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针对gyrA基因突变的反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的研究
目的 建立快速检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药性的反向斑点杂交(reverse dot blot hybridization,RDBH)技术,并观察其效果.方法 针对结核分枝杆菌gyrA基因序列及常见的突变位点,分别设计1条野生型和7条突变型探针,建立RDBH技术,对临床分离结核分枝杆菌菌株进行喹诺酮耐药性检测,以比例法药敏试验和DNA测序做对照.结果 应用比例法药敏试验、DNA测序、RDBH三种方法分别检测59株喹诺酮耐药株和51株喹诺酮敏感株,与比例法相比,RDBH试验灵敏度和特异度分别为69.49％ (41/59)、100％ (51/51),符合度为83.63％;而RDBH与DNA测序结果比较,敏感度和特异度分别为97.56％ (40/41),98.55％ (68/69),符合度达98.18％.结论 RDBH技术检测结核分枝杆菌喹诺酮耐药具有良好的灵敏度、特异度和符合度.
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结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达及鉴定
目的构建结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达载体并进行表达,为进一步研究奠定基础.方法PCR扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT获得重组表达质粒pGEX-2994,转化大肠杆菌测序后诱导表达,纯化目的蛋白并免疫新西兰大白兔获取多价抗体.结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv2994基因,成功构建了融合表达质粒pGEX-Rv2994,转化大肠杆菌JM109后,经IPTG诱导,表达出约73kDa重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗体.结论成功构建了原核表达载体pGEX-2994,获得并纯化了GST-Rv2994融合蛋白,制备了高效价的多价血清,为Rv2994基因的功能研究奠定了基础.
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可食用动物组织中喹诺酮类药物的多残留分析——前处理方法
本文综述了2001年1月～2006年9月国内外部分可食用动物组织中喹诺酮类药物分析前处理方法,对选用的各提取方法和净化方法进行了必要的分析和讨论,并简要的例举了喹诺酮类药物多残留分析中的各种前处理方法的步骤,以期为喹诺酮类药物的多残留研究提供参考.
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喹诺酮类抗菌药物不良反应的总结分析
目的:总结喹诺酮类药物的不良反应(ADR),指导临床合理用药.方法 对我院2005年～2012年期间发生的110例奎诺酮类药物所致ADR病例进行总结分析.结果 静脉给药ADR的比例明显高于口服给药;ADR病例中,以皮肤系统、神经系统、消化系统居多.结论 临床中应尽早检查出使用喹诺酮类药物可能会发生的ADR,及时采取相对应的措施,大限度的降低药物的ADR给患者带来的伤害.
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支气管扩张症内科治疗86例临床分析
目的:分析研究支气管扩张症内科治疗的临床治疗方法及效果；方法:研究选取了2009年4月-2011年3月期间我院收治的86例支气管扩张症患者作为研究对象,通过痰培养、肺功能检查等了解患者的病情状况,并对患者应用抗菌药物的情况以及临床治疗结果进行了统计分析；结果:通过对患者的痰标本进行检查可知病原菌主要为革兰阴性菌；患者应用抗菌药物的平均时间为28d,同时应用3种及以上抗菌药物的患者占24.42％,同时应用两种抗菌药物的患者占54.65％,仅应用1中抗菌药物的患者占20.93％;患者所应用的主要抗菌药物为第三代头孢菌素,共有37例,其次为喹诺酮,共有25例；经过治疗83例患者痊愈出院,治愈率达到了96.51％;讨论:患者主要以感染革兰阴性菌为主,在对支气管扩张症的治疗上主要采用第三代头孢菌素,支气管扩张症患者通过合理的治疗后大部分能够痊愈出院,临床治疗效果理想.
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结核分枝杆菌耐喹诺酮临床分离株gyrA基因突变的研究
目的了解结核分枝杆菌喹诺酮(quinolones)耐药株耐药基因突变情况,评价其应用价值.方法通过16S rRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分枝杆菌临床分离株; 通过PCR-SSCP和直接测序技术分析结核分枝杆菌的gyrA基因突变的情况.结果 75株为结核分枝杆菌复合群.30株喹诺酮敏感株的gyrA基因的SSCP图谱中,11株与H37Rv相同,19株与卡介苗相同;与卡介苗gyrA基因的SSCP图谱相同的敏感株95位密码子为ACC,与H37Rv该图谱相同的敏感株95位密码子为AGC.45株喹诺酮耐药株中,34株(75.6%)gyrA基因SSCP图谱泳动异常,对25株泳动异常、出现频率较高耐药株测序证实15株(44.1%)为94位密码子GAC→GGC突变;10株(29.4%)为90位密码子GCG→GTG的突变.结论结核分枝杆菌耐喹诺酮与gyrA基因突变有关,PCR-SSCP可能成为测定结核分枝杆菌耐喹诺酮类药基因型的快速、简便的方法.
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论氟喹诺酮类药物的合理应用
从喹诺酮类药物的抗菌性能、不良反应、药物相互作用、临床应用来讨论合理用药的必要性.
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超高效液相色谱-串连质谱法同时测定牛奶中7种四环素和14种喹诺酮类药物残留
目的 采用超高效液相色谱-电喷雾串连四极杆质谱,正离子多反应监测(MRM)模式同时测定牛奶中7种四环素和14种喹诺酮残留.方法 试样经EDTA-McIlvaine(pH=4.0)缓冲溶液提取,用HLB固相萃取柱浓缩和净化,Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱分离,以甲醇-乙腈混和液和含0.2％甲酸的水溶液为流动相梯度洗脱,进行测定.结果 该方法的平均回收率为89.2％～119.1％,相对标准偏差为1.8％～19.0％,方法的定量限介于0.1 ～ 0.5 μg/kg.结论 该方法灵敏度高,重现性良好,适用于牛奶中多种抗生素的检测.
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高效液相色谱-串联质谱法测定鱼肉中8种喹诺酮类药物的残留量
目的 建立鱼肉中恩诺沙星、丹诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星、双氟沙星、氧氟沙星等8种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法 以氘代试剂为内标,样品经酸性乙腈提取后,用正己烷脱脂,旋转蒸发浓缩,采用LC-MS/MS多反应监测(MRM)正离子模式测定.结果 8种喹诺酮的水平为1.0 μg/kg和3.0 μg/kg时回收率为88.4％～114.9％,检出限(S/N=3)为0.03 ～0.1 μg/kg.结论 该方法简便快捷,精密度好,准确度高,可满足鱼肉中多种喹诺酮类药物残留的定性、定量检测要求.
关键词： 高效液相色谱-串联质谱法 氘代试剂 喹诺酮 鱼肉 兽药残留 -
高效液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中喹诺酮类药物残留
目的 用高效液相色谱-串联质谱法快速测定水产品中13种喹诺酮类药物残留量的方法.方法 色谱柱为Ultimate XB-C<,18>(2.1 mm×150 mm,5μm),确定了佳检测参数:离子源为电喷雾(ESI)离子源、正离子扫描、选择反应监测(SRM)、电喷雾电压4 500 V、鞘气35 units、辅气5 units、离子源温度350℃、源内碰撞诱导解离电压为10 V.从提取和净化两个方面确立了前处理的佳条件与步骤.结果 平均回收率74.6%～113.0%,相对标准偏差为3.24%～12.11%(n=6),定量检出限(LOQ)为1.00 μg/kg,线性范围在3.0～200.0 ng/ml.结论 所建立的方法可以用于日常水产品中13种喹诺酮类药物残留量的检测分析.
关键词： 高效液相色谱-串联质谱 水产品 喹诺酮 残留 -
全自动固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物肌肉中喹诺酮类和四环素类兽药残留
目的 建立同时测定肌肉中氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、二氟沙星、沙拉沙星、噁喹酸和氟甲喹等11种喹诺酮类和四环素、金霉素、土霉素和强力霉素等4种四环素类药物残留的全自动固相萃取-超高效液相色谱-串联四级杆质谱分析方法.方法 肌肉(包括鸡肉、猪肉、虾肉)以含0.1 mol/L EDTA-Mcllcaine缓冲溶液(pH=4.0)提取,HLB固相萃取柱净化,100％甲醇洗脱.采用UPLC(R) C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.6 μm)分离,以0.1％甲酸水和甲醇-乙腈(40∶60,V/V)溶液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子电离,多反应监测(MRM)模式,以保留时间和目标物的二级质谱特征碎片离子予以双定性确证,以基质外标法定量.结果 15个组分与杂质能得到良好分离,在1.25 ～ 50.0μg/kg范围内线性关系良好(r≥0.998 5),11种喹诺酮类药物低检出限和定量限分别为0.013 ～0.069和0.043～0.23 μg/kg,4种四环素类药物低检出限和定量限分别为0.033 ～0.093和0.11～0.31 μg/kg.高、中、低三种添加水平的加标回收试验:鸡肉的加标回收率为70.8％ ～ 105.4％,相对标准偏差为0.5％～7.4％;猪肉的加标回收率为75.6％～115.2％,相对标准偏差为0.8％ ～8.9％;虾肉的加标回收率为73.7％ ～117.5％,相对标准偏差为0.5％ ～14.8％.应用该方法对广东省60份实际样品进行检测,结果在4份样品中分别检出氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星和强力霉素,其中虾肉样品的恩诺沙星和强力霉素含量均高达400 μg/kg,鸡肉样品中强力霉素含量高达220 μg/kg,均超出限量值(100 μg/kg).结论 本方法准确、快捷、简便,适用于鸡肉、猪肉和虾肉等动物肌肉中喹诺酮类和四环素类的同步确证及定量分析,为食品安全风险监测提供高效可靠的方法.
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超高压液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱内标法同时测定禽类食品中11种喹诺酮类药物
目的 建立同时测定禽类食品中11种喹诺酮类药物残留量的超高压液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱(UPLC-ESI-MS/MS)分析方法.方法 鸡肉和鸡蛋样品经1％乙酸乙腈(1∶100,V/V)混合液提取,冷冻离心与正己烷脱脂净化,以10 mmol/L乙酸铵(含0.1％甲酸)-甲醇为流动相,采用电喷雾电离,正离子扫描,多离子反应监测(MRM)模式,基质匹配同位素内标,标准曲线法定量.结果 11种喹诺酮类药物在0.05 ～ 50.0 μg/L的浓度范围内线性良好,相关系数R2≥0.997 4,栓出限范围为0.05～0.10 μg/kg,平均回收率为82.4％～104.3％,相对标准偏差小于15.0％.结论 该方法的样品前处理过程简单,净化效果好,减少了基质效应的影响,适用于大批量禽类食品中喹诺酮类药物残留量的快速测定.
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喹诺酮类抗菌药物的合理应用
通过对近年来喹诺酮类药物不良反应的回顾性分析,提出合理应用该类药物的对策,指导该类药物的合理运用,保证临床用药安全、有效、经济、合理.
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头孢哌酮钠舒巴坦钠联合左氧氟沙星治疗慢性阻塞性肺疾病的临床效果分析
目的:探讨头孢哌酮钠舒巴坦钠联合喹诺酮类药物(左氧氟沙星)治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的临床效果.方法:选择2013年4月21日至2014年4月21日我院收治的100例COPD患者作为研究对象.将患者随机分为对照组和试验组,每组各50例.对照组在常规治疗的基础上采用头孢哌酮钠舒巴坦钠治疗,试验组在对照组治疗的基础上加用左氧氟沙星治疗.结果:试验组的治疗总有效率为96.00％(48/50),高于对照组的7K00％(39/50),差异具有统计学意义(P＜0.05).试验组的不良反应低于对照组(P＜0.05).结论:头孢哌酮钠舒巴坦钠联合喹诺酮类药物治疗COPD具有显著的疗效.
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有机磷杀虫药中毒治疗应慎用喹诺酮类抗菌药
目的:探索在有机磷杀虫药治疗过程中应用喹诺酮类抗菌药出现精神症状的频度和强度,寻找避免的方法.方法:采用回顾性调查和实验干预方式,分别统计不同方式应用喹诺酮的精神症状发生强度,计算其统计学差异.结果:常规应用和未用喹诺酮药物两组相比,后者中重度精神症状比例明显增高;慢速输入喹诺酮或与阿托品应用时间隔开方式可以避免该现象,后者效果更佳.结论:在有机磷中毒应用阿托品期间使用喹诺酮类药物可以使前者精神症状明显加重,必要应用时可以慢速滴入或者与阿托品隔开使用.
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喹诺酮类药物的用药分析
目的:通过对西药门诊喹诺酮类药物的使用情况进行分析,了解门诊喹诺酮类药物的使用情况及合理性.方法:随机抽查门诊处方34 224张,其中使用喹诺酮类药物处方3 124张,占总处方数的9.10%.结果:不合格处方574张,占所查喹诺酮类处方18.40%.结论:门诊在使用喹诺酮类药物过程中仍存在问题,需进一步改善和提高.
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盐酸左氧氟沙星的临床应用
喹诺酮(quinolones)是一类抑制DNA螺旋酶的抗菌药物,盐酸左氧氟沙星(Levofloxacin Hydrochloride)是第三代喹诺酮药物氧氟沙星的左旋体[1,2],由于其抗菌作用强,不良反应少,临床应用较为广泛,深受医生的青睐,为此,本文就盐酸左氧氟沙星的临床应用情况进行阐述,现报告如下.
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结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变的初步研究
目的 初步了解福建省结核分枝杆菌分离株喹诺酮类药物耐药性与gyr基因突变的关系.方法 对来源于福建省结核病耐药性监测30个监测点纳入的75株耐多药结核分枝杆菌分离菌株,行包含gyrA、gyrB基因喹诺酮类药物耐药决定区(QRDR)序列测定,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列进行比较分析.结果 75株耐多药结核分枝杆菌中,56株氧氟沙星敏感株均未检测到gyrA基因发生突变,19株氧氟沙星耐药株检测到16株(84.21％,16/19) gyrA基因发生突变,其中9株突变发生在第91位密码子,4株发生在第94位密码子,3株发生在第95位密码子,发现Ser95Asn为新突变类型;所有菌株均未检测到gyrB基因发生突变.结论 gyrA基因突变是耐喹诺酮结核分枝杆菌耐药性的主要分子机制;gyrA基因的突变主要发生在第91位、94位、95位密码子上.
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动物源性食品中喹诺酮类药物残留分析进展
喹诺酮类(QNs)药物广泛地应用于治疗人和动物的感染性疾病,主要的作用机制是抑制DNA拓扑酶Ⅱ.此类药物抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强,而且价格低廉.因此,已成为兽医临诊和水产养殖业中重要的抗感染药物之一.
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质粒介导喹诺酮耐药机制的研究进展
喹诺酮类抗菌药物是极易容易产生耐药性的药物之一.随着其在临床和畜牧养贿业的广泛应用,耐药性问题越来越受到普遍关注.除染色体突变引起的喹诺酮耐药外,质粒介导的喹诺酮耐药也取得了很大进展.本文就近年来有关质粒介导引起细菌对喹诺酮药物敏感性降低的研究简单概述如下.
