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插入序列共同区在多种临床菌株间的分布及其与超广谱β-内酰胺酶基因blaPER-1的关系研究
目的 研究临床来源的多种类细菌中插入序列共同区(insertion sequence common regions,ISCRs)及超广谱β-内酰胺酶基因blapER-1的分布情况,分析可移动元件ISCR1与细菌多药耐药表型及blaPER-1基因散播的关系.方法 收集2011-2012年河北省某医院临床独立菌株,应用梅里埃VITEK(R)2 COMPACT全自动微生物生化鉴定系统结合16S rDNA序列分析进行种属鉴定,利用普通聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法进行ISCR1、blaPER-1和ISCR1-blaPER-1间区的扩增；分析ISCR1、blaPER-1种属分布状况及ISCR1与菌株耐药性的关系.结果 共得到17种(属)314株临床独立菌株,其中ISCR1携带率为28.7％(90/314),在不动杆菌和肠杆菌科的多种细菌中携带较多；携带ISCR1的菌株中,96.7％(87/90)为多药耐药菌株,93.3％(84/90)耐受9类及以上抗菌药物；blaPER-1基因携带率为12.4％(39/314),在7种细菌检出,不动杆菌属细菌中检出多(31株)；21株不动杆菌属细菌和1株普通变形杆菌存在ISCR1-blaPER-1结构.结论 ISCR1在多种细菌中广泛分布,细菌多药耐药表型和其携带有一定关系；blaPER-1基因在多种细菌中散播,ISCR1的基因捕获和移动机制可能造成了blaPER-1基因在不动杆菌属细菌中及在不同种细菌间的散播.
关键词： ISCR1 blaPER-1基因 超广谱β-内酰胺酶 多药耐药 -
483株肉鸡源大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ISCR1及int1基因的流行及耐药情况
目的 研究山东肉鸡源细菌中ISCR1和int1基因的流行及耐药情况.方法 于2014年6月,在山东某大型肉鸡养殖场中选择日龄在37 d的待宰肉鸡作为采样对象.将鸡舍分为东部、南部、西部、北部、中部5区,选取不同区域肉鸡,采用单纯随机方法,按照1:50比例进行泄殖腔拭子采样,共得到肉鸡粪便样本400份,经分离共得到483株非重复性样本菌株,其中大肠埃希菌373株(77.2%),肺炎克雷伯菌110株(22.8%);采用微量肉汤稀释法,测定菌株对8类10种抗菌药物的低抑菌浓度;并对int1和ISCR1基因进行PCR扩增和测序;比较携带两种基因的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药程度差异.结果 483株菌株中,共检测到携带int1基因的菌株为440株(91.1%),携带ISCR1基因的菌株为126株(26.1%),同时携带int1和ISCR1基因的菌株共有126株(26.1%).37株同时不携带ISCR1和int1基因的大肠埃希菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为13.5%(5株)、78.4%(29株)和8.1%(3株),288株仅携带int1基因的大肠埃希菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为2.4%(7株)、74.7%(215株)和22.9%(6株),两者差异有统计学意义(P<0.001);26株仅携带int1基因的肺炎克雷伯菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为11.5%(3株)、76.9%(20株)和11.5%(3株),78株同时携带ISCR1和int1基因的肺炎克雷伯菌耐受0~2、3~5、6~8类药物的比例分别为0、35.9%(28株)和64.1%(50株),两者差异有统计学意义(P<0.001).结论 int1和ISCR1基因在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率较高,两类基因同时存在可介导更高程度的耐多药表型.
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鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子和ISCR1的检测及其结构分析
目的 了解鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子与ISCR1分布情况及其所携带耐药基因的种类,从而分析其结构及其与耐药性的关系. 方法 采用煮沸法提取鲍曼不动杆菌基因组DNA,设计引物进行PCR反应,扩增产物用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测并记录结果,根据Ⅰ类整合子可变区扩增产物图谱进行RFLP分型,后进行产物的序列分析. 结果 PCR扩增51株鲍曼不动杆菌,Ⅰ类整合酶基因intⅠ扩增阳性45株,其中包括可变区阳性32株.并且Ⅰ类整合子的可变区扩增出的目的片段大小各不相同,有28株扩增片段约为2.3 kb,2株扩增片段约为2.4 kb,2株扩增片段为3kb; ISCR1扩增阳性22株,其下游扩增阳性5株,扩增片段大小约为3 kb.同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1扩增阳性菌目的片段大小约为2 kb.酶切图谱显示,大小为2.3 kb的Ⅰ类整合子可变区产物为同一带型;序列分析显示,大小不同的Ⅰ类整合子的可变区各片段所含的基因盒各不相同;耐药基因序列分析显示,5株ISCR1的下游扩增片段为qnrA1-am-pR.同时显示Ⅰ类整合子和ISCR1两种元件以串联的形式存在于鲍曼不动杆菌中. 结论 Ⅰ类整合子与ISCR1大多以串联形式同时存在于骨髓炎患者感染的鲍曼不动杆菌中,该结构对耐药基因在不同鲍曼不动杆菌菌株间的水平传播可能起介导作用.
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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶和基因捕获元件基因检测及同源性分析
目的 了解大连地区分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的金属p-内酰胺酶、整合子Ⅰ和ISCR1的分布情况,并分析其基因多态性特征.方法 收集临床分离的89株耐亚胺培南铜绿假单胞菌,PCR检测金属酶、整合子Ⅰ、ISCR1耐药基因.脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行细菌基因分型.结果 89株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中,ISCR1基因阳性菌25株(25/89,28％),其中84％ (21/25)为多重耐药,5类及以上药物耐药的菌株占64％ (16/25),金属酶基因阳性为11株(11/89,12％),其中有8株携带IMP-1基因,3株携带VIM-2,整合子Ⅰ基因阳性43株(43/89,48％).但携带金属酶的菌株整合子Ⅰ、ISCR1基因扩增均为阴性;PFGE分型结果显示:89株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌分为15个基因型(A～O),其中A型46株、B型16株、C型4株、D型5株、E型4株、F型3株、G型2株、H型2株,Ⅰ型～O型各有1株.基因型集中的A型～G型,各型中的菌株来源于不同医院,呈多态性,每群均存在克隆株.结论 基因捕获元件整合子Ⅰ基因及ISCR1广泛分布在大连地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中,并与细菌的多重耐药、泛耐药显著相关,特别是ISCR1基因;大连地区整合子Ⅰ、ISCR1并未携带金属酶基因盒.PFGE结果提示本地区铜绿假单胞菌具有基因多态性,但仍存在高度同源性的流行优势基因型.
关键词： 耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌 整合子 ISCR1 PFGE -
肠杆菌科细菌中PER型超广谱β-内酰胺酶的基因检测及遗传特征分析
目的 了解临床分离的肠杆菌科细菌中产PER型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因类型,探讨其流行病学特征及可能的耐药传播机制.方法 收集2009年6月-2014年1月上海交通大学医学院附属瑞金医院临床标本分离到的对头孢他啶、头孢噻肟和头孢吡肟耐药的肠杆菌科细菌共254株,应用PCR技术扩增PER基因并测序确定基因型;对PER阳性菌株进行接合试验,同时利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行流行病学分析,并扩增PER基因上下游序列.结果 临床分离的肠杆菌科细菌中共检出14株携带PER基因,包括PER-1和PER-4两种类型.仅2株奇异变形杆菌接合成功,接合质粒属于IncA/C型质粒.9株PER阳性奇异变形杆菌PFGE共分为7个型别.常见的肠杆菌科细菌基因环境为ISCR1-blaPER-gst-abct,2株产PER-1 型ESBLs的奇异变形杆菌基因环境为ISPa12-blaPER-gst-like-ISPa13.结论 PER基因可存在于多种临床分离的肠杆菌科细菌中.PER基因上游环境多以ISCR1结构为主,该结构在国内PER基因的流行扩散中可能扮演着重要的角色.
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基因捕获元件int1和ISCR1在临床菌株中的分布及与细菌耐药性的关系研究
目的 研究临床多种细菌中的Ⅰ型整合酶编码基因int1和ISCR1的分布情况,探究其与细菌多药耐药表型的关系.方法 收集2011-2012年河北省某医院临床菌株,应用VITEK(R)2 COMPACT金自动微生物生化鉴定系统和16SrDNA序列分析进行种属鉴定,利用PCR方法进行int1基因和ISCR1筛查；两种可移动元件的携带情况和菌株的多药耐药表型之间的关系采用卡方检验进行统计计算.结果 共收集临床菌株372株,包括325株革兰氏阴性菌和47株革兰氏阳性菌；int1基因和ISCR1在22种(属)175株和18种(属)90株革兰氏阴性细菌中检出,同时在17种(属)71株革兰氏阴性细菌中检出,革兰氏阳性细菌int1基因和ISCR1检测均为阴性；通过对数据分层对比,统计分析发现,在int1基因不存在时,ISCR1的存在与否与菌株是否为多药耐药的关系明显,差异有统计学意义(P＜0.01),其存在亦能介导更广泛种类药物耐受,差异亦有统计学意义(P＜0.01).在int1基因存在时,ISCR1的存在能介导更广泛种类药物耐受,差异有统计学意义(P=0.02)；在ISCR1不存在时,int1基因的存在与否与菌株是否多药耐药的关系明显,差异有统计学意义(P＜0.01),其存在亦能介导更广泛种类药物耐受,差异亦具有统计学意义(P＜0.01).而在ISCR1存在的情况下,上述两种关系不明显.结论 基因捕获元件int1基因及ISCR1在革兰氏阴性临床菌株中分布广泛,并与细菌的多重耐药、泛耐药明显相关,特别是ISCR1；应加强可移动元件int1基因或ISCR1流行状况的监测,为其在耐药基因捕获中的作用机制研究和控制多药耐药细菌在临床散播提供可靠的基础数据.
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多重耐药铜绿假单胞菌整合子和ISCR1结构及基因分型研究
目的:研究临床分离的铜绿假单胞菌的整合子I和ISCR1的分布情况,并进行ERIC-PCR基因分型.方法:分离临床80株铜绿假单胞菌,ERIC-PCR进行基因分型.PCR检测整合酶Ⅰ、整合子Ⅰ、ISCR1以及ISCR1携带的耐药基因.结果:铜绿假单胞茵分为51个基因型,26株整合酶阳性,21株整合子Ⅰ阳性,2株ISCR1和ISCR1携带的耐药基因阳性.结论:铜绿假单胞茵的整合子Ⅰ和ISCRI携带率较低,临床可用ERIC-PCR进行铜绿假单胞菌的基因分型.
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产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药基因研究及其基因分型
目的：对临床分离产ESBLs肺炎克雷伯菌相关基因进行研究，并对其进行基因分型。方法：临床分离295株肺炎克雷伯菌，ESBLs药敏试验采用K-B法。PCR法检测I类整合酶、I类整合子基因盒、ISCR1、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M。I类整合子PCR扩增阳性产物送去测序，测序结果在GenBank中用blastn进行核酸序列同源性搜索。菌株基因分型采用ERIC-PCR法。结果：产ESBLs肺炎克雷伯菌阳性率为21.3%。在63株产ESBLs肺炎克雷伯菌中，分为35个基因型，I类整合酶、ISCR1、blaTEM、blaSHV、blaCTX-M的阳性率分别为46.0%、12.7%、55.6%、0、81.0%，27个I类整合子含有7种类型基因盒。结论：在产ESBLs肺炎克雷伯菌中，I类整合子携带率较高，ESBLs基因型以blaTEM和blaCTX-M为主。我院产ESBLs肺炎克雷伯菌存在某种流行株。
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鲍曼不动杆菌临床株中可移动遗传元件ISCR1的作用
目的 了解鲍曼不动杆菌临床株中新型可移动遗传元件ISCR1的携带情况及其下游基因环境,探讨鲍曼不动杆菌耐药播散机理.方法 收集多重耐药鲍曼不动杆菌临床株34株和敏感株21株,PCR扩增ISCR1基因及其下游的基因环境,扩增产物测序分析.结果 34株多重耐药鲍曼不动杆菌临床株中,携带ISCR1基因14株,其中11株ISCR1阳性多重耐药株,在ISCR1基因下游携带氨基糖甙类耐药基因armA基因；21株敏感株中,ISCR1基因扩增结果均为阴性.结论 ISCR1元件可能参与了armA耐药基因的水平播散.
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洋葱伯克霍尔德菌整合子Ⅰ和ISCR1分布及ERIC-PCR分型
目的 研究临床分离洋葱伯克霍尔德菌的整合子Ⅰ和ISCR1的分布情况,并对其进行基因分型.方法 分离临床70株洋葱伯克霍尔德菌,用WHONET5.4分析菌株药敏情况,ERIC-PCR进行基因分型.PCR检测整合酶Ⅰ、整合子Ⅰ、ISCR1以及ISCR1携带的耐药基因.结果 洋葱伯克霍尔德菌对氨曲南、庆大霉素、阿米卡星高度耐药,对复方新诺明、米诺环素、哌拉西林/他唑巴坦、美洛培南的敏感率较高.70株洋葱伯克霍尔德菌分为15个基因型,14株整合酶阳性,9株整合子Ⅰ阳性,4株ISCR1阳性,2株ISCR1和ISCR1携带的耐药基因阳性.结论 整合子Ⅰ和ISCR1在洋葱伯克霍尔德菌的携带率低,ERIC-PCR可用于临床分离洋葱伯克霍尔德菌的基因分型.
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多重耐药鲍曼不动杆菌整合子和ISCR1结构及基因分型研究
目的 探讨临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌整合子I和ISCR1的结构,并进行基因分型.方法 分离临床80株多重耐药鲍曼不动杆菌,PCR检测整合酶I、整合子I、ISCR1以及ISCR1携带的耐药基因,ERIC-PCR进行基因分型.结果 多重耐药鲍曼不动杆菌80株整合酶阳性,50株整合子I阳性,37株ISCR1携带的耐药基因阳性,ERIC-PCR分为22个类型.结论 整合子I和ISCR1在鲍曼不动杆菌介导多重耐药方面有重要作用,ERIC-PCR是研究临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌基因分型的有效方法之一.
关键词： 多重耐药鲍曼不动杆菌 整合子 ISCR1 ERIC-PCR -
泛耐药鲍曼不动杆菌耐药机制和传播机制研究
目的:了解我院泛耐药鲍曼不动杆菌的耐药机制和传播机制.方法:利用PCR、RFLP分型和测序技术对临床分离的77株泛耐药鲍曼不动杆菌进行整合子Ⅰ、ISCR1和常见碳青霉烯酶基因研究,并利用ERIC-PCR研究其传播机制.结果:77株菌中58株(75％)整合酶Ⅰ阳性,50株(65％)整合子Ⅰ阳性；48株(62％) ISCR1阳性,45株(58％) ISCR1携带qnrA1和ampR耐药基因盒；8株检出复杂性整合子Ⅰ;1株检出NDM-1基因,62株(80％)检出OXA-23-1ike基因,4株(5％)检出OXA-58-1ike,OXA-51-like基因100％携带,未检出KPC和OXA-24-1ike基因.ERIC-PCR聚类分析60％的相似水平上被聚为16个类群.结论:整合子Ⅰ、ISCR1和OXA类酶在鲍曼不动杆菌介导多重耐药方面有重要作用,ERIC-PCR是进行泛耐药鲍曼不动杆菌同源性分析的有效方法.
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临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与ISCR1研究
目的 了解临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单保菌Ⅰ类整合子与插入序列共同区1(ISCR1)的分布情况.方法 2010年1月至2013年12月共收集我院126株多重耐药鲍曼不动杆菌和89株多重耐药铜绿假单胞菌,采用PCR法扩增Ⅰ类整合酶、Ⅰ类整合子基因盒、ISCR1、ISCR1可变区.Ⅰ类整合基因盒和ISCR1可变区的PCR产物分别用HinfⅠ、RasⅠ进行酶切,相同类型酶切图谱的PCR产物随机挑取一例进行测序,测序结果在GenBank中用BlastN进行核酸序列同源性搜索.结果 在多重耐药鲍曼不动杆菌中,检出79例Ⅰ类整合酶,67例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有6种类型;59例ISCR1阳性,其中9例ISCR1可变区阳性.在89株多重耐药铜绿中,检出41例Ⅰ类整合酶,36例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有10种类型;9例ISCR1阳性,其中4例ISCR1可变区阳性.有8株鲍曼不动杆菌和2株铜绿假单胞菌同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1可变区结构.结论 在多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,Ⅰ类整合子和ISCR1分布较广.
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安徽地区嗜麦芽寡养单胞菌中整合子及SCR1流行情况研究
目的 了解安徽省2010-2013年嗜麦芽寡养单胞菌(SMA)临床分离株的整合子和ISCR1及其携带的耐药基因情况,并初步探究其与耐药性的关系.方法 应用PCR扩增qacE△1-sull基因、intl、intⅡ、intⅢ、Ⅰ类整合子可变区、ISCR1基因及ISCR1可变区耐药基因;对临床分离株采用琼脂倍比稀释法测定药物的低抑菌浓度.结果 115株嗜麦芽寡养单胞菌中IntⅠ的检出率为64.3％,ISCR1的检出率为4.3％,未检测到Ⅱ类、Ⅲ类整合子.Ⅰ类整合子可变区检出aacA 4-catB8-aadA1和aac(6 ')-Ⅱ-blaCARB-8两类基因盒,检出率分别为6.8％和2.7％,ISCR1可变区未检出耐药基因.[类整合子的检出在多重耐药株与非多重耐药株中的差异有统计学意义(P＜0.01).sull日性组和IntⅠ阳性组中甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐药程度均要明显高于两者均阴性的一组.结论 Ⅰ类整合子及sull基因的存在可以加重SMA对甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的耐药性.本地区Ⅰ类整合子与ISCR1的检出可能有助于SMA的多重耐药性及耐药基因的传播.
