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120例肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶酶的检测及耐药性
目的：研究克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）的检测结果及药敏分析，为肺炎患者的治疗提供依据。方法选取肺炎克雷伯菌患者120例，对患者的临床资料进行回顾性分析。结果120株肺炎克雷伯菌中检出单产ESBLs检出率为34.16%，单产AmpC酶检出率为6.67%，同时产AmpC酶和ESBLs检出率为2.50%，未产酶检出率为56.67%，肺炎克雷伯菌对亚胺培南和哌拉西林/他唑巴坦敏感度较高，产ESBLs和AmpC酶株与非产酶株对抗生素的耐药性比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论肺炎克雷伯菌ESBLs和AmpC酶检测结果中产生的ESBLs和AmpC酶菌株对常用的抗生素药物耐药性高，临床上应加以重视。
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ICU肺炎克雷伯菌分布及耐药性分析
目的 探讨ICU肺炎克雷伯菌分布及耐药性分析.方法 选取该院2015年1月—2017年1月ICU收治的感染肺炎克雷伯菌患者,收集菌株407株.对收集的菌株进行药敏试验,对菌株的分布以及耐药情况进行分析统计.结果 407株肺炎克雷伯菌菌株主要分布在痰液(75.92％)、创面分泌物(5.90％)、中段尿(4.66％)、胸腹水(3.69％)中.407株肺炎克雷伯菌产ESBLs 113株,非产ESBLs 294株,其中肺炎克雷伯菌产ESBLs耐药情况主要以复方新诺明(64.60％)、氨曲南(53.98％)、头孢呋辛(50.44％)、头孢噻肟(48.67％)、头孢吡肟(46.90％)为主;肺炎克雷伯菌非产ESBLs耐药情况主要以复方新诺明(45.38％)、头孢唑啉(36.39％)、头孢噻肟(32.99％)、头孢呋辛(24.83％)、氨曲南(23.47％)为主.结论 ICU中肺炎克雷伯菌耐药情况相对较高,菌株对亚胺培南为敏感,对于肺炎克雷伯菌的治疗应当作为首选,对头孢类复合制剂相对敏感,也可作为治疗药物,临床中应当交叉联合用药,避免耐药产生.
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北京某医院耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌分子流行病学研究
目的 分析北京某医院分离的耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(CRKP)的分子流行病学特征.方法 实验菌株来源于2010年5月至2015年10月在北京某三甲医院分离的所有对碳青霉烯类抗生素呈现耐药性的肺炎克雷伯菌.同一患者剔除相同部位的重复分离菌株后,一共375株被纳入本研究.采用PFGE对CRKP进行分型,并挑选不同PFGE型别的代表菌株开展多位点序列分型(MLST)、常见碳青霉烯类抗生素耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48)检测和全基因组测序分析;挑选1株CRKP(A1502)进行基于全基因组的分型,分析该菌株和其他医院和其他地区分离株之间的遗传进化关系.结果 375株CRKP分为140个PFGE型别,其中5个型别包含的菌株数大于5株,为优势型别,分别为KPX01.CN0058(128株)、KPX01.CN0014(36株)、KPX01.CN0268(16株)、KPX01.CN0265(12株)和KPX01.CN0438(7株).不同的优势PFGE型别分布在不同的时间段和病区.MLST分型结果显示,15株代表菌株中有13株为ST11型KPC-2菌株.在全基因组分型聚类树中,A1502与分离自北京其他医院的菌株聚集成簇,而与分离自上海、杭州的菌株聚类关系较远.结论 该医院CRKP分离株存在优势基因型别,流行的克隆群为携带KPC-2基因的ST11型;该克隆群存在医院内和医院间的传播扩散.
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483株肉鸡源大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ISCR1及int1基因的流行及耐药情况
目的 研究山东肉鸡源细菌中ISCR1和int1基因的流行及耐药情况.方法 于2014年6月,在山东某大型肉鸡养殖场中选择日龄在37 d的待宰肉鸡作为采样对象.将鸡舍分为东部、南部、西部、北部、中部5区,选取不同区域肉鸡,采用单纯随机方法,按照1:50比例进行泄殖腔拭子采样,共得到肉鸡粪便样本400份,经分离共得到483株非重复性样本菌株,其中大肠埃希菌373株(77.2%),肺炎克雷伯菌110株(22.8%);采用微量肉汤稀释法,测定菌株对8类10种抗菌药物的低抑菌浓度;并对int1和ISCR1基因进行PCR扩增和测序;比较携带两种基因的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药程度差异.结果 483株菌株中,共检测到携带int1基因的菌株为440株(91.1%),携带ISCR1基因的菌株为126株(26.1%),同时携带int1和ISCR1基因的菌株共有126株(26.1%).37株同时不携带ISCR1和int1基因的大肠埃希菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为13.5%(5株)、78.4%(29株)和8.1%(3株),288株仅携带int1基因的大肠埃希菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为2.4%(7株)、74.7%(215株)和22.9%(6株),两者差异有统计学意义(P<0.001);26株仅携带int1基因的肺炎克雷伯菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为11.5%(3株)、76.9%(20株)和11.5%(3株),78株同时携带ISCR1和int1基因的肺炎克雷伯菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为0、35.9%(28株)和64.1%(50株),两者差异有统计学意义(P<0.001).结论 int1和ISCR1基因在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率较高,两类基因同时存在可介导更高程度的耐多药表型.
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两种常见耐药菌抗菌药物耐药情况的社会经济负担研究
目的 以碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌和头孢噻肟耐药大肠埃希菌为例,开展细菌耐药性的社会经济负担研究.方法 引入伤残调整寿命年、健康效用值等指标,进行细菌耐药情况的社会经济学分析.结果 经测算,2015年全国抗菌药物临床应用监测网187所成员单位住院患者因肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌耐药造成的经济负担分别高达26049.89万元、35232.58万元;患者因疾病所致的伤残引起的健康寿命损失年分别为4658.02年、6634.97年.结论 本研究尝试引入伤残调整寿命年、健康效用值等指标,提供了一种从疾病经济负担角度科学测算耐药性经济影响的思路.
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下呼吸道感染产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌耐药基因检测及亲缘性分析
分析下呼吸道感染患者气道分泌物或痰液标本分离的产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBL)肺炎克雷伯菌耐药基因的特点及亲缘性。方法 2009年1月至2010年8月由本院呼吸病区住院的下呼吸道感染患者气道分泌物或痰液标本分离得到53株肺炎克雷伯菌,采用K-B纸片扩散法测定其对常用抗菌药物的敏感性;三维实验检测AmpC酶;PCR检测ESBL、质粒介导的AmpC酶、喹诺酮类耐药基因、耐消毒剂-磺胺基因qacE△1-sul1、Ⅰ类整合酶基因Int Ⅰ 1的携带情况,并进行聚类分析。结果 53株肺炎克雷伯菌未发现对亚胺培南、美罗培南、厄他培南耐药;对环丙沙星、左旋氧氟沙星耐药率均＞80％;对其他抗菌药物也有不同程度的耐药。53株肺炎克雷伯菌中Int Ⅰ 1基因阳性率60.4％(32/53),qnrA基因阳性率54.7％ (29/53),qnrS基因阳性率13.2％ (7/53),qnrB基因阳性率5.7％(3/53),qacE△1-sul1基因阳性率71.7％(38/53),TEM基因阳性率92.5％ (49/53),CTX-M基因阳性率100％(53/53),SHV基因阳性率9.4％(5/53),AmpC基因阳性率92.5％(49/53);其中4株同时携带qnrA、qnrS、intⅠ 1、qacE△1-sul1、AmpC、CTX-M基因。聚类分析显示40、41、10与18号,25与42号,8与35号菌株有亲缘关系。结论 产ESBL肺炎克雷伯菌的多重耐药与整合子相关,且携带多种耐药基因,聚类分析显示存在克隆传播和医院内感染。
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环丙沙星诱导耐药肺炎克雷伯菌对其他抗菌药物的耐药性研究
探讨环丙沙星诱导耐药肺炎克雷伯菌(KPn)对几类常见的抗生素的耐药性。方法 琼脂二倍稀释法测定环丙沙星对20株临床分离KPn敏感株的低抑菌浓度(MIC),用环丙沙星对其进行体外多步诱导成耐药株。诱导前和诱导后K-B纸片扩散法进行药敏试验检测其对头孢他啶、头孢西丁、氨曲南、亚胺培南、莫西沙星、阿米卡星的敏感性。诱导后进行产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)初筛和确证实验。结果 20株KPn有17株成功诱导成环丙沙星高度耐药株,ESBL筛选和确证实验显示17株诱导耐药株无一产ESBL。诱导耐药株对莫西沙星全部耐药,对头孢他啶、亚胺培南、氨曲南全部敏感,对阿米卡星的敏感率为88.2％(15/17),而对头孢西丁耐药率达88.2％ (15/17)、中介率12.8％(2/17)。结论 KPn在长期低剂量接触环丙沙星后可产生耐药性,且对莫西沙星和头孢西丁有交叉耐药。环丙沙星诱导耐药的KPn对头孢西丁交叉耐药的机制可能相似。
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白细胞介素22及其受体在大鼠肺炎克雷伯菌肺炎中的表达
目的 探讨白细胞介素22(IL-22)及IL-22受体IL-10R2在大鼠肺炎克雷伯菌肺炎发病过程中表达的意义。方法 50只SPF级SD大鼠按随机数字法分为肺炎组(n=25)和对照组(n=25)。肺炎组通过气管内注射肺炎克雷伯菌建立大鼠肺炎克雷伯菌肺炎模型，对照组则滴入等体积无菌生理盐水。造模后4h、1、2、3、4d通过观察大鼠的一般情况、肺组织大体和病理切片、肺组织细菌菌落计数对肺炎模型进行评价。采用实时荧光定量PCR和ELISA分别检测肺炎组和对照组大鼠造模后4h、1、2、3、4d肺组织IL-10R2 mRNA、外周血IL-22的表达水平。应用直线相关方法分析菌落计数与IL-22及其受体的相关性。结果肺炎组大鼠造模后4h出现活动度下降、聚集成团、竖毛现象；大体肺组织明显充血水肿，显微镜下肺泡结构破坏、肺泡腔及间质显著的充血及水肿、显著的中性粒细胞浸润。肺炎组大鼠肺组织均可培养出细菌，造模后4h细菌菌落计数高[(0.94±0.02)×105 CFU/g]，之后逐渐降低，至4d时降至低[(0.07±0.00)×105 CFU/g]，证实肺炎模型制备成功。与对照组比较，肺炎组IL- 10R2mRNA的表达量于造模后4h开始升高，于第3天达峰值（12.95±0.65比0.31±0.31，P＜0.05），其后开始下降。肺炎组外周血中IL-22均低于同时间点对照组。肺炎组外周血中IL-22自造模后第3天较4h开始明显升高且随时间的延长逐渐升高。肺炎组中IL-10R2 mRNA、外周血IL-22的表达水平均与同时间点肺组织菌落计数呈负相关（r=-0.64，P=0.01；r=-0.59,P=0.00）。结论 IL-10R2在肺炎克雷伯菌肺炎中高表达，而外周血中IL-22可能由于消耗导致降低，但可随肺炎的好转回升。IL-22是肺炎克雷伯茵肺炎早期的炎性反应因子，在体内具有清除细菌的作用。
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体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型及gyrA、parC基因突变与耐药性关系
目的 体外构建喹诺酮耐药肺炎克雷伯菌模型并研究其gyrA、parC基因突变与唪诺酮耐药的关系.方法 运用亚抑菌浓度的左旋氧氟沙星与肺炎克雷伯菌在培养基中共培养,并倍比增加诱导药物的浓度,直至肺炎克雷伯菌能够在含高浓度的左旋氧氟沙星培养基上良好生长.收集耐药菌株,用PCR扩增和DNA测序法榆测gyrA、parC基因喹诺酮耐约决定区域(QRDR)的突变情况.结果 体外成功构建喹诺酮高浓度耐药肺炎克雷伯菌模型,所有耐药菌株QRDR均发生了变异,绝大部分为gyrA和parC双重突变.gyrA基因以Ser83、Asp87突变为主,Ser83→Ile,Asp87→Arg、Gly,也有菌株86位氨基酸发生了突变,由Tyr86→Ser.几乎所有菌株parC基因80位氨基酸的突变均为Ser80→Ile.结论 长期低浓度用药可以诱导喹诺酮耐药性的产生.QRDR突变与喹诺酮耐药性有关,gyrA及parC的双重突变可以导致高水平耐药,同时町能存在其他耐药机制.
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黄连素对肺炎克雷伯菌生长曲线的影响
目的 探讨黄连素与环丙沙星对肺炎克雷伯菌(Kpn)生长曲线的影响.方法 2012年1月至2012年7月本院细菌室收集的42株临床Kpn菌株,药敏试验筛选出环丙沙星和黄连素均有效的敏感株6株,命名为S1～S6；耐药株6株,命名为R1 ～R6.每个菌株分为4个实验小组:空白对照组、环丙沙星组、黄连素组、环丙沙星+黄连素组.空白对照组不进行任何处理；根据前期单用环丙沙星与黄连素测定的低抑菌浓度(MIC),黄连素浓度均使用500 mg/L,环丙沙星的浓度≤1/2 MIC.利用比浊法测定6株耐药株和6株敏感株Kpn的各实验小组在培养时间为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10h的吸光度(A600nm值)并绘制生长曲线.结果 生长曲线显示黄连素500 mg/L对临床耐药和敏感Kpn的生长曲线均有影响,当黄连素与环丙沙星联合应用时对其生长的抑制效应加大.临床耐药和敏感Kpn的生长曲线并无明显差异.结论 黄连素能增加临床耐药Kpn对环丙沙星的敏感性.
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克雷伯菌16S rDNA和rpoB基因系统进化及序列特征分析
目的 比较分析克雷伯菌属的种之间16S rDNA和rpoB系统进化发育关系和序列进化特征.方法 选取经生化鉴定的克雷伯菌18株,提取菌株染色体作为模板,分别使用16S rDNA和rpoB通用引物扩增并测序16S rDNA和rpoB序列.与GenBank中目前已公布的8种克雷伯属菌株16S rDNA和rpoB序列各8条、除克雷伯菌外其他肠道菌株的16S rDNA和rpoB序列各9条一起,共计各35条16SrDNA和rpoB序列,在MEGA 4.0中建立进化树并进行分群分析,使用DNAStar/MegAlign程序比较分析8种克雷伯菌的种间16S rDNA和rpoB序列变异碱基位点,并做分歧度分析.结果 在所有受试的16SrDNA和rpoB的各35条序列中,16S rDNA和rpoB进化发育树都将克雷伯菌区分为3个群:分离的18株克雷伯菌中,15株肺炎亚种与GenBank中除产酸克雷伯菌和运动克雷伯菌外的其余6种克雷伯菌聚为一群(Ⅰ),其余3株克雷伯菌(FX246、FX280和FX286),经生化鉴定为产酸克雷伯菌,与GenBank中产酸克雷伯菌(DQ835530)聚为一群(Ⅱ);而GenBank中的运动克雷伯菌单独聚为一群(Ⅲ);进一步的分析,在rpoB进化发育树中,无沦足Ⅰ群和Ⅱ群,还足Ⅰ群内的两个亚群,rpoB进化发育树的结点处自引导值都明显高于16S rDNA进化发育树;而且rpoB对产酸克雷伯菌的分群优于16S rDNA.对克雷伯菌的序列分析发现,16S rDNA序列存在41个碱基变异位点,有4个易变区,rpoB序列存在63个碱基变异位点,有1个易变区;克雷伯菌16S rDNA和rpoB的相似性分别为95.9%～100%和90.2%～100%.进一步的克雷伯菌种间序列分歧值分析,rpoB分歧值(0～10.6)高于16S rDNA(0～4.0).结论 克雷伯菌rpoB比16S rDNA具有更高的分歧度,在克雷伯菌属内种的分子分类和鉴定中,rpoB比16S rDNA基因更具优越性.
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产ESBL的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性分析
超广谱β-内酰胺酶(ESBL)主要由肠杆菌科细菌产生,尤以肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌为代表.产ESBL菌不仅对第三代头孢菌素和氨曲南耐药,而且对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺胺类交叉耐药[1].ESBL可以通过接合、转化和转导等形式使耐药基因在细菌间扩散.为了解本地区儿科ESBL菌的发生率和耐药特点,以控制ESBL菌的传播和流行,我们对122株肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌做了ESBL检测,并分析其对10种抗生素的耐药性,现将结果报告如下.
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头孢他啶与头孢噻肟对泌尿系产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌检出率分析
目的:了解头孢他啶(CAZ)和头孢噻肟(CTX)对我院引起泌尿系感染的肺炎克雷伯菌(Kpn)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的体外检出特点,以更好地筛选出高度耐药菌株,避免漏检.方法:用K-B纸片筛选及确证试验,对42株肺炎克雷伯菌(Kpn)进行产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测分析.结果:头孢噻肟对产ESBLs的Kpn检出率为92.31%、头孢他啶对产ESBLs的Kpn检出率为76.92%.结论:头孢噻肟对产ESBLs的Kpn检出率显著高于头孢他啶对产ESBLs的Kpn检出率.
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小儿克雷伯杆菌肺炎28例分析
目的 回顾性分析28例克雷伯杆菌肺炎小儿患者处理.方法 对2003-12/2006-12在我院住院的克宙伯杆菌肺炎小儿患者28例根据临床症状、体征、实验审检查、药敏试验和血清学检测选择治疗方法.结果 28例痰培养均为克雷伯杆菌,血清学检测阳性率为96%.敏感率高的抗生素为亚胺培南、头孢吡肟,耐药率高的药物是氨卞西林、司帕沙星等.28例均临床治愈.结论 怀疑克甫伯杆菌肺炎后应立即送痰培养做病原学检查以及联合血清学检测,同时按经验选用针对革兰阴性杆菌的广谱抗牛素,有痰培养结果后按药敏用药.
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肺炎克雷伯菌败血症并脾后脓肿误诊1例分析
对肺炎克雷伯菌败血症并脾后脓肿误诊1例分析如下.1 病历摘要男,10.5月龄.发热2 d入院.体温高达40.7 C,伴畏寒,于门诊静脉滴注美洛西林钠1次体温不降而收入院.病来无咳嗽、呕吐,哺乳尚好,尿便正常.查体:T 40 C,P 140次/min,R40次/min,W 9 kg,神清,热病容,皮肤黏膜无皮疹及出血点,浅表淋巴结不大,前囟平坦,咽充血,颈软,心肺末见异常,腹平软,肝脾未及,末梢温,神经系统无阳性体征.
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克雷伯杆菌肺炎误诊为肺结核1例分析
对克雷伯杆菌肺炎误诊为肺结核1例分析如下.1摘历摘要女,78岁.因畏寒、发热、乏力、盗汗伴咳嗽、咳痰1个月,以发热原因待查收住我科.既往史无特殊.患者于1个月前无明显诱因出现畏寒、发热、体温高达38.2_C,并呈午后或夜间发热为特点,病程第3天后伴咳嗽、咳痰、乏力、盗汗,咳嗽不剧,咯少许白色泡沫痰,量每天仅约10 ml,无咯血、腹痛、尿频、尿急、尿痛、肉眼血尿及水肿.
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随机引物PCR法基因分型肺炎克雷伯菌
目的:对肺炎克雷伯菌进行随机引物PCR(AP-PCR )法基因分型.方法:以单一随机引物及优化的反应体系对临床分离的199株肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)进行AP-PCR分析并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱.结果:199株临床分离K. pneumoniae共得1 58种AP-PCR型.结论:AP-PCR法可将K.pneumoniae分型158种.
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1型嗜肺军团菌和其他常见肺炎致病菌共同抗原的研究
目的:探讨1型嗜肺军团菌(LP1)与其他常见细菌性肺炎病原菌之间是否存在共同抗原.方法:用LP1菌体抗原免疫家兔,取其血清作为多克隆一抗;提取LP1和肺炎链球菌等细菌的菌体抗原;将这些抗原进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE);再进行免疫印迹分析(Western-blot).结果:Western-blot显示:表皮葡萄球菌、流感嗜血杆菌和铜绿假单胞菌在154 kDa和97 kDa处、流感嗜血杆菌和铜绿假单胞菌在79 kDa处、大肠埃希菌和流感嗜血杆菌及肺炎克雷伯菌在58 kDa处、铜绿假单胞菌在44 kDa处与LP1多抗均有交叉反应.金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌与LP1多抗未出现结合反应.结论:LP1和流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌之间存在有3个具有交叉反应的膜抗原条带,和表皮葡萄球菌之间有2个,和大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌之间只有1个,和金黄色葡萄球、肺炎链球菌间没有交叉反应的膜抗原条带.
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广州地区1998～2003年大肠埃希氏和肺炎克雷伯菌耐药性监测
目的:了解广州地区大肠埃希氏和肺炎克雷伯菌的耐药状况.方法:对12家医院1998～2003年从各种临床标本收集的1646株大肠埃希氏菌和1175株肺炎克雷伯菌,用K-B纸片法进行药敏试验,测定这些菌株对21种临床常用抗生素的耐药性.结果:只发现一株大肠埃希氏菌对亚胺培南耐药,对大肠埃希氏菌耐药率在10%以下的抗生素分别为哌拉西林/三唑巴坦(6.2%)、头孢他啶(6.6%)、头孢哌酮/舒巴坦(8.4%)和阿米卡星(8.3%),对肺炎克雷伯菌耐药率在10%以下的抗生素只有头孢月比肟(9.8%)和头孢哌酮/舒巴坦(9.3%).环丙沙星对大肠埃希氏菌的耐药率在70%左右,而肺炎克雷伯菌只有30%左右,肺炎克雷伯菌对阿米卡星和头孢他啶的耐药率明显高于大肠埃希氏菌,在头孢西丁耐药菌株中这种差异更加突出.结论:5 a监测中,两类细菌对临床常用大部分抗生素的耐药性没有明显改变,但对部分抗生素的耐药性各有特性,对本地区细菌进行系统、全面的耐药性监测是很有必要的.
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VITEK-AMS仪检测超广谱-β内酰胺酶的结果评价
目的评价VITEK全自动微生物分析仪(VITEK-AMS)检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的可靠性及选择佳筛选底物.方法同时使用纸片筛选和确证实验与VITEK32型-AMS仪对临床分离的195株大肠埃希菌和52株肺炎克雷伯菌进行ESBL检测.结果确证实验中,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBL阳性率分别为23.6%,19.8%,VITEK-AMS仪和纸片确证实验同时检测为阳性的为51株,同时检测为阴性的为192株,有四株确证实验阳性而VITEK-AMS仪漏检,VITEK-AMS仪检测ESBL的特异性为100%,灵敏度为92.7%.初筛实验中,头孢噻肟筛选的灵敏度为100%,是我院的佳筛选底物,其次为头孢曲松、头孢泊肟、氨曲南,单用头孢他啶漏检率高.结论 VITEK-AMS是检测ESBL的较好方法.头孢噻肟是我院的佳筛选底物.
