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不同来源STECO157:H7生物学特性研究
目的 探讨浙江省产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7菌株PFGE分型及携带毒力基因以及耐药情况.方法 菌株生化、血清鉴定按API 20E鉴定系统;大肠杆菌O157:H7诊断血清凝集试验;采用聚合酶链反应(PCR)法检测O、H抗原及毒力基因SLT1、SLT2、Hly、eaeA;STEC O157:H7分型用脉冲场凝胶电泳(pulse field gel electrophoresis,PFGE)方法进行;14种抗生素进行药敏试验采用K-B法.结果 5株可疑菌株经生化和血清鉴定符合O157:H7特性;毒力基因检测所有分离株SLT2、Hly、eaeA三种毒力基因均阳性而SLT1均阴性;脉冲场凝胶电泳分型结果显示,有2株菌PFGE电泳条带完全相同,其余3株菌电泳条带不同,5株菌共分为4个带型;经耐药性分析,菌株对头孢噻吩、头孢噻肟、庆大霉素、环丙沙星100%敏感;对复方新诺明、氨苄西林100%耐药.结论 STEC O157:H7菌株在浙江省一些地区存在,并且携带SLT2毒力基因,PFGE型别较多,同时也有人间感染病例的出现,提示应加强O157:H7监测力度,防止该菌在人间的感染和流行.
关键词： STECO157:H7 毒力基因 PFGE -
2007-2011年江苏省南京市细菌性痢疾病原学监测结果分析
目的 对江苏省南京市2007-2011年细菌性痢疾的血清群(型)分布、耐药谱、毒力基因携带情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,为江苏省南京市细菌性痢疾的防控提供依据.方法 对从江苏省南京市2007-2011年各医院腹泻病患者中分离的75株志贺菌进行血清群(型)、耐药性和毒力基因检测,并进行PFGE分子分型.结果 75株志贺菌包括宋内志贺菌54株(72.0％),福氏志贺菌21株(28.0％),除2010年福氏X型为优势血清型外,其余年份宋内志贺菌为优势血清群；75株菌普遍对氨苄西林、四环素和磺胺甲恶唑耐药,耐药率在61.1％～95.2％之间；三重及以上耐药菌株占所有测试菌株的88.0％；毒力基因ipaH、Sen、setl、ial阳性率分别为100％、46.7％、24.0％、48.0％；福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型(66.7％),宋内志贺菌优势基因模式为Ⅶ型(61.1％)和Ⅳ型(25.9％)；宋内志贺菌分为20个PFGE基因型,其中以S7、S8、S1O三个带型为主,占宋内志贺菌的53.7％；相似度＞95％,可能来自于同一克隆系；福氏志贺菌分为17种带型,各带型较散在分布.结论 江苏省南京市志贺菌流行菌群不断变迁,宋内志贺菌有取代福氏志贺菌成为流行菌群的趋势；多重耐药现象严重；福氏志贺菌优势毒力基因模式为Ⅰ型、宋内志贺菌为Ⅶ型和Ⅳ型；PFGE型别呈现多元化流行特点.
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三种核酸染料应用于细菌脉冲场凝胶电泳染色的比较研究
目的 比较Gelred、GoldView及溴化乙锭(EB)三种染料在病原菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)中的染色效果,选择更为安全和灵敏的核酸染料,并形成标准化操作应用于病原菌分子分型监测网络PulseNet China.方法 选择霍乱弧菌作为评价菌株,按照病原菌分子分型监测网络(PulseNet)的PFGE标准操作方案进行电泳,采用Gelred、GoldView及EB三种染料分别染色,分析比较实验结果.结果 Gelred染色的胶块清晰度好,EB次之,均高于GoldView;Gelred染色的图谱,相邻条带边缘清晰,更容易辨别区分.EB和GoldView染色后必须脱色,使用Gelred 染色脱色时间较短,亦可以不经过脱色步骤,但脱色后的电泳条带边缘更加锐利.结论 Gelred是一种更安全、更灵敏的核酸染料,可以取代EB应用于PFGE.制定了使用Gelred进行PFGE染胶的标准方案,用于PulseNet China网络的PFGE分析.
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一起鼠伤寒沙门氏菌食物中毒的流行病学调查
目的 对一起食物中毒事件开展现场流行病学调查,查明导致此次事件的致病因子、传播途径和感染来源,提出针对性预防控制措施建议.方法 采用流行病学方法调查事件总体情况、临床特征及三间分布,分析可疑食品或可疑餐次与发病的关联性,开展溯源调查.结果 患者临床症状是腹泻、腹痛、发热.潜伏期中位数为27.5 h.66名病例早的唯一共同就餐时间为2015年5月4日中餐.实验室检测结果显示10名病人便标本、4名食堂从业人员便标本及2件外环境涂抹标本中检出鼠伤寒沙门氏菌,经PFGE图谱同源性比对分析,带型一致.结论 该事件为一起由某公司5月4日提供的中餐导致的鼠伤寒沙门氏菌食物中毒.
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肠炎沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究
目的为研究肠炎沙门氏菌菌株间的关系,特建立了分子流行病学研究方法-脉冲场凝胶电泳分型方法,并对从食品中分离的肠炎沙门氏菌进行了分型研究.方法1991～2001年间,从河南、黑龙江等省份采集食品样品,分离出肠炎沙门氏菌,挑取单个菌落增菌,用溶菌酶、蛋白酶K和TE缓冲液依次提取菌体DNA后,用限制性内切酶XbaΙ消化胶块,然后在CHEFMapper仪上进行脉冲场凝胶电泳,电泳条件:0.5×TBE缓冲液、14℃、1%琼脂糖、脉冲时间5s～45s、26h、6V/cm.应用λ噬菌体DNA作为脉冲场凝胶分子量标准.结果从鸡肉、牛肉、熟肉及蔬菜中分离出30株肠炎沙门氏菌,其中18株来自河南省,绝大多数菌株(22株)分离于2001年.对所得菌株进行脉冲场凝胶电泳后,结果显示30株肠炎沙门氏菌分为A、B两个型,两型图谱之间有8个条带的差异.A型菌株有19株,占全部菌株的63.3%,B型菌株有11株,占36.7%.A型之内又可以分出2个亚型,其中A1型占78.9%,A2亚型与A1亚型相比的差别在于,A2型在50kb处有一条带缺失.在菌株分型与采集时间和采集地点之间没有相关性,但所有从鸡肉中分离到的菌株均为A1型,提示了某种有待进一步研究的流行病学趋势.结论在研究肠炎沙门氏菌不同菌株之间的分子流行病学关系方面,脉冲场凝胶电泳是一种有效的方法.
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福建省非典型肠致病性大肠埃希菌的分子特征研究
目的 研究福建省非典型肠致病性大肠埃希菌(aEPEC)菌株的毒力基因特征和菌株间的遗传相似度;结合菌株的背景资料分析不同的分子特征对aEPEC流行的影响.方法 运用PCR技术进行系列的相关毒力基因扩增;同时运用脉冲场凝胶电泳分子分型技术,对福建省2010-2012年分离的aEPEC菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.结果 分离30株实验菌株毒力基因的检测呈阳性的分别为:b112153.3％ (16),yiaA 36.7％ (11),set/ent、nleB、nleE均为30％(9),lpfAR141 23.3％ (7),efa/lifA20％(6),ehxA 3.33％ (1);其余毒力基因均未检出;93.3％ (28)菌株不同程度地携带有相关的毒力因子.29株菌按照100％的相似度分为15个PFGE型别(P1-P15);其中存在4组不同的PFGE簇(Ⅰ-Ⅳ),相同PFGE簇的病例在发病的时间和地区上有聚集性,同时相同簇内菌株的毒力基因谱也表现相同.结论 b1121、yiaA和EHEC毒力岛OI-122相关基因(efa1/lifA,nleB,nleE,set/ent)在福建省aEPEC菌株中携带率较高.非典型肠致病性大肠埃希菌的毒力谱表现为多样性,基因组也呈现遗传多态性;同时PFGE分析发现福建省存在由aEPEC新发病原菌引起的聚集性病例.
关键词： 非典型肠致病性大肠埃希菌 毒力基因 PFGE -
福建省龙岩市军团菌病监测结果分析
目的 了解龙岩市军团菌病流行概况.方法 对龙岩市公共场所水体进行军团菌分离、鉴定、分型;通过ELISA方法检测部分健康人群、高暴露人群及肺炎住院病例血清Legionella pneumophila (Lp) 1-7抗体水平,以SPSS 11.0软件进行x2分析.结果 龙岩市公共场所集中空调系统军团菌污染率达72.73％(8/11),均为Lp对冷却塔水的污染,Lp1型为绝对优势菌型(10/11),经AscI酶切后电泳,得到8个不同PFGE型别,相似系数在35.3％～～ 100％之间.健康人群Lp1～7型抗体阳性率7.01％,高暴露人群与肺炎住院病例则高于10％;健康人群与高暴露人群均以30～40岁年龄组阳性率高(＞16％),肺炎住院病例以＞50岁组阳性率较高(＞12％).三类人群阳性率均无性别差异.结论 龙岩市中央空调系统军团菌污染率较高,以Lp1型为主,呈高度基因多样性;人群Lp感染率较高.有必要加强军团菌病监测研究并促进有效防治.
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马鞍山市金黄色葡萄球菌分子特征与耐药性分析
目的 了解马鞍山市金黄色葡萄球菌的分子特征和耐药性,为追踪传染源和临床用药提供依据.方法 收集马鞍山市食物中毒来源、食品和腹泻患者等样本分离的金黄色葡萄球菌,用miniVIDAS全自动荧光免疫分析仪检测菌株肠毒素,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对菌株做分子分型,采用琼脂稀释法对菌株做药敏试验.结果 本研究共收集到59株金黄色葡萄球菌中,肠毒素阳性有40株(67.8%);PFGE分型结果,除4株不能分型外,55株菌株分为33个型别,两起食物中毒的11株菌分别属于同一型别;44散发菌株产生33个带型,表现为多样性.但某些分离自不同时间的菌株可有相同的带型;或者在同一时间、同一地点分离的菌株,其带型可表现不同.12种抗生素药敏试验结果表明,菌株对去甲万古霉素100%敏感,对其余11种则不同程度的耐药,其中对青霉素、氨苄西林的耐药性较高.结论 应加强对食品和腹泻患者中金黄色葡萄球菌的监测分析,以预防食物中毒的发生和追踪传染来源.
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河南省出血性大肠埃希菌O157病原学特征与分子分型研究
目的 了解2012-2015年河南省出血性大肠埃希菌EHEC∶O157病原学与PFGE脉冲场凝胶电泳指纹图谱特征,为相应食源性疾病的监测、预测预警、暴发溯源调查提供基线数据. 方法 对河南省2012-2015年采自腹泻病人及动物粪便和食品标本进行mEC肉汤增菌,经免疫磁珠富集后采用ChromagarO157平板分离培养;采用系统生化鉴定大肠埃希菌,并进行EHEC∶O157单抗血清玻片凝集试验;采用多重PCR鉴定出血性大肠埃希菌O157及携带的毒力基因.根据“PulseNet China”公布的EHEC O157 PFGE分型技术标准,对阳性菌株进行PFGE指纹图谱分析. 结果 47株出血性大肠埃希菌O157中1株产志贺毒素1(STX1),2株产志贺毒素2(STX2);21株携带粘附素(eaeA)和溶血素(hlyA)毒力基因,其余23株为不产毒型;经XbaI酶切后进行脉冲场凝胶电泳,共分为40种不同带型,相似度区间为64.20％-100％,各带型包含菌株数为1～2株不等,人源与食品动物源菌株带型未发现聚集关联性. 结论 河南省检出的EHEC∶O157中既有携带不同毒力基因的菌株,也有非产毒型菌株,其PFGE指纹图谱呈现高度分散性与多态性,体现了食源性细菌病原体所具有的多样性与复杂性.
关键词： 出血性大肠埃希菌O157 多重PCR 毒力基因 PFGE -
2013-2015年河南省甲型副伤寒沙门菌分子分型与耐药研究
目的 了解河南省人群感染甲型副伤寒沙门菌的耐药状况与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子型别特征,为甲型副伤寒的疾病监测及其防治策略提供基线数据. 方法 对2013-2015年河南省监测哨点医院分离的67株甲型副伤寒沙门菌采用K-B纸片法检测对13种抗生素敏感性,并进行PFGE分子分型分析. 结果 67株甲型副伤寒沙门菌对8类13种抗生素均有不同程度的耐药,有63株为多重耐药菌株(占94.0％),其中耐2～3种9株(占13.4％),耐5～8种42株(占62.7％),耐9～10种8株(占11.9％),耐11～12种4株(占5.9％).菌株对头孢类、喹诺酮类等5类抗生素耐药率总体呈逐年上升趋势.经XbaⅠ酶切与PFGE电泳分析,67株甲型副伤寒沙门菌共获得10种带型,每种带型包含菌株数1～48株不等,相似度94.31％～100％. 结论 河南省甲型副伤寒沙门菌分离株耐药状况严重,PFGE带型呈多样性且具有一定的优势带型特点,同一PFGE菌株的耐药谱较为接近.
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合并HIV感染肺结核患者Mtb的MLVA与PFGE法基因分型对比研究
目的 对比PFGE和MLVA两种不同分型方法用于大理地区合并HIV感染肺结核患者Mtb临床分离株基因分型的优劣. 方法 选取大理地区27株合并HIV感染肺结核患者Mtb临床分离株,采用PFGE和MLVA两种方法进行基因分型,应用BioNumerics(6.6)软件进行聚类分析. 结果 PFGE法将27株Mtb分为5个基因群,其中主要优势基因群为A群(15株)包括H37Rv,D=0.698;MLVA法将27株Mtb分为4个基因群,其中主要优势基因群为Ⅰ群(8株,包括H37Rv减毒株)和Ⅱ群(9株).D=0.999;对比分析显示MLVA法分辨力高于PFGE法. 结论 MLVA法与PFGE法相比更适合于大理地区合并HIV感染肺结核患者Mtb的基因分型.
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河南省德尔卑沙门菌和阿贡纳沙门菌耐药与分子分型研究
目的 分析2009-2012年河南省德尔卑沙门菌和阿贡纳沙门菌临床分离株的耐药状况与脉冲场凝胶电泳(PFGE)带型,为以德尔卑沙门菌、阿贡纳沙门菌等非伤寒沙门菌为代表的食源性疾病暴发预警、调查、溯源及公共卫生意义上的抗生素使用策略提供基线与参考数据. 方法 根据国际PulseNet细菌性传染病分子分型监测网络公布的非伤寒沙门菌PFGE分型技术与美国临床与实验室标准协会(CLSI)沙门菌K-B法药敏测试方案,对2009-2012年分离自河南省5个哨点医院的德尔卑沙门菌与阿贡纳沙门菌进行13种抗生素的药敏测试及PFGE脉冲场凝胶电泳分子分型分析. 结果 76株德尔卑沙门菌与84株阿贡纳沙门菌对8类13种抗生素均有不同程度的耐药,耐3种以上抗生素的有141株(88.13％).其中耐3～5种抗生素38株(占23.75％),耐6～8种抗生素66株(占41.25％),耐9～10种抗生素22株(占13.75％),耐11～12种抗生素15株(占9.38％).84株阿贡纳沙门菌经Xba Ⅰ酶切与脉冲场凝胶电泳后获得36种带型,每种带型包含1～9个菌株,相似度50.77％～100％,以AGN27与AGN33为主要优势带型.76株德尔卑沙门菌经XbaⅠ酶切与脉冲场凝胶电泳后获得41种带型,每种带型包含菌株数1～12个菌株,相似度43.25％～100％,以DER17与DER34为主要优势带型. 结论 河南省临床分离株德尔卑沙门菌和阿贡纳沙门菌耐药状况较严重,PFGE带型呈现出多样性的同时又具有较显著的优势带型特点,部分带型与其对应的耐药谱具有一定的关联性及相同的聚集性.
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耐甲氧西林金黄葡萄球菌的分子分型研究
耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)是临床重要的致病菌之一,对除万古霉素外的几乎所有临床常用抗生素耐药,为临床治疗的难点.目前,葡萄球菌染色体mec盒分型(SCCmec)、脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)、多位点测序分型(MLST)是常用的分型方法.
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医院感染高产Amp Cβ-内酰胺酶阴沟肠杆菌的分子流行病学研究
目的了解医院感染中高产Amp Cβ-内酰胺酶阴沟肠杆菌的流行情况.方法通过药敏实验和等电点分析筛选出高产Amp Cβ-内酰胺酶的阴沟肠杆菌,然后通过诱导实验分析了其Amp Cβ-内酰胺酶表型,后,通过PFGE分型技术考察了其克隆构成情况.结果在35株阴沟肠杆菌中,28株(80%)高产AmpCβ-内酰胺酶,其中18株(65%)属完全去抑制型,10株(35%)属部分去抑制型;28株高产Amp Cβ-内酰胺酶阴沟肠杆菌的染色体DNA指纹图呈17种克隆的多克隆构成模式.结论阴沟肠杆菌引起的医院感染中流行高产Amp Cβ-内酰胺酶的菌株,完全去抑制型为其主要表型;其内源性感染方式使阴沟肠杆菌医院感染株呈多克隆构成模式.
关键词： 阴沟肠杆菌 分子流行病学 Amp Cβ-内酰胺酶 PFGE -
烧伤病房铜绿假单胞菌的耐药检测及脉冲场凝胶电泳分析
目的了解烧伤病房铜绿假单胞菌的耐药性,用脉冲场凝胶电泳对铜绿假单胞菌进行分子流行病学的调查. 方法采用琼脂纸片扩散法对9种抗菌药物作敏感试验,其中20株进行脉冲场凝胶分析. 结果 20株PAE对9种抗菌药物显示很高的耐药率,多重耐药率为30%;20株菌经脉冲场凝胶分析分别有3组菌株具有同源性. 结论铜绿假单胞菌对常用抗菌药物耐药率高,多重耐药情况严重,脉冲场凝胶电泳是研究铜绿假单胞菌分子流行病学较好的基因分型方法.
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伤寒沙门菌PFGE基因分型研究
目的 了解1979-2005年间河南省分离的伤寒沙门菌菌株的脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因型,探讨河南省伤寒沙门菌的分布、流行及变异情况.方法 伤寒沙门菌单个菌落增菌后定量,制备琼脂糖菌体包埋胶块,蛋白酶K等消化处理,限制性内切酶XbI酶切,制备琼脂糖凝胶,脉冲场凝胶电泳获取菌株指纹图谱,图谱条带进行分子量标化,用统计软件进行聚类分析.结果 以80%相似度为标准,235株伤寒沙门菌被分成69个不同的PFGE基因型.各地区间和不同年份间基因型既有交叉,又存在差异,2005年有新的基因型出现.结论 PFGE基因分型技术在确定菌株之间的分子流行病学关系方面是一种有效、稳定的方法.河南省伤寒沙门菌PFGE基因型别呈现多样性,地区间存在差异.
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2005～2011年厦门市食物中毒副溶血性弧菌的病原特征分析
目的分 析2005～2011年25起食物中毒标本中分离的108株副溶血性弧菌的血清型分布、tdh基因携带情况和PFGE分型特征.方法 血清学实验检测菌株的血清型别;实时荧光PCR法检测耐热直接溶血素(tdh)基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和BioNumerics软件对菌株进行分子分型分析.结果 108株菌分为7个血清群、15个血清型,主要血清型是03∶K6;所有菌株分成65个PFGE types (PT),相似度为34.1％～100.0％;92株菌携带tdh基因,阳性率为85.2％.结论 引起厦门市食物中毒的副溶血性弧菌血清型分布呈多样性,优势血清型为03∶K6,且大部分菌株具有tdh基因;同一克隆的菌株血清型可相同也可不同.
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REP、RAPD和PFGE方法在志贺菌分子分型中的应用评价
目的：探讨REP、RAPD和PFGE方法在志贺菌分子分型中的应用效果。方法以细菌基因组重复序列（REP）、随机扩增多态性分析（RAPD）、脉冲场凝胶电泳（PFGE），分别对60株志贺菌分子进行分型，并对3种方法加以评估。结果 REP、RAPD和PFGE的分子分型结果显示，采用REP方法，有A、B两型；采用RAPD方法，有A、B、C、D、E、F六型；采用PFGE方法，共有3个亚型，其中，51株可分为A、B、C、D、E五型，其余6株宋内志贺菌为1单独型。结论在3种分子分型方法中，REP对高菌株分辨率差，在区域内菌株分型方面，不具优势；RAPD分辨率高、分型精准，但需花费较长时间；PFGE明显优于前二者，分型效果更为细致，三者之间的差异性显著，但PFGE操作更简便，用时更少，价格更低，而且对于细菌性痢疾暴发事件，有较好的病学调查效果。
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2014-2015年淮安市腹泻患者致泻大肠埃希氏菌病原学特征分析
目的 了解淮安市腹泻患者中致泻大肠埃希菌感染情况、毒力基因、耐药性以及分子分型,为致泻大肠埃希氏菌防治提供依据.方法 对2014-2015年淮安市各哨点医院和社区医院腹泻门诊患者的粪便标本运用多重PCR筛查和生化试验检测致泻大肠埃希菌,检测出菌株的进一步做药敏试验和分子分型.结果 在549份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希菌39株,检出率为7.10％.其中肠聚集性大肠埃希菌(EAEC)18株(46.15％)检出高,其余依次为肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)8株(20.51％)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)7株(17.95％)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)5株(12.82％)和侵袭性大肠埃希菌(EIEC)1株(2.56％).药敏结果显示,39株致泻大肠埃希菌中1种以上耐药菌27株,占41.25％;高耐药达到9耐,其中四环 素和萘啶酸耐药率,分别为53.84％、51.28％.脉冲场凝胶电泳(PFGE)结果显示,39株致病性大肠埃希菌有不同的带型,且带型有密切的亲缘关系.EAEC单独聚类,除zx14352和zx14395外,其他带型的相似度都超过50％.结论 淮安市2014-2015年致泻大肠埃希菌感染主要以EAEC为主.菌株耐药性强,多重耐药谱广.菌株的基因型呈多态性分布,有流行相关性.
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应用PFGE技术对乌龟引起人鼠伤寒沙门菌感染的溯源调查
目的 应用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术对乌龟引起幼儿鼠伤寒沙门菌感染的溯源调查.方法 对一例多次检测鼠伤寒沙门菌阳性的病例采集粪便标本以及接触过的乌龟外表涂抹样本进行脉冲场凝胶电泳、血清分型、耐药性分析.结果 4株菌株的XbaⅠ酶切图谱与BlnⅠ酶切图谱100％一致,表明乌龟身上携带的鼠伤寒沙门菌是患儿周某感染的源头.结论 龟源性沙门氏菌感染应引起重视,应用PFGE技术开展食源性疾病溯源调查值得推广.
