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NS-398联合硼替佐米对人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制作用
目的:观察NS-398能否增强多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞对硼替佐米(BOR)的化疗敏感性.方法:NS-398与BOR联用后,用MTT法测定对体外培养的RPMI 8226细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响;ELISA法检测细胞的Caspase-3活性;Cox-2试剂盒定量检测各组细胞Cox-2的活性.结果:NS-398联合BOR对RPMI 8226细胞的增殖抑制率大于单用组(Q＞0.85);NS-398联合BOR使RPMI 8226细胞阻滞于Go/G1期,细胞凋亡率明显高于单用组(Q＞1.15);NS-398联合BOR组细胞的Caspase-3的活性高于单用组(Q＞1.15).结论:NS-398具有协同增强BOR体外抗骨髓瘤RPMI 8226细胞的作用.
关键词： NS-398 RPMI 8226细胞 硼替佐米 细胞增殖 协同作用 -
Ad-NK4增强人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞对硼替佐米化疗敏感性的作用
目的:观察Ad-NK4能否增强RPMI 8226细胞对硼替佐米(BOR)的化疗敏感性.方法:细胞-基质粘附实验和RPMI 8226细胞-ECV 304细胞粘附实验检测Ad-NK4对RPMI 8226细胞粘附的影响;Western blot检测粘附和侵袭相关蛋白MMP2、MMP3、MMP7、VEGF表达的变化;MTr法检测Ad-NK4对细胞增殖的影响;PI流式细胞术检测Ad-NK4对细胞凋亡的影响;Western Blot检测Cleaved caspase-3、BAX和BCL-2蛋白表达水平的变化.结果:两种细胞粘附实验均显示Ad-NK4可显著抑制RPMI 8226细胞粘附,且与Erk信号通路和JAK/STAT信号通路显著相关(P＜0.05);Ad-NK4能明显降低RPMI 8226细胞MMP-2、MMP-3和VEGF蛋白的表达水平(P＜0.05),但对MMP-7的蛋白表达水平无明显影响(P＞0.05).Ad-NK4和BOR联用的细胞抑制率和诱导凋亡比例均显著高于单用Ad-NK4或BOR.同样,Ad-NK4和BOR联用组Cleaved caspase-3和BAX蛋白水平均明显高于单独作用组,而BCL-2蛋白水平却相反,同时在联用组BAX/BCL-2比率增加.结论:通过活化Caspase-3和上调BAX/BCL-2比率的途径,Ad-NK4可增强BOR体外抗骨髓瘤RPMI 8226细胞作用.
关键词： Ad-NK4 多发性骨髓瘤 RPMI 8226细胞 硼替佐米 细胞凋亡 -
西达本胺诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及与DNA损伤反应的相关性
目的:本研究旨在探讨新型组蛋白脱乙酰酶抑制剂(HDACi)西达本胺对人多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡的影响及其与DNA损伤反应(DDR)的相关性.方法:采用MTT法检测西达本胺对MM细胞系RPMI8226的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析靶细胞凋亡及细胞周期分布;采用Western blot检测靶细胞目标蛋白表达;应用ATM激酶特异性抑制剂KU-55933干扰DDR过程.结果:西达本胺对RPMI 8226细胞的增殖抑制作用呈时间剂量依赖性,其24、48和72 h IC50值分别为9.6,6和2.8 μmol/L.西达本胺通过上调RPMI 8226细胞p21蛋白表达,将细胞周期阻滞于G0/G1期.西达本胺通过caspase-3依赖的途径诱导RPMI8226细胞凋亡,并上调DDR相关蛋白γH2AX和pATM的表达.采用ATM激酶抑制剂KU-55933预处理靶细胞,可下调西达本胺诱导的γH2AX和pATM蛋白表达升高,从而抑制DNA损伤反应,并逆转西达本胺诱导的细胞凋亡.结论:西达本胺诱导骨髓瘤细胞增殖抑制、细胞周期停滞和细胞凋亡涉及DNA损伤反应.
关键词： 西达本胺 RPMI 8226细胞 ATM激酶 细胞凋亡 DNA损伤反应 -
雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞周期及P21wapl/cipl和P27kipl表达的影响
目的 观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白P21wapl/cipl和P27kipl在其中的作用和意义.方法 采用MTT比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对RPMI 8226细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量RT-PCR和Western blotting法检测RPMI 8226细胞中P21wapl/cipl、P27kipl mRNA和蛋白表达.结果 雷公藤内酯醇能明显抑制RPMI 8226细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用48 h的IC50值为(71.18士2.01)nmol/L.雷公藤内酯醇还可以诱导RP-MI 8226细胞周期阻滞于G0/G1期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,S期细胞逐渐减少.经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白P21wapl/cipl和P27kipl的mRNA和蛋白表达水平明显上调.结论 雷公藤内酯醇可以抑制RPMI 8226细胞增殖,该抑制作用是通过调控P21wapl/cipl和P27kipl的表达,从而阻止细胞周期G0/G1期过渡实现的.
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白花蛇舌草多糖诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究
目的 研究白花蛇舌草多糖(PEHD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响,为其应用于临床治疗MM提供实验依据.方法 以MM细胞株RPMI 8226为研究对象.MTT法检测PEHD对RPMI 8226细胞增殖的影响.Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)双染法(Annexin V/PI)标记的流式细胞术检测PEHD诱导RPMI 8226细胞凋亡情况.Hoechst 33258染色法观察PEHD诱导RPMI 8226细胞凋亡的形态学改变.用Western blot检测PEHD处理后有关凋亡信号传导通路蛋白caspase-3、-8、-9和PARP蛋白的表达以及PEHD作用前后NF-κB蛋白以及其他通路蛋白的变化情况.结果 PEHD在一定浓度范围内对RPMI 8226细胞有明显的增殖抑制作用,高抑制率达到了92.3％,在1～4 mg/ml浓度范围内呈时间-剂量依赖性.不同浓度PEHD分别作用24 h,RPMI 8226细胞均可见凋亡小体,且凋亡小体数量随PEHD浓度增加而增加.1、2、3 mg/ml PEHD诱导的细胞早期凋亡率分别为22.52％、62.31％、69.94％,高于空白对照组8.93％.1、2、3 mg/ml PEHD作用24 h,RPMI 8226细胞caspase 8、9、3和PARP蛋白表达上升,Mcl-1、Bcl-xl、Bid、Bim的表达随着PEHD浓度的增加而下降,而Bax、Bak、Bad表达上升,但p-AKT蛋白(相对分子质量60 000)的表达明显下降,NF-κB蛋白表达水平明显下调.结论 在一定浓度范围内的PEHD(1 ～4 mg/ml)可明显抑制RPMI 8226细胞增殖,呈时间和浓度依赖性；其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关；诱导细胞凋亡机制与其激活caspase-8、-9、-3及PARP蛋白表达,下调p-AKT及NF-κB蛋白表达有关.
关键词： 白花蛇舌草多糖 RPMI 8226细胞 细胞凋亡 半胱天冬酶 -
茶多酚诱导人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的凋亡及其作用机制
目的:研究茶多酚对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞生长及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:通过MTT法、瑞氏染色法和FCM法分别检测不同浓度的茶多酚对RPMI 8226细胞增殖和凋亡的影响;FCM法检测对细胞线粒体膜电位的影响;蛋白质印迹法检测△caspase-3片段和凋亡相关蛋白bc1-2的表达;ELISA法检测对RPMI 8226细胞分泌细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的影响.结果:与对照组相比,茶多酚浓度129.6和259.1 μmol/L处理RPMI 8226细胞1～3 d后均能明显抑制细胞的增殖,且呈时间-剂量相关性;统计显示,24 h时的半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为165.7μmol/L.茶多酚(129.6μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞出现典型的凋亡形态学改变;茶多酚(129.6和259.1 μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞凋亡率分别为(24.6±2.3)％和(43.5±3.9)％,与对照组比较差异均有统计学意义;细胞的线粒体膜电位降低,活性△caspase-3片段产生,bc1-2蛋白表达水平下降,IL-6分泌水平降低.结论:茶多酚能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与产生活性△caspase-3片段,抑制bc1-2蛋白表达,降低细胞分泌IL-6水平相关.
关键词： 多发性骨髓瘤 儿茶素 细胞凋亡 RPMI 8226细胞 -
沉默NOTCHI基因对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞生物学的影响
目的:探讨沉默NOTCH1基因对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226增殖和凋亡的影响.方法:针对人NOTCH1基因序列构建NOTCH1 shRNA真核表达载体,用LipofectamineTM2000脂质体转染RPMI 8226细胞,筛选出佳干扰表达载体.观察NOTCH1 shRNA表达载体对RPMI 8226细胞增殖的影响;使用流式细胞仪分析细胞的周期分布;Western blot法检测NOTCH1 shRNA转染RPMI 8226细胞后NOTCH1蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P27、P21的表达含量变化,ELISA法检测NOTCH1 shRNA转染RPMI 8226细胞后对IL-6分泌量的影响.结果:沉默NOTCH1基因抑制细胞增殖,阻滞RPMI 8226细胞于G0/G1期,转染组、阴性对照组及空白组增殖率分别为(49.09±2.31)％、(91.73±2.67)％、(98.10±0.41)％,差异具有统计学意义(P＜0.05);三组的G0/G1期细胞分别为(66.23 ±3.71)％、(42.27±3.65)％、(40.70±0.92)％(P＜0.05);三组S期细胞分别为(31.03±1.49)％、(56.53±1.76)％、(51.83±1.45)％(P＜0.05).NOTCH1 shRNA诱导细胞凋亡,三组凋亡率分别为(46.67±1.31)％、(1.37±0.63)％、(0.85±0.43)％(P＜0.05);转染组NOTCH1蛋白表达下调,P21、P27表达上调.NOTCH1 shRNA可下调与疾病相关的IL-6分泌能力.三组IL-6分泌的吸光度值分别为28.18±3.50、167.08±7.97及185.86±5.61 (P ＜0.05).结论:NOTCH1 shRNA能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导凋亡,下调与多发性骨髓瘤发病有关的IL-6,有望成为多发性骨髓瘤治疗的一个新靶点.
关键词： Notch1 RNA干扰 多发性骨髓瘤 RPMI 8226细胞 -
雄黄对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞基因表达谱的作用
目的:应用cDNA芯片研究雄黄作用多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞后对其基因表达的影响.方法:应用包含4 096条人类基因的cDNA表达谱芯片,检测雄黄作用于RPMI 8226细胞前及48 h后基因的表达.结果: 在mRNA水平上,164条基因显著改变,53条基因上调,111条基因下调.结论:雄黄作用RPMI 8226细胞株后可引起一系列基因改变,许多基因涉及了多发性骨髓瘤的发病机制,其中BTG1,TXNIP及ALK1基因可能与RPMI 8226细胞的分化和凋亡有密切关系.
关键词： 雄黄 基因芯片 多发性骨髓瘤 RPMI 8226细胞 -
葛根总黄酮对骨髓瘤细胞株U266及RPMI8226增殖作用的研究
目的 初步探讨葛根总黄酮(PRF)对骨髓瘤细胞株U266及RPMI 8226增殖影响及其机制.方法 采用0、10、30、50、100 μg/ml PRF分别处理U266、RPMI 8226细胞48h及72 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,瑞特染色观察细胞形态学改变,FITC-Annexin V/PI双染法检测细胞早期凋亡率改变,DNA片段化分析观察PRF处理U266细胞DNA断裂片段.结果 PRF可以抑制2种骨髓瘤细胞增殖,对U266细胞抑制作用大于对RPMI 8226细胞的作用,呈浓度依赖性；随PRF浓度增加2种细胞凋亡比例增加.瑞特染色未观察到2种细胞凋亡形态学特征.0、10、30、50、100 μg/ml PRF处理U266细胞48 h早期凋亡率分别为(3.20±0.36)％、(5.20±0.92)％、(7.30±1.22)％、(8.10±0.53)％、(10.80±0.90)％,呈剂量依赖性增高,组间差异有统计学意义(P＜0.05).DNA片段化分析U266细胞未出现凋亡细胞特有的DNA梯带.结论 一定浓度PRF对骨髓瘤U266及RPMI 8226细胞具有较明显的增殖抑制作用；PRF对U266细胞增殖抑制作用机制虽可能与凋亡相关,但并非U266细胞增殖受抑的主要途径,其确切机制有待进一步探讨.
关键词： 多发性骨髓瘤 葛根总黄酮 U266细胞 RPMI 8226细胞
