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miR-19b通过抑制STAT3的转录活性抑制不稳定斑块形成
目的 探讨miR-19b对不稳定斑块的影响及潜在机制.方法 回顾性选取2015年3月至2016年3月新疆医科大学第五附属医院收治的80例不稳定型心绞痛(UA)患者为UA组,同期收集80例健康体检者为对照组.检测和比较两组研究对象血miR-19b的表达.将miR-19b模拟物或抑制物转染到人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法、微管形成实验检测过表达miR-19b对细胞增殖、迁移、血管新生的影响;蛋白印迹检测过表达miR-19b对信号转导子和转录激活子3(STAT3)表达的影响.结果 UA组miR-19b水平(1.24±0.36)△△CT显著高于对照组(0.50±0.12)△△CT(P<0.05);过表达miR-19b后,EA.hy926细胞抑制率升高,愈合率、微管形成均显著下降(P<0.05);蛋白印迹表明过表达miR-19b抑制STAT3的活性.结论 过表达miR-19b可影响STAT3的转录活性,抑制内皮细胞增殖、迁移和血管新生,进而延缓不稳定型心绞痛患者不稳定斑块进展.
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非小细胞肺癌组织中miR-19b与miR-20a的表达及临床意义
目的:检测miR-19b与miR-20a在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,探讨两者与肺癌临床病理的关系.方法:选择我院NSCLC肺癌患者50例,使用Real-time RT-PCR法对其癌组织及癌旁正常组织中miR-19b和miR-20a的含量进行检测,并利用2(-△△CT)法处理结果,分析与临床病理资料的关系.结果:相对于内参U6,miR-19b基因在NSCLC组织中的表达量明显低于癌旁正常组织,而miR-20a基因在NSCLC组织中的表达量明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.05);在NSCLC组织标本中,miR-19b基因表达量在临床分期Ⅰ-Ⅱ的标本中明显高于临床分期Ⅲ,而miR-20a基因表达量在临床分期Ⅰ-Ⅱ的标本中明显低于临床分期Ⅲ,差异均就有统计学意义(P＜0.05);miR-19b基因表达量在肿瘤病理低分化组织中明显低于肿瘤病理高分化组织,而miR-20a基因表达量在肿瘤病理低分化组织中明显高于肿瘤病理高分化组织,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论:miR-19b低表达和miR-20a高表达与NSCLC的临床分期、病理分级具有密切关系,早期检测有助于NSCLC诊断和治疗.
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miR-19b转基因小鼠的构建及表型分析
目的:构建心肌细胞特异性过表达miR-19b的转基因小鼠,并对其进行表型分析.方法:先确定载体插入的酶切位点,根据CloneEZ(R) PCR Cloning Kit重组原理设计相应引物,以小鼠基因组为模板克隆出带有miR-19b前体序列(pre-miR-19b)的目的片段,利用重组酶连接到带有alpha-MHC启动子的载体上.将所得载体线性化后,采用显微注射方法注射到小鼠胚胎干细胞内.再将所得的重组胚胎干细胞移植入假孕的C57BL/6J雌鼠子宫内,在所得的子代,即Founder小鼠中采用特异的引物鉴定出转基因小鼠,并选出相应的品系,进行表型分析.结果:成功构建miR-19b转基因小鼠,且miR-19b转基因小鼠舒张期室间隔厚度、舒张期左室游离壁厚度以及射血分数均有升高.结论:心肌特异性过表达miR-19b可以导致心脏肥大.
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miR-19 b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响
目的研究miR-19b对HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法根据前期miRNA芯片结果提示丹皮酚处理后人肝癌HepG2细胞的miR-19b表达增加,采用qRT-PCR验证丹皮酚处理 HepG2细胞的 miR-19b表达改变；将 hsa-miR-19b mimics瞬时转染HepG2细胞,采用qRT-PCR验证转染效率,MTT比色法检测转染后细胞体外增殖抑制率,TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 qRT-PCR验证62.5 mg/L丹皮酚处理人肝癌HepG2细胞24 h后miR-19b差异表达明显。过表达miR-19b可以抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡。结论丹皮酚作用可以引起肝癌细胞miR-19b表达出现差异性表现。过表达 miR-19b可能是丹皮酚抑制HepG2细胞增殖和促进凋亡作用的部分机制。
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miR-19b靶向沉默ABCA1调控巨噬细胞胆固醇流出
目的 探讨miR-19b对三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)介导巨噬细胞胆固醇流出的影响及其机制.方法 将miR-19b mimic或miR-19b inhibitor转染入THP-1源性巨噬细胞,液体闪烁计数仪检测细胞内胆固醇流出,油红O染色观察细胞内脂滴情况,生物信息学分析miR-19b与ABCA1 3'UTR的结合关系,荧光素酶报告基因检测miR-19b与ABCA1的结合情况,Westem blot检测ABCA1蛋白水平.结果 miR-19b抑制巨噬细胞胆固醇流出,增加胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成,而anti-miR-19b则刚好出现相反的结果.miR-19b与ABCA1 3'UTR的3110-3116位结合,且二者结合的自由能较低.miR-19b显著抑制荧光素酶活性及其巨噬细胞中ABCA1蛋白的表达.结论 miR-19b靶向沉默ABCA1进而抑制其介导的胆固醇流出,增加巨噬细胞内脂质蓄积.
关键词： miR-19b 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 巨噬细胞 胆固醇流出 -
miR-19 b对巨噬细胞ABCA1表达的影响
目的：观察miR-19b对巨噬细胞 ABCA1表达的影响。方法在 THP-1源性巨噬细胞中转染miR-19b模拟物(mimic )和抑制物(inhibitor),荧光定量PCR检测ABCA1 mRNA,Western blot检测ABCA1蛋白水平。结果转染miR-19b mimic后,巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白水平均显著下调；转染miR-19b inhibitor后ABCA1蛋白则明显上调,但ABCA1 mRNA无变化。结论 miR-19b下调巨噬细胞ABCA1的表达。
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不同药物治疗慢性乙型肝炎患者血清miRNA的变化及意义
目的 观察阿德福韦酯、注射用重组人干扰素α2b治疗慢性乙型肝炎患者血清中miRNA的变化及临床意义.方法 选取2012-05～2013-05省武警医院消化内科门诊的100例慢性乙型肝炎患者为研究对象,根据治疗用药不同,分为阿德福韦酯组和干扰素组各50例,分别口服阿德福韦酯胶囊5 mg/d和皮下注射干扰素针100万单位/周,应用芯片杂交技术分析患者在治疗期间血清中miR-122、miR-19b的变化.结果 miR-122、miR-19b在阿德福韦酯组治疗后的表达量分别为(75.26± 13.43)(88.64± 15.36) fmol/L,在干扰素组治疗后的表达量分别为(65.18±22.08) (69.32±25.17) fmol/L,各组治疗后各指标均高于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.05),但2组间治疗前后差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿德福韦酯与注射用重组人干扰素α2 b均可上调慢性乙型肝炎患者血清miR-122、miR-19b的表达,可能为其发挥作用的机制之一.
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外周血miR-19a和miR-19b的检测在胃癌诊断中的临床意义
目的:探讨血清miR-19a和miR-19b诊断胃癌的价值及其与临床病理特征的关系.方法:采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术检测61例正常人和61例胃癌患者血清中miR-19a和miR-19b的表达量,分析其表达与胃癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断胃癌的价值.结果:胃癌患者血清miR-19a和miR-19b相对表达水平均高于正常对照组(P＜0.05),其表达水平与临床分期及淋巴结有无转移显著相关(P＜0.05),而与性别、年龄及吸烟史无相关性(P＞0.05);miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1％,特异度94.0％;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4％,特异度94.O％.结论:血清中miR-19a和miR-19b可作为一种非损伤性诊断方法,辅助胃癌诊断.
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miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及临床意义
目的 研究miR-19b在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其与ALL临床特征和PTEN mRNA表达的相关性.方法 采用实时定量PCR的方法检测67例儿童ALL(初诊组38例、完全缓解组20例、难治复发组9例)骨髓单个核细胞(BMMNC)中miR-19b的表达,分析其表达与临床特征及PTEN mRNA表达水平的关系.以15例原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿作为对照组.结果 miR-19b在初诊组和难治复发组的表达量显著高于完全缓解组和对照组(P＜0.01).动态观察6例ALL患儿发现完全缓解后miR-19b表达量较初诊时显著降低(P＜0.05).miR-19b高表达与外周血高WBC计数(≥50×109/L)、危险度分型(中、高危)、脾肿大、BCR-ABL融合基因阳性有相关性(P＜0.05),与发病年龄、性别、免疫分型、形态学分型、MLL-AF4融合基因、肝及淋巴结肿大、早期泼尼松反应等因素无相关性(P>0.05).miR-19b与PTEN mRNA表达量无相关性(r=0.107,P>0.05).结论 miR-19b可能在儿童ALL发生、发展及不良预后中发挥一定作用,未发现miR-19b表达量同PTEN mRNA的表达量存在相关性.
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miR-19b下调大鼠H9c2心肌细胞Kir2.1蛋白表达
目的:检测miR-19b对大鼠H9c2心肌细胞Kir2.1表达的影响,探讨miRNA参与房颤发生发展的机制.方法:培养大鼠H9c2心肌细胞,构建miR-19b过表达质粒、miR-19b干扰质粒、阴性序列质粒,通过慢病毒载体感染大鼠H9c2心肌细胞;例置荧光显微镜观察感染效率,qRT-PCR检测H9c2细胞中miR-19bmRNA表达水平.qRT-PCR检测H9c2细胞中Kir2.1mRNA水平.Western blot检测H9c2细胞中Kir2.1蛋白表达水平.结果:miR-19b慢病毒裁体成功感染H9c2细胞;qRT-PCR检测,与阴性序列组相比,miR-19b过表达组Kir2.1 mRNA表达水平降低,miR-19b干扰组Kir2.1 mRNA表达水平升高;Western blot检测,与阴性序列质粒组相比,miR-19b过表达组Kir2.1蛋白表达水平降低,miR-19b干扰组Kir2.1蛋白表达水平升高.结论:miR-19b抑制KCNJ2的转录,下调Kir2.1蛋白表达,提示mi-19b可能参与房颤的发生发展.
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非小细胞肺癌中miR-19 a和miR-19 b的表达及临床意义
目的：分析miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：非小细胞肺癌手术标本61例及其癌旁正常组织，提取总RNA，采用实时定量PCR方法检测miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌及其癌旁正常组织中的表达，并分析其与临床病理特征的关系。结果：miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌组织中的表达高于对应的癌旁正常肺组织，其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移相关（P﹤0.05）。而在不同年龄、性别和吸烟史患者间差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论：miR-19a、miR-19b高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型及有无淋巴结转移密切相关，miR-19a、miR-19b有可能成为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。
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miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的:探讨miR-19a和miR-19b在骨肉瘤组织及配对瘤旁组织中的表达及其与临床病理特征的相关性.方法:收集32对骨肉瘤和配对的瘤旁组织,运用实时荧光定量PCR(qPCR)检测骨肉瘤组织及其瘤旁组织中miR-19a和miR-19b的表达,分析其与骨肉瘤临床病理特征的相关性及其临床意义.结果:qPCR结果显示骨肉瘤组织中miR-19a和miR-19b的平均表达量较瘤旁组织中均明显上调(P均＜0.05).二者的表达水平呈正相关(r=-0.685,P=0.000).miR-19a和miR-19b的表达与骨肉瘤病理分级之间存在正相关(r=-0.478,P=0.027);miR-19a的表达与临床分期呈正相关(r=-0.365,P=0.031)且与预后相关.Cox回归多因素分析发现miR-19a可作为骨肉瘤患者预后的影响因子(P=0.037).结论:miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中表达上调,在骨肉瘤的发生发展中可能发挥重要的作用,其中miR-19a可能作为骨肉瘤独立的预后标志物.
