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实时荧光定量PCR法检测新城疫病毒的方法建立
为建立新城疫病毒的荧光定量PCR快速检测方法,根据新城疫病毒的基因序列设计引物与探针,通过Taq Man一步法qRT-PCR检测方法快速检测样品.结果表明,该方法能准确、快速地检测新城疫病毒,且特异性、灵敏度、稳定性较强,能够满足实际工作中的检测要求.
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ERK2蛋白在新疆维吾尔族子宫颈癌中的表达及临床意义
目的 研究ERK2蛋白在新疆维吾尔族宫颈癌组织中的表达水平及其与宫颈癌临床病理特性的关系.方法 采用免疫组化SP法,检测50例宫颈癌组织及50例正常宫颈组织中ERK2蛋白的表达.结果 ERK2在宫颈癌中的表达主要在胞核,其阳性表达率为80.0％ (40/50),明显高于正常宫颈组织的14.0％(7/50)(P＜ 0.01).ERK2蛋白的高表达与临床分期(P=0.005)和分化程度有关(P=0.025),而与年龄、性别无关(P＞0.05).结论 ERK2的表达与维吾尔族宫颈癌的分化及临床分期密切关系,在维族宫颈癌的发生发展过程中发挥着重要作用.
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微小RNA-200家族在子宫内膜癌中的表达及意义
目的 研究微小RNA(microRNA,miRNA)-200家族在子宫内膜癌及子宫正常内膜组织中的表达量,分析miRNA-200家族的表达量和子宫内膜癌临床病理特征的关系及其对子宫内膜癌发生发展的意义.方法 子官内膜癌组选取子宫内膜样腺癌组织47例,按国际妇产科联盟(FIGO)手术病理标准进行临床分期;正常对照组为子宫肌瘤患者之正常子官内膜组织,共11例.所有样本均采用荧光实时定量PCR方法检测miRNA-200家族的表达量.结果 在子宫内膜癌组织中miRNA-200b,miRNA-200c,miRNA-205的表达分别为4.83±2.89,11.34±7.51,6.53±3.83,在正常子宫内膜组中其表达分别为0.98±0.77,0.49±0.56,1.04±0.76.子宫内膜癌miRNA-200家族的表达较正常内膜组织明显升高(P＜0.01).子宫内膜癌组中根据组织分型G1、G2、G3分别有11、29、7例,而临床分期I、Ⅱ、Ⅲ期的分别有35、9、3例;子宫内膜癌miRNA-200家族高表达与患者年龄、组织学分级、临床分期均无相关性(均P>0.05).结论 miRNA-200家族可能参与了子宫内膜癌的发生、发展过程,起到癌基因的作用,其高表达可以作为一个早期筛查的分子标记物.
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亚临床状态肾上腺皮质肿瘤ACTH受体的表达及临床意义
目的 对比不同类型肾上腺皮质肿瘤中促肾上腺皮质激素受体( ACTH-R)表达水平的差异,探讨亚临床皮质醇分泌瘤与其他类型肾上腺皮质肿瘤的异同.方法 应用荧光实时定量PCR检测不同类型肾上腺皮质肿瘤组织中ACTH-R mRNA的表达；比较不同组织中ACTH-R表达的差异,对ACTH-R在肾上腺皮质肿瘤中的表达行相关性分析.结果 ACTH-R/β-actin mRNA相对比值在正常肾上腺皮质(NC)中为0.961±0.164,醛固酮分泌瘤(APA)中为0.845±0.386,皮质醇分泌瘤(CPA)中为0 636±0.104,亚临床皮质醇分泌瘤(sub-CPA)中为1.242±0.372,肾上腺皮质无功能瘤(NFA)中为1.297±0.228.ACTH-R/β-actin mRNA相对比值在NFA及sub-CPA的表达均显著高于正常肾上腺皮质、APA和CPA(P＜0.01),在CPA中的表达均显著低于其他各组(P＜0 05).结论 ACTH-R的差异表达可能是亚临床皮质醇分泌瘤内分泌功能低下的决定因素之一.
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糖尿病大鼠肺组织β_2肾上腺素能受体mRNA表达水平的研究
目的 观察糖尿病大鼠肺组织β_2肾上腺素能受体mRNA表达的变化.方法 28只大鼠随机分为正常组和糖尿病组(腹腔注射链脲佐菌素建模).采用实时荧光定量PCR检测肺组织β_2肾上腺素能受体mRNA的表达,并进行比较.结果 正常大鼠比较,糖尿病组大鼠肺组织的β_2受体mRNA的表达下调(P<0.01).结论 糖尿病大鼠肺组织β_2受体mRNA的表达下降,可能是糖尿病肺功能受损的发病基础.
关键词： 荧光实时定量PCR 糖尿病 β_2肾上腺素能受体 -
结直肠癌组织cripto基因mRNA水平及临床意义
目的 检测cripto基因mRNA在结直肠癌及其癌旁组织中mRNA表达情况,并探讨其在结直肠癌发生发展中的意义.方法 提取36例人大肠癌及癌旁正常组织中总mRNA,采用实时荧光定量PCR法检测其中cripto mRNA表达情况;并分析其表达与患者淋巴结转移、肿瘤分化程度和Dukes's分期相关性.结果 cripto mRNA表达在大肠癌组织中阳性表达率为86.1%(31/36),而正常肠组织未见cripto mRNA表达,统计学差异显著(P<0.0001).cripto mRNA表达与浆膜侵袭、淋巴结转移和Duke's分期密切相关(P<0.05,P<0.05,P>0.05),而与患者肿瘤发生部位和分化程度无关(P>0.05,P>0.05).结论 cripto基因在结直肠癌组织中高表达,可能与大肠侵袭癌转移有关.
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荧光实时定量PCR方法在异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉菌感染早期诊断中的价值
目的 探讨荧光实时定量PCR方法在异基因造血干细胞移植后侵袭性曲霉菌感染(IA)早期诊断中的价值.方法 设计可扩增5种主要曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、米曲霉)18s RNA的引物和TaqMan探针,以18例确诊及临床诊断的IA作为阳性病例,以38例除外IFI作为阴性对照,检测共123份血清标本,探讨定量PCR方法的界值以及其敏感度、特异度.结果 以1周内连续≥2次血清标本DNA含量≥15 pg/μl作为PCR界值时,可获得佳敏感度和特异度,分别为94.4%、100.0%.结论 荧光定量PCR方法有助于提高IA诊断阳性率,具有较好临床应用前景.
关键词： 侵袭性曲霉菌感染 荧光实时定量PCR 异基因造血干细胞移植 -
定量PCR技术检测正畸患者牙龈卟啉单胞菌的变化
目的 采用荧光实时定量PCR技术,研究正畸患者的龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)在总细菌中的构成比是否产生变化.方法 挑选30例正畸治疗六个月以上患者为实验组,30例未带矫治器的牙周健康者为对照组,分别记录牙周临床指标(包括菌斑指数、龈沟出血指数、探诊深度),和龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的构成比,并比较两组患者的差异.结果 菌斑指数实验组为1.60±0.58,对照组为1.09±0.72,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).探诊深度实验组为(2.72±0.64)mm,对照组为(2.13±0.18)mm,两组比较差异有极显著的统计学意义(P＜0.001).龈沟出血指数实验组为1.4±0.47,对照组为1.32±0.52,两组间比较差异无统计学意义(P=0.78).牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的构成比,实验组0.45％±0.07％和对照组0.05％±0.01％比较,P＜0.0001,差异有统计学意义.结论 正畸患者龈下菌斑中,牙龈卟啉单胞菌在总细菌中的含量增加,荧光实时定量PCR技术可监测其变化,提示正畸期间保持牙周清洁的重要性.
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探讨神经胶质瘤患者HO-1异常表达及其意义
目的探讨神经胶质瘤HO-1 mRNA的表达及意义。方法通过荧光实时定量PCR法检测18例神经胶质瘤及癌旁组织HO-1 mRNA的表达。结果神经胶质瘤患者HO-1mRNA的表达水平（1.040±0.026）明显高于对照组（0.760±0.017）（P＜0.05）。结论 HO-1 mRNA的表达在神经胶质瘤患者中明显升高，HO-1在神经胶质瘤发病过程中可起到保护作用。
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MicroRNA 92a在子宫内膜异位症中的表达量及意义
目的：探讨微小MicroRNA 92a 在子宫内膜异位症及子宫正常内膜组织和血清中的表达量，分析其表达量和子宫内膜异位症相关的临床病理特征及意义。方法通过HE染色确定子宫内膜异位症后，应用实时定量PCR方法检测11例子宫内膜异位症患者及10例对照组的血液和组织中MicroRNA 92a的相对表达量。结果 MicroRNA 92a在子宫内膜异位症患者的组织和血清中表达量均明显低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 MicroRNA 92a的表达失调可能与子宫内膜异位症的发生发展有关，故对子宫内膜异位症的早期诊断、治疗及预后评估均具有一定的指导意义。
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IgA肾病小鼠肾皮质PDGF-B、 PDGFR-B mRNA表达的研究
目的 本研究探讨PDGF-B、 PDGFR-B在IgAN小鼠肾皮质中的基因表达情况.方法复制IgAN小鼠模型,应用实时荧光定量PCR检测肾皮质PDGF-B、 PDGFR-B mRNA表达.结果 IgAN小鼠肾皮质中PDGF-B、 PDGFR-B的mRNA均高表达,其中PDGF-B与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)成正相关.结论在IgAN肾组织中,PDGF-B、 PDGFR-B可能在系膜细胞的增生、发生表型改变转化为成肌纤维细胞的信号传导过程中发挥着重要作用.
关键词： IgA肾病 血小板衍生生长因子B及受体 荧光实时定量PCR -
食管鳞状细胞癌中miRNA-375的差异表达
目的 分析microRNA (miRNA)表达谱在食管鳞状细胞癌及正常食管黏膜上皮组织中的差异.方法 8例食管鳞状细胞癌组织及相应正常食管黏膜上皮经microRNA芯片技术检测分析差异miRNA,并扩大样本量通过反转录PCR和荧光实时定量PCR技术验证差异表达的miRNA.结果 芯片检测结果显示在食管鳞状细胞癌组织内明显下调的miRNA有27个,上调的miRNA有16个,并且下调差异倍数大的为miR-375,通过荧光实时定量PCR技术验证miR-375在食管鳞状细胞癌中明显下调(P ＜0.005).结论 miR-375在食管鳞状细胞癌的发生发展中发挥着关键的作用,为进一步研究食管鳞状细胞癌发生的分子机制提供依据.
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生存素在胃癌中的表达
目的:探讨生存素在胃癌组织中的表达及与临床病理资料的关系.方法:采用荧光实时定量PCR(realtime quantitative PCR)方法和免疫组织化学S-P法分别在mRNA转录水平和蛋白水平检测30例胃癌组织及远癌切端正常组织中生存素的表达.结果:本组30例标本,胃癌组织中生存素在mRNA转录水平和蛋白水平的表达均显著高于远癌切端正常组织.而生存素在mRNA转录水平和蛋白水平的表达与胃癌的分化程度、浸润深度、TNM分期及有无淋巴结转移无显著相关性.结论:提示生存素的过度表达是胃癌形成的早期事件,而在恶性胃癌的进展过程中可能不起主要作用,也说明胃癌的形成是个多因素参与的过程.生存素可作为胃癌早期诊断的特异性指标之一.
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血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义
目的 观察血清miR-21和miR-10b在早期宫颈癌患者中的表达及临床意义.方法 选择手术治疗的宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者45例作为CIN组,早期宫颈浸润癌(ICC)患者85例作为ICC组,子宫肌瘤全切子宫后正常宫颈上皮(NCE)患者20例作为NCE组.用Real time PCR法检测各组血清miR-21和miR-10b表达情况及ICC组手术后miR-21和miR-10b表达情况,分析miR-21和miR-10b相对表达量与CIN 分级、ICC临床指标的关系及ICC患者血清miR-21和miR-10b表达的相关性.结果 ICC组的miR-21相对表达量明显高于CIN组和NCE组(P均<0.05),并随着CIN分级的升高相对表达量增加(P<0.05),手术后血清miR-21相对表达量明显降低(P<0.05);ICC组的miR-10b相对表达量明显低于CIN组和NCE组(P均<0.05),并随着CIN分级的升高相对表达量降低(P<0.05),手术后血清miR-10b表达量明显增加(P<0.05).血清miR-21和miR-10b表达量与年龄、组织类型、肿瘤直径、肌层浸润深度、脉管浸润和神经浸润无明显相关性(P均>0.05),而与临床分期、组织分化程度、高位HPV和淋巴转移具有明显的相关性(P均<0.05).ICC患者的血清miR-21相对表达量与血清miR-10b相对表达量呈负相关(r=-0.618,P<0.05).结论 miR-21可能为促癌基因,miR-10b为抑癌基因,miR-21和miR-10b参与了宫颈癌的发生发展,联合检测血清miR-21和miR-10b表达量对于早期诊断宫颈癌和监测预后具有重要意义.
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荧光实时定量PCR检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体基因mRNA表达
目的 建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体(AR)基因mRNA表达.方法 随机选择ASA Ⅰ～Ⅱ级老年患者30例,分离外周静脉血淋巴细胞,采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达,并与半定量PCR检测结果进行比较.结果 30例患者外周血淋巴细胞荧光实时定量PCR均检出β1和β2-AR mRNA表达,不同性别组同一基因表达量无显著差异(P>0.05);荧光实时定量PCR检测β2-AR mRNA表达量显著高于β1-AR mRNA(P<0.001),而半定量PCR随着循环次数增加,β1和β2-AR mRNA表达差异减小.结论 所建立的荧光实时定量PCR成功检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2-AR基因mRNA表达,有较高的灵敏性及特异性;半定量PCR扩增平台期影响试验结果判断.
关键词： 荧光实时定量PCR β肾上腺素能受体mRNA 淋巴细胞 老年人 -
一种高效准确定量计数噬菌体肽库目标分子的方法
利用双层琼脂平板法与荧光实时定量PCR (Real-time PCR)技术分别测定少量、中量和大量噬菌体的效价.结果显示,双层琼脂平板法与Real-time PCR法均可准确测定噬菌体效价.双层琼脂平板法所得符合条件的平板约为总数的1/3,需重复测定10次,每次消耗噬菌体10 μl,测得噬菌体效价的组内变异系数为4.93%～30.38%.Real-time PCR法重复测定3次即可,每次消耗噬菌体1 μl,其组内变异系数仅为0.02%～0.25%,明显低于双层琼脂平板法.提示,Real-time PCR技术可简单、迅速地测定噬菌体效价.
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实时定量PCR检测VEGF在子宫内膜癌及外周血中的表达及其临床意义
目的:检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因在子宫内膜癌、癌周组织、正常子宫内膜及外周血循环中的表达情况,分析其在肿瘤生长、转移中的作用.方法:采用荧光实时定量PCR方法检测51例子宫内膜癌患者的癌组织和癌周组织、40例正常子宫内膜组织及其对应的患者外周血中的VEGF表达情况,分析其与临床病理参数之间的关系.结果:子宫内膜癌组织中VEGF表达水平显著高于癌周组织及正常子宫内膜组织(P<0.05) ;与临床分期、组织学分级、淋巴结转移、肌层浸润深度密切相关 (均P<0.05),但与肿瘤病理类型及患者是否绝经无明显相关性(P>0.05).子宫内膜癌患者外周血中VEGF的表达明显高于正常对照(P>0.05),且与临床分期、组织学分级、病理类型及淋巴结转移有显著相关(均P<0.05),但与肌层浸润程度及患者是否绝经无明显相关性.结论:荧光实时定量PCR可以敏感、特异性地检测子宫内膜癌组织及外周血中VEGF的表达,VEGF在子宫内膜癌的发生、侵袭、转移过程中可能起重要作用.
关键词： 血管内皮生长因子基因 子宫内膜肿瘤 荧光实时定量PCR -
多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率
目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法.方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测.结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性.91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%.结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础.
关键词： 急性严重呼吸道综合征病毒 多重巢式PCR 荧光实时定量PCR -
血清循环miR-103a-2在非酒精性脂肪性肝病中的表达及意义
目的 探讨miR-103作为非侵袭性生物学标志物对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)代谢异常的筛查意义.方法 以健康人群和NAFLD患者为研究对象,采集血清样本进行生化指标检测.采用NucleoZOL法分离血清miRNA,SYBR Green法对miR-103a-2进行相对定量分析.Speraman法对miR-103a-2和生化指标进行相关性分析.结果 血清学分析结果显示,与健康人对照组相比,NAFLD组TC(P＜0.01)、TG(P ＜0.01)、ALT(P ＜0.01)和γ-GGT(P ＜0.01)水平均明显升高.与血脂正常NAFLD组相比,高脂血症NAFLD组中TC(P＜0.01)、TG(P＜0.01)和LDL-C(P ＜0.05)水平均明显升高,与健康人对照组相比,血脂正常NAFLD患者(P＜0.05)和伴有高血脂症NAFLD患者(P＜0.01)血清miR-103a-2表达水平均升高.血清miR-103a-2水平与血清TC水平呈正相关(r=0.495,P=0.001).结论 血清miR-103a-2较血脂更为敏感,可能成为NAFLD无创性筛查指标.
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miR-155在非小细胞肺癌患者血清中的表达及其临床意义
目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小RNA-155(microRNA-155,miR-155)水平及其临床意义. 方法 采用荧光实时定量逆转录聚合酶链反应法检测58例NSCLC患者和42例健康体检者血清miR-155的表达,并分析其与临床、病理资料的相关性. 结果 NSCLC患者血清miR-155的表达水平明显升高,而且其表达与组织分化、临床分期、淋巴结转移显著相关(P＜0.05),而在不同年龄、性别和病理类型患者间差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 NSCLC患者血清miR-155水平与肿瘤分型、临床分期和术后复发显著相关,可以作为NSCLC诊断和预后判断的肿瘤标志物.
