOX表达缺失或下降.肝癌与其相应癌旁组织及正常肝组织表达强度和总水平比较,u值为-9.952～-7.564,P值均＜0.01;且二者的表达具有明显的相关性(P＜0.01).随HCC分化程度的降低,FHIT和WWOX的表达也减弱(P＜0.05),并且与血管侵犯、包膜破坏、卫星病灶出现等提示肿瘤侵袭转移的指标有关(P＜0.05),在术后复发与未复发组中,二者的表达亦有差别(P＜0.05).结论 FHIT与WWOX在HCC中的缺失或低表达与HCC的恶性表型有关,预示HCC患者的不良预后,二者可能起肿瘤抑制作用.
关键词： 癌 肝细胞 染色体脆性位点 脆性组氨酸三聚体基因 含有WW结构域的氧化还原酶基因 -
人染色体脆性部位超微结构及其形成机制研究
①目的探讨人染色体脆性部位(Fra)超微结构及其形成机制.②方法用低叶酸、低小牛血清和较高pH值培养方法.常规外周血染色体制片,Giemsa染色,光镜下选择并确定有Fra的染色体做标记并照相.Carnoy固定液退油、褪色,临界点干燥,离子喷镀金膜,将做标记的同一Fra进行扫描电镜观察、照相,后经图像处理仪(KY-EM-I型)分析处理.③结果光镜下1例Fralq25和2例Fra3p14均为染色单体断裂,电镜下Fralq25为狭窄裂隙,第1例Fra3p14为狭窄裂隙,第2例Fra3p14为缢痕形态.④结论Fra的形成可能为染色质纤维包装不全所致,且这种包装不全存在着不均一性.
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脆性部位与原癌基因在乙型肝炎病人中的相关性
①目的探讨脆性部位与原癌基因在乙型病毒性肝炎(乙肝)病人中的相关性及其与原发性肝癌发生的关系.②方法用低叶酸、低小牛血清和较高pH值培养方法,常规外周血染色体制片.对20例乙肝病人(病人组)和20例健康正常人(对照组)进行染色体脆性部位分析.③结果病人组检出31种脆性部位,主要分布于A,B,C组染色体,其表达率为8.94%,与正常对照组(4.05%)比较差异有显著性(u=5.83,P<0.001).脆性部位中有12种与原癌基因位点重叠,重叠率为38.7%.其中2q21与2种原癌基因位点重叠;11q13与5种原癌基因位点重叠.④结论乙肝病人脆性部位与原癌基因位点的重叠,更易诱使HBV DNA整合,并可能对原癌基因的激活以至肝癌的发生起重要作用.
