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肺炎克雷伯菌DHA-1型质粒AmpC酶全编码基因克隆、表达及序列分析
目的以我院临床分离的肺炎克雷伯菌KP1为研究对象,对其所产生的质粒AmpC酶编码基因的序列进行研究. 方法采用聚合酶链反应(PCR),用DHA-1型AmpC酶引物扩增KP1接合子中AmpC酶全编码基因,并克隆到pUC118载体中进行表达,对PCR产物进行测序,分析其基因型别. 结果肺炎克雷伯菌KP1菌株的转移接合子所含有的质粒AmpC酶为DHA型,编码基因序列与GenBank中DHA-1编码基因序列的同源性为100%. 结论哈尔滨地区临床分离肺炎克雷伯菌有可转移性DHA-1型AmpC酶的存在.
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大肠埃希菌中质粒AmpC酶的流行分布
目的 了解河南地区大肠埃希菌中质粒AmpC酶的流行分布及其基因特征.方法 对380株大肠埃希菌进行AmpC酶表型筛选,对筛选阳性株进行多重聚合酶链反应(PCR)及型特异PCR、克隆、测序;等电聚焦电泳检测细菌β-内酰胺酶等电点;接合实验验证质粒传递性;肠杆菌科基因组内重复一致序列(ERIC-2) PCR检测同源性.结果 380株大肠埃希菌中2.1% (8株)的细菌产AmpC酶,经测序证实均为DHA-1型质粒AmpC酶基因,ERIC-2 PCR结果 显示质粒AmpC酶主要以非克隆传播为主.结论 河南地区发现DHA-1型质粒AmpC酶以非克隆传播为主.
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DHA-1型质粒AmpC酶临床回顾研究
目的 调查我院分离DHA群质粒头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)菌株感染患者的临床资料,分析其耐药性和分子流行病学.方法 收集2003年至2005年间34株产DHA型质粒AmpC酶的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌感染者的临床资料,采用多重聚合酶链反应(PCR)扩增DHA结构基因,用随机扩增DNA多态性(RAPD)分析同源性,测定其对药物的敏感性.结果 高龄、使用免疫抑制剂、外伤手术史等均为风险因素;三代头孢治疗失败率为86.9%(头孢他啶88.9%,头孢噻肟60%和头孢哌酮100%);复方制剂(β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂)为71.4%;碳氧酶烯类为10%;喹诺酮类为70%.DHA群测序确定为DHA-1型;RAPD显示科室内及科室间存在克隆传播.结论 我院DHA-1型质粒AmpC酶菌株感染患者抗生素治疗失败率较高;不同科室分离的菌株存在一定的同源性.
关键词： 质粒头孢菌素β-内酰胺酶 DHA-1 临床回顾研究 -
肺炎克雷伯菌中DHA-1型质粒AmpC酶的流行分布
目的 了解我院肺炎克雷伯菌中质粒头孢菌素β-内酰胺酶(AmpC酶)的流行分布及其基因型和耐药特征.方法 用纸片扩散法对2003至2005年连续不重复的487株肺炎克雷伯菌进行产11pCp AmpC酶的筛选,对筛选阳性的细菌分别进行三维试验、多重聚合酶链反应(PCR)、型特异引物PCR及测序,以确定质粒AmpC酶的基因型,并对产质粒AmpC酶细菌进行药物敏感性实验和美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)确认检测.结果 487株肺炎克雷伯菌中,70株(14.4%)AmpC酶纸片筛选试验阳性(头孢西丁抑菌圈直径≤18 mm);22株(4.5%)三维试验阳性;21株(4.3%)细菌多重PCR阳性,经测序均为DHA-1型质粒AmpC酶,其中12株确认产ESBLs.2003年的质粒AmpC酶阳性率仅为1.3%,而2005年为6.7%,两者差异有统计学意义(P<0.05).结论 我院肺炎克雷伯菌中质粒AmpC酶为DHA-1型,发生率为4.3%,且有逐年上升趋势.
关键词： 质粒 头孢菌素β-内酰胺酶 DHA-1 肺炎克雷伯菌
