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多发性骨髓瘤患者骨髓瘤细胞中miRNA-19a的表达水平及其对骨髓瘤细胞相关特性的影响
目的:检测miR-19a在人多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞株LP-1和U266中的表达水平,研究miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.方法:应用RT-PCR检测miR-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中的表达水平;CCK8检测miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266增殖的影响;Transwell方法检测miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞侵袭影响;流式细胞术检测miR-19a对多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266细胞凋亡的影响.结果:miR-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达;miR-19a促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的增殖,促进多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的侵袭,抑制多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266的凋亡.结论:miR-19a在多发性骨髓瘤细胞株LP-1和U266中表达明显增加,且促进骨髓瘤细胞的增殖、侵袭及抑制骨髓瘤细胞的凋亡.
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MiR-19a与宫颈癌同步放化疗敏感相关性研究
目的:探讨miR-19a与中晚期宫颈癌同步放化疗敏感性的相关性及可能作用机制.方法:收集行同步放化疗治疗的ⅡB～ⅢB期宫颈鳞状细胞癌患者20例,根据其治疗后6个月的近期治疗效果分为治疗敏感组和抗拒组,每组各10例,治疗前收集宫颈肿瘤组织并提取总RNA；利用TaqMan Real-time PCR法检测miR-19a在两组间的表达情况,统计分析其与同步放化疗敏感性的相关性.结果:敏感组随访10～20个月,截止末次随访均未发现肿瘤复发.抗拒组治疗中肿瘤进展2例,治疗结束6个月内肿瘤残存或出现新发病灶者8例.两组患者在临床分期、年龄、组织分级、淋巴结转移、局部肿瘤大小、Scc-Ag水平和治疗时间各个临床因素差异无统计学意义,P值均＞0.05；miR-19a在治疗抗拒组中的表达水平约为1.0±0,敏感组为4.80±1.15,两组比较差异有统计学意义,P＜0.05.结论:miR-19a与中晚期宫颈癌同步放化疗敏感性相关,可能成为预测宫颈肿瘤内在放化疗敏感性的标志,对尽早施行个体化治疗以改善预后有重要意义.
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低表达miR-19a对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡影响的体外研究
目的 探讨低表达miR-19a对人脑胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响.方法 常规培养U251细胞系,利用脂质体介导将miR-19a抑制物瞬时转染至U251细胞系,同时设立无义序列转染组和空白对照组.采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后miR-19a在U251细胞系中的表达水平;CCK-8法检测U251细胞系转染前后增殖能力的变化;流式细胞术分析转染前后细胞周期和凋亡的变化.结果 RT-PCR检测结果显示,与无义序列转染组和空白对照组相比,抑制物转染组的miR-19a表达水平明显降低,差异有统计学意义(F=124.72,P＜ 0.01).CCK-8实验结果显示,转染miR-19a抑制物后U251细胞系增殖能力下降,48 h后细胞存活率为(48.27±8.23)％,与空白对照组的100.00％比较,差异有统计学意义(t=12.45,P＜ 0.01).流式细胞术结果显示,转染miR-19a抑制物后,U251细胞系G0/G1期细胞数量增多,S期细胞数量减少,G0/G1期细胞阻滞,细胞凋亡率增高.结论 低表达miR-19a可以显著抑制人脑胶质瘤细胞系U251的增殖能力,产生G0/G1期阻滞并促进细胞凋亡,这可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点.
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miR-19a对血肿瘤屏障通透性的影响
目的 研究miR-19a对血肿瘤屏障通透性的影响.方法 将miR-19a模拟物转染至人脑微血管内皮细胞hCMEC/D3,应用real-time PCR法检测miR-19a的表达.用过表达miR-19a的hCMEC/D3细胞和人U251胶质瘤细胞建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统检测血肿瘤屏障跨内皮阻抗值的变化;Western blot和免疫荧光法检测体外血肿瘤屏障hCMEC/D3细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达.结果 经miR-19a模拟物转染后,hCMEC/D3细胞中miR-19a的表达水平显著升高;血肿瘤屏障跨内皮阻抗值显著下降;体外血肿瘤屏障hCMEC/D3细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和occludin的表达水平显著降低,在细胞膜上呈不连续分布.结论 miR-19a过表达能显著增加血肿瘤屏障的通透性,其机制之一可能与降低紧密连接相关蛋白相关.
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miR-19a在喉鳞癌中的表达及其对喉鳞癌细胞增殖的影响
目的 研究miR-19a在喉鳞状细胞癌中的表达及其在体内外对喉鳞状细胞癌细胞增殖的影响.方法 应用实时定量PCR检测miR-19a在喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异,利用miR-19a的反义寡核苷酸慢病毒下调miR-19a的表达.在体外用MTT法观察miR-19a表达下调对喉鳞状细胞癌细胞增殖的影响.在体内,观察下调miR-19a表达对喉鳞癌裸鼠移植瘤生长的影响.结果 与癌旁组织相比,miR-19a在喉鳞状细胞癌组织中显著高表达(P＜0.001),下调miR-19a的表达,喉鳞癌细胞在体内外的增殖受到抑制.结论 miR-19a在喉鳞状细胞癌中高表达,下调miR-19a在体内外抑制喉鳞状细胞癌细胞的增殖.
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miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞的增殖及凋亡的调控
目的:探讨miR-19a在去势抵抗性前列腺腺癌中的表达及其对去势抵抗性前列腺癌细胞株PC3及DU145的增殖及凋亡的影响.方法:用定量PCR方法检测10例去势抵抗性前列腺癌细胞组织及相关癌旁的miR-19a表达,通过MTT、克隆形成、Western blotting、流式细胞仪检测增殖及凋亡及体内成瘤的方法来研究miR-19a对于去势抵抗性前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响.结果:miR-19a在去势抵抗性前列腺癌组织中的表达相对于癌旁组织显著提高.抑制miR-19a在激素非依赖前列腺癌中的表达,可抑制细胞的增殖及集落形成并增加其凋亡.结论:在激素非依赖性前列腺癌中,miR-19a起着癌基因作用,与前列腺癌的增殖及凋亡相关.
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基于MXD1蛋白miR-19a调节肺癌细胞增殖与转移的研究
目的 了解miR-19a在肺癌患者外周血中的表达情况及不良预后的相关性,进一步探讨miR-19a对肺癌细胞侵袭和转移的影响.方法 经miR-19a和miR-19a inhibitor慢病毒颗粒感染建立miR-19a和miR-19a inhibitor的稳定表达非小细胞肺癌细胞系H1299和H460,通过细胞增殖分析试验、侵袭试验、细胞周期检测等,利用荧光定量PCR、Western blot、细胞DNA含量和光散射法分析肺癌细胞株中miR-19a表达水平,并与正常肺黏膜上皮细胞系BEAS-2B的结果作比较.结果 miR-19a在肺癌细胞系中的表达显著高于BEAS-2B,差异有统计学意义;miR-19a能够促进肺癌细胞增殖、浸润转移、并使细胞周期加快,并抑制MXD1基因的表达水平.结论 miR-19a的靶基因MXD1参与了miR-19a促进肺癌细胞增殖和转移过程,miR-19a可通过MXD1参与调节肺癌细胞的增殖、转移能力,影响患者的预后.
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miR-19a调控血小板反应蛋白在结肠癌淋巴转移中的机制
目的 探讨miR-19a调控血小板反应蛋白(THBS1)在结肠癌淋巴转移中的机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)的方法检测不同结肠癌细胞株(LOVO、HT116、SW480、HT29)中的miR-19a的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)/免疫共沉淀(CO-IP)技术检测LOVO与HT29细胞中THBS1及血管内皮生长因子C/D(VEGF-C/D)蛋白结合及表达情况;Western blot法检测转染后细胞中THBS1、VEGF-C/D的表达情况;细胞划痕法检测转染后细胞的迁移能力.取shRNA、shRNA-NC转染后的LOVO细胞以及正常LOVO细胞分别接种于裸鼠皮下,建立裸鼠移植瘤模型观察成瘤情况,免疫组化法检测肿瘤组织中CD34的表达,Western blot法检测瘤体中THBS1、VEGF-C、VEGF-D蛋白的表达.结果 细胞株LOVO和HT29的miR-19a的表达量分别为高和低;THBS1蛋白在HT29细胞中高表达,VEGF-C/D蛋白在LOVO细胞中高表达;LOVO和HT29细胞中THBS1和VEGF-C免疫共沉淀反应为阳性;转染miR-19a后,LOVO细胞的迁移能力显著下降,而HT29细胞迁移能力有显著上升.注射了miRNA抑制物组的裸鼠瘤块明显变小;瘤块组织中THBS1的蛋白表达显著上升,VEGF-C的蛋白表达显著下降,CD34的阳性表达降低.结论 miR-19a能够通过下调THBS1促进VEGF-C的表达,从而促进结肠癌淋巴结转移.
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白头翁汤对溃疡性结肠炎小鼠肠道miR-19a表达的影响
目的 通过观察疾病活动指数(DAI)、组织病理学变化,研究白头翁汤对小鼠实验性溃疡性结肠炎的治疗作用,并进一步研究miR-19a的表达,探讨其治疗作用的可能机制.方法 选取40只c57小鼠,随机等分为4组(10只/组):正常对照组、模型组(DSS)、治疗组(DSS+白头翁汤)和阳性对照组(DSS+5-ASA).给予各模型组小鼠自由饮用3.5％ DSS溶液以及相应药物灌胃,正常对照组自由饮用同等量的饮用水.每天观察并记录DAI评分,7d后处死小鼠,取肠道炎症组织观察病理变化.RT-qPCR方法检测miR-19a表达变化.结果 模型组小鼠的DAI评分及病理学评分显著高于对照组.DSS+白头翁汤组的DAI评分及病理学评分显著低于DSS模型组,说明白头翁汤对于小鼠实验性溃疡性结肠炎有一定的疗效.模型组miR-19a的表达显著低于对照组,DSS+白头翁汤组miR-19a的表达显著高于DSS模型组,提示白头翁汤可以通过增加miR-19a的表达而起到减轻炎症的作用.结论 白头翁汤对于小鼠实验性溃疡性结肠炎有一定的疗效,可能通过增加miR-19a的表达而发挥作用.
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miR-19a靶向TP53INP1介导肠癌5-Fu耐药的机制
目的 初步探讨miR-19a通过靶向TP53INP1介导结肠癌HCT8细胞对5-Fu的耐药机制.方法 利用qRT-PCR检测5-Fu耐药细胞株HCT8/Fu及敏感细胞株HCT8中miR-19a的表达差异;MTT法检测miR-19a对细胞5-Fu药物敏感性的影响;双荧光素酶报告基因系统对miR-19a与TP53INP1的靶基因关系进行鉴定;Western blot检测miR-19a对TP53INP1表达的影响.结果 HCT8/Fu中miR-19a的表达量是HCT8细胞的7.12倍,显著高于敏感HCT8细胞株的表达量(P<0.05);HCT8转染miR-19a mimics后,细胞的半数抑制浓度明显高于转染阴性对照的细胞(P<0.05);TP53INP1是miR-19a 的靶基因,能显著降低野生型TP53INP1 3'-UTR荧光素酶活性(P<0.01);转染miR-19a mimics显著降低TP53INP1的表达(P<0.05).结论 miR-19a可能通过靶向TP53INP1介导肠癌细胞对5-Fu的耐药.
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外周血miR-19a和miR-19b的检测在胃癌诊断中的临床意义
目的:探讨血清miR-19a和miR-19b诊断胃癌的价值及其与临床病理特征的关系.方法:采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术检测61例正常人和61例胃癌患者血清中miR-19a和miR-19b的表达量,分析其表达与胃癌临床病理参数的关系,并绘制ROC曲线分析其诊断胃癌的价值.结果:胃癌患者血清miR-19a和miR-19b相对表达水平均高于正常对照组(P＜0.05),其表达水平与临床分期及淋巴结有无转移显著相关(P＜0.05),而与性别、年龄及吸烟史无相关性(P＞0.05);miR-19a的ROC曲线下面积0.989,灵敏度95.1％,特异度94.0％;miR-19b的ROC曲线下面积0.983,灵敏度93.4％,特异度94.O％.结论:血清中miR-19a和miR-19b可作为一种非损伤性诊断方法,辅助胃癌诊断.
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miR-19a对慢性压迫性损伤大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制
目的 观察miR-19a对慢性压迫性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经病理性疼痛的作用,并探讨其潜在机制.方法 75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组:假手术组,行假手术;CCI组,坐骨神经结扎法构建CCI大鼠模型;CCI+inhibitor组,CCI大鼠鞘内注射miR-19a inhibitor.于术前当天(0 d)和术后3、7、14、21 d观察机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热刺激反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)的变化.采用RT-qPCR检测腰椎脊髓中促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA及JAK2和STAT3表达的变化,Western blot检测SOCS3蛋白水平的表达,荧光素酶报告基因技术验证miR-19a的靶基因.结果 与假手术组比较,CCI组大鼠脊髓的miR-19a表达显著上升(P＜0.05),MWT显著降低,TWL显著缩短(P＜0.05).与CCI组比较,CCI+ inhibitor组MWT显著升高,TWL显著延长(P＜0.05).RT-qPCR检测结果表明,CCI可显著促进促炎因子IL-6、TNF-α、IL-1β mRNA的表达;而与CCI组比较,CCI+inhibitor组IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA表达水平均显著降低(P＜0.05).另一方面,与假手术组比较,CCI组大鼠术后脊髓中JAK2和STAT3 mRNA水平明显增加;与CCI组比较,CCI+ inhibitor组术后脊髓中JAK2和STAT3的表达显著降低(P＜0.01).荧光素酶报告基因检测结果表明JAK2/STAT3上游的负调控因子SOCS3是miR-19a的靶基因.Western blot检测结果表明CCI组大鼠脊髓中SOCS3水平较假手术组升高,且SOCS3水平在CCI术后第7天达到高,而后呈下降趋势;与CCI组比较,CCI+inhibitor组SOCS3表达明显上升(P＜0.05).结论 miR-19a inhibitor能缓解CCI大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏,该作用与SOCS3介导的JAK2/STAT3通路有关.
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microRNA-19a在妊娠期高血压疾病孕妇外周血中的表达
目的 分析妊娠期高血压疾病孕妇与正常孕妇血浆中microRNA-19a(miR-19a)的差异性表达特征,并探讨其临床应用.方法 选择2013年1月至2015年6月泸州医学院附属医院收治的妊娠期高血压疾病孕妇90例作为妊娠期高血压疾病组,按孕妇病情再分为妊娠期高血压组(30例)、轻度子痫前期组(30例)、重度子痫前期组(30例).另选择同期在本院行孕检的30例健康孕妇作为正常组,应用实时荧光定量聚合酶链式反应测定不同组孕妇血浆中miR-19a的相对表达量,比较妊娠期高血压疾病组与正常组孕妇miR-19a的表达差异,并分类统计比较妊娠期高血压疾病各亚组miR-19a表达量,评估miR-19a的临床诊断应用价值.结果 与正常组比较,妊娠期高血压疾病组miR-19a表达量显著升高(P＜0.05);不同妊娠期高血压疾病亚组miR-19a表达量比较,重度子痫前期组miR-19a表达量高,其后依次为轻度子痫前期组、妊娠期高血压组、正常组(P＜0.05).结论 妊娠期高血压疾病孕妇与正常孕妇血浆中miR-19a表达量存在差异性,妊娠期高血压疾病孕妇血浆中存在升高趋势,对于妊娠期高血压疾病的临床诊断具有一定指导意义.
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非小细胞肺癌中miR-19 a和miR-19 b的表达及临床意义
目的：分析miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法：非小细胞肺癌手术标本61例及其癌旁正常组织，提取总RNA，采用实时定量PCR方法检测miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌及其癌旁正常组织中的表达，并分析其与临床病理特征的关系。结果：miR-19a、miR-19b在非小细胞肺癌组织中的表达高于对应的癌旁正常肺组织，其表达与临床分期、病理类型及淋巴结有无转移相关（P﹤0.05）。而在不同年龄、性别和吸烟史患者间差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论：miR-19a、miR-19b高表达与非小细胞肺癌的临床分期、病理分型及有无淋巴结转移密切相关，miR-19a、miR-19b有可能成为非小细胞肺癌的重要肿瘤标志物之一。
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miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中的表达及其临床意义
目的:探讨miR-19a和miR-19b在骨肉瘤组织及配对瘤旁组织中的表达及其与临床病理特征的相关性.方法:收集32对骨肉瘤和配对的瘤旁组织,运用实时荧光定量PCR(qPCR)检测骨肉瘤组织及其瘤旁组织中miR-19a和miR-19b的表达,分析其与骨肉瘤临床病理特征的相关性及其临床意义.结果:qPCR结果显示骨肉瘤组织中miR-19a和miR-19b的平均表达量较瘤旁组织中均明显上调(P均＜0.05).二者的表达水平呈正相关(r=-0.685,P=0.000).miR-19a和miR-19b的表达与骨肉瘤病理分级之间存在正相关(r=-0.478,P=0.027);miR-19a的表达与临床分期呈正相关(r=-0.365,P=0.031)且与预后相关.Cox回归多因素分析发现miR-19a可作为骨肉瘤患者预后的影响因子(P=0.037).结论:miR-19a和miR-19b在骨肉瘤中表达上调,在骨肉瘤的发生发展中可能发挥重要的作用,其中miR-19a可能作为骨肉瘤独立的预后标志物.
