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多重PCR对金黄色葡萄球菌杀白细胞素基因的检测
目的 应用多重PCR检测含Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)基因的金黄色葡萄球菌.方法 收集我院2005年1月至2006年1月从临床多种标本中分离的金黄色葡萄球菌,用多重PCR同时检测葡萄球菌16S rRNA基因、mecA基因和lukS/F-PV基因.多重PCR检测MRSA的SCCmec基因型及亚型.结果 195株金黄色葡萄球菌经多重PCR检测,121株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),74株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),共检测到26株金黄色葡萄球菌lukS/F-PV基因阳性,阳性率为13.3%(26/195).其中19株为MRSA,阳性率为15.7%(19/121);7株为MSSA,阳性率为12.2%(7/74).19株lukS/F-PV基因阳性的MRSA的SCCmec基因型分别为SCCmecⅢ型10株、SCCmecⅢA型4株、SCCmecⅣ型4株及SCCmecⅠ型1株.26株lukS/F-PV基因阳性的分离株有11株分离自脓液或创面分泌物,10株分离自痰标本,3株分离自血液标本,2株分离自尿液.结论 在温州地区分离的MRSA和MSSA中都能检测到Panton-Valentine杀白细胞素基因,含Panton-Valentine杀白细胞素基因MRSA的SCCmec基因型主要为SCCmecⅢ,含PVL基因的金黄色葡萄球菌主要引起化脓性感染和肺部感染.
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金黄色葡萄球菌毒力基因检测及分子分型研究
目的：研究湖北省黄州区人民医院于2011—2013年分离的488株金黄色葡萄球菌的分子生物学特征及毒力基因分布情况。方法采用琼脂稀释法测定苯唑西林和头孢西丁对金黄色葡萄球菌的小抑菌浓度（ minimum inhibitory concentration ，MIC）， PCR方法进行SCCmec分型（ staphy-lococcal cassette chromosome mec）和多位点序列分析（multilocus-sequence typing， MLST），多重PCR方法检测31个常见的毒力基因。结果488株金黄色葡萄球菌中共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）227株，检出率为46．5％，227株MRSA 中 SCCmecⅢ型居多，占81．5％；其次为Ⅳ型，占10．1％。 MRSA菌株中，主要的克隆型为CC（clonal complex）8，占81．1％，其次为CC59和CC5，分别占4．8％和3．1％，261株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）中，主要克隆型为CC1，占34．1％，其次为CC398、CC121和CC59，分别占21．8％、14．9％和13．0％。109株MSSA（48．2％）同时携带≥15个毒力基因，明显高于MRSA菌株（28．2％，P＝0．002），肠毒素基因（sed、sej和ser）的分布与CC8和CC5密切相关，表皮剥脱素基因（ eta， etb）和lukED基因仅在CC1中检测到，与其他CCs相比，CC1和CC59克隆中pvl基因检出率更高（P＜0．05）。结论本地区MRSA的流行率为46．5％，与全国平均水平基本一致，MRSA菌株主要流行克隆为ST239-MRSA-SCCmecⅢ型，占79．3％，医疗卫生部门应采取有效措施控制MRSA的传播。 MSSA菌株毒力基因检出率明显高于MRSA，并且不同的CCs克隆呈现不同的毒力基因谱，表明毒力基因的携带与遗传背景有关。
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中南地区金黄色葡萄球菌流行病学及耐药性研究
目的 研究中南地区2011年6月至2012年5月金黄色葡萄球菌的耐药情况及基因型分布.方法 采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对临床常用抗菌药物的小抑菌浓度(MIC),多重PCR方法对MRSA菌株进行SCCmec(staphylococcal cassette chromosome mec)和agr(accessory gene regulator)分型.用MHA5T(含有5μg/ml替考拉宁的M-H琼脂)初筛hVISA(heterogeneous vancomycin-intermediate Stapylococcus aureus)菌株,MHAST初筛阳性的菌株用金标准PAP/AUC法(population analysis profile/area under the curve)进行确证.结果 352株金黄色葡萄球菌主要分离自血液标本(40.1％)和分泌物标本(24.7％),其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 118株,检出率为33.5％.MRSA菌株对头孢菌素类、氨基糖苷类、β-内酰胺类、氟喹诺酮类、利福平、克林霉素、红霉素和四环素等抗菌药物耐药率均显著高于MSSA,差异有统计学意义(P＜0.05).MRSA对氯霉素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑耐药率较低,分别为10.2％和7.4％,未发现万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、达托霉素及替加环素耐药的菌株.118株MRSA中共检测出hVISA 20株,检出率为16.9％.MRSA菌株主要为SCCmecⅢ型,占80.5％；其次是Ⅳ型占8.5％.agr分型主要为agr-1型,占81.4％；其次为agr-2型,占15.3％.结论 中南地区金黄色葡萄球菌耐药现象严重,MRSA基因型主要为SCCmecⅢ型和agr-1型,hVISA流行率极高,达16.9％,应引起临床高度重视,合理使用抗菌药物尤其是糖肽类药物,以避免VISA和VRSA(vancomycin-resistant Stapylococcus aureus)株的产生,致使临床治疗失败.
关键词： 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 hVISA SCCmec -
耐甲氧西林金黄葡萄球菌的分子分型研究
耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)是临床重要的致病菌之一,对除万古霉素外的几乎所有临床常用抗生素耐药,为临床治疗的难点.目前,葡萄球菌染色体mec盒分型(SCCmec)、脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)、多位点测序分型(MLST)是常用的分型方法.
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金黄色葡萄球菌SCCmec类型与侵袭力的相关性研究
目的 探讨金黄色葡萄球菌染色体mec基因盒(Staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)类型与金黄色葡萄球菌侵袭力的关系,为进一步预防和控制金黄色葡萄球菌感染提供科学依据.方法 收集甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和5种不同SCCmec类型的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株,定量侵袭人Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549)2 h后,用Triton-X 100裂解细胞,收集并涂板培养细胞内细菌,计数细菌克隆形成单位.以细胞内细菌量与原始细菌量的比值作为衡量该菌株侵袭力的指标.结果 ①MSSA和MRSA整体侵袭率比较差异无统计学意义;②Ⅱ型SCCmec金黄色葡萄球菌侵袭率高于Ⅲ型、Ⅳ型和MSSA(P值分别为0.021、0.005、0.016).结论 SCCmec类型影响但不决定金黄色葡萄球菌的侵袭力.
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84株感染相关皮肤病MRSA SCCmec分型及PVL毒素检测
目的 探讨感染相关皮肤病耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的SCCmec基因型别及PVL毒素携带情况.方法 分离于感染相关皮肤病MRSA菌株及其相关信息,对所收集到的菌株利用PCR方法进行mecA鉴定,mecA阳性者确定为实验对象,再通过多重PCR的方法进行SCCmec基因分型及PVL毒素的测定.结果 共收集95株MRSA,经鉴定mecA阳性者为84株,其中有5株携带PVL毒力基因.有69株为SCCmecⅢ型,占86.3％(69/84),有3株为SCCmec Ⅰ型,占3.6％(3/84),有8株为SCCmecⅣ型,占9.52％(8/84),其余4株为不可分型,占4.8％(4/84).未发现SCCmecⅡ、Ⅴ两型.结论 感染相关皮肤病MRSA以HA-MRSA为主,SCCmec分型大部分为Ⅲ型,CA-MRSA及HA-MRSA均可携带PVL毒素.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCC mec中ccr复合体基因型分析
目的 了解MRSA临床株葡萄球菌盒染色体,mec(SCCmec)中盒染色体重组酶(ccr)复合体型别的特点.方法 收集MRSA临床株78株,应用多重引物PCR扩增ccr复合体各型中的特异性序列,确定ccr型别.结果 78株MRSA中;1株ccr1(1.28%)、3株ccr2(3.85%)、11株ccr3(14.10%)、3株ccr5(3.85%).52株同时携带两种及以上ccr基因,其中50株携带ccr3、ccr5(64.10%)、1株携带ccr2、ccr5(1.28%)、1株携带ccr2、ccr3、ccr5(1.28%),另有8株未检测到ccr基因.结论 本研究中MRSA的ccr基因型以ccr3、ccr5复合型为主,并可能存在一些新型ccr复合体.
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耐甲氧西林葡萄球菌耐药特点及其分子生物学基础
耐甲氧西林葡萄球菌是医院内和社区感染的重要致病菌,所致感染治疗困难,因此成为各国学者关注与研究的热点.本文就耐甲氧西林葡萄球菌的耐药特点以及介导其耐药性的葡萄球菌盒式染色体mec(SCCmec)中的mec DNA、mecA、mecl、mecRI基因进行综述.
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医院环境及临床分离MRSA分子流行病学研究
目的研究医院环境及临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)分子流行病特征，为MRSA的医院感染防控提供依据。方法使用 MicroScan walkaway-40SI 全自动微生物分析仪对医院环境与临床分离MRSA进行鉴定。通过多重PCR扩增特异基因片段进行SCCmec基因分型，并应用spa分型技术进行同源性分析。结果SCCmec分型结果显示，环境分离的7株MRSA分为两型：其中SCCmecⅢ型6株；SCCmecⅣ型1株。临床分离44株 MRSA分为四型：其中SCCmecII型8株、Ⅲ型22株、Ⅳ型12株、吁型1株，未检出I型菌株，并有1株未能分型。 SCCmec Ⅲ型MRSA主要分布在新生儿监护病房(NICU)、呼吸内科、重症监护病房(ICU)和神经外科。对MRSA进行spa基因分型可见：NICU主要流行株为t437型，呼吸内科主要流行株为t030型，而ICU和神经外科流行株均为t034型，且上述科室环境与临床分离株高度同源。结论医院环境与临床分离的MRSA均以SCCmec Ⅲ型为主。 spa分型结果显示两类MRSA同源性较高，科室之间存在同型MRSA的交叉传播。 MRSA定植于医院环境是导致其医院感染流行传播的重要因素。
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 医院环境 SCCmec Spa 分子流行病学 -
分离自环境与临床患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型
目的:对分离自环境与临床患者的6株MRSA通过多种方法进行基因分型.方法:应用多重PCR方法检测该6株金葡菌是否MRSA,然后通过SCCmec typing,MLST,spaA typing,coa typing,AP-PCR,RAPD和ERIC-PCR等多种方法进行基因分型.结果:6株金葡菌均为MRSA,均携带Ⅲ型SCCmec,序列型为ST239,spaA型为GkAOMQ,coa型为HI-JKL,AP-PCR,RAPD和ERIC-PCR的指纹图谱均显示其带型一致,来源于同一克隆系,病原上具有高度同源性.结论:MRSA可能通过环境与患者之间传播而引起感染,并且如果该克隆的MRSA携带上毒素基因,则可能爆发非常严重和危险的院内感染.
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西安地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型分析
目的:了解两安地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA)的SCCmec基因型别.方法:应用聚合酶链反应(PCR)技术检测mecA基因并对其进行分型.结果:147株MRSA的mecA基因全部阳性,SCCmecⅡ型1株,SCCmecⅣa型1株,SCCmecⅢ型144株,还有1株用本实验方法未能分型.结论:SCCmecⅢ型为西安地区主要流行类型.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 SCCmec 基因分型 -
关于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的研究
[1]1961年Jevons等发现了世界上首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcusaureus,MRSA).随后各国MRSA发生率逐渐上升,至[2]80年代后期MRSA已成为全球性的病原微生物,居医院感染病原菌的首位.本文将从MRSA分类、易感人群分布、主要感染部位、流行病学特点,以及与其研究相关的青霉素结合蛋白,mecA,SCmec进行综述.
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徐州地区116株MRSA耐药性分析与分子流行病学调查
目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染现状和耐药机制,为临床合理用药提供依据.方法 收集徐州地区2012—2015年各类标本中分离的金黄色葡萄球菌(SA),用头孢西丁纸片扩散法初筛MRSA菌株,扩增mecA基因进行确认,K-B法检测MRSA对药物的敏感性,E-test法测定万古霉素的低抑菌浓度(MIC),采用多重PCR进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因分型.结果 2012—2015年210株SA共检出MRSA 116株,其中mecA基因阳性114株,MRSA总检出率为55.24%.MRSA对万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、替考拉宁和利奈唑胺的敏感率均为100%,对氯霉素和呋喃妥因的耐药率低,分别为15.52%、1.72%,MRSA对10种抗菌药物的耐药率>80%;MRSA对青霉素类、氨基糖苷类、红霉素、喹诺酮类、磺胺类、利福平、四环素、克林霉素的耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA).2012—2015年万古霉素对MRSA的MIC均为1.0μg/mL,MIC90均为1.5μg/mL,2015年发现1株MRSA的万古霉素MIC为2.0μg/mL.116株MRSA分型结果显示,SCCmecII型11株(9.48%),SCCmec III型85株(73.28%),SCCmec IV型4株(IVa和IVb型各2株,均为1.72%),未分型MRSA 16株(13.79%),未检出SCCmec I和V型.结论 MRSA呈严重的多重耐药,对万古霉素MIC无漂移,临床MRSA分离株以SCCmec III型为主,临床应采取感染控制措施,控制MRSA感染.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型方法的比较
目的:比较两种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec分型方法的分型效果,为MRSA的SCCmec分型选择合适的方法.方法:分别用2002年Oliveira的多重PCR方法和2005年Zhang的多重PCR方法对30株MRSA菌株进行SCCmec分型.结果:两种分型方法分型效率经统计学检验差异无显著性,但各有优缺点.结论:MRSA菌株SCCmec的地区性差异仅通过一种方法不能很好地鉴别,SCCmec分型研究应结合实际选择合适的分型方法.
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深圳东部地区耐甲氧西林葡萄球菌SCCmec基因型分析
目的 了解深圳东部地区耐甲氧西林葡萄球菌的流行现况,并探讨分析MRS所携带SCCmec主要的基因亚型,为MRS流行病学调查及其防控提供理论依据.方法 头孢西丁琼脂稀释法对MRS进行筛查,PBP2a进行表型确证,并用PCR法进行SCCmec分型,确认MRS所携带的SCCmec亚型.结果 1 093例葡萄球菌临床分离株中共检出127例为MRS,占11.62%,除氨苄西林、青霉素、万古霉素3种抗生素外,MRS对其他抗生素的耐药性均较甲氧西林敏感葡萄球菌高,且有66.9%的MRS表现为多重耐药.SCCmec基因分型共检出Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 3个亚型,检出例数分别为20株(15.75%)、97株(76.38%)和10株(7.87%),Ⅱ、Ⅲ型菌株对多种β-内酰胺类抗生素耐药,对利福平的耐药率均较低,对万古霉素完全敏感,其中Ⅲ型MRS菌株有76例表现为多重耐药,耐药率明显高于Ⅱ、Ⅳ型MRS菌株.结论 本地区临床分离的MRS所携带的SCCmec基因以Ⅲ型为主,且具有对抗生素多重耐药的特性.
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葡萄球菌属中交换基因的载体——SCCmec
MRSA在世界范围内广泛蔓延,是医院感染常见的病原菌之一.一种具有移动能力的新型基因元件SCCmec携带mecA基因,并通过位点特异性重组作用整合到葡萄球菌属的染色体上,使金葡菌携带上mecA基因,产生对β-内酰胺类抗生素的耐药作用.SCCmec共分为5种类型和多种亚型,不同类型的SCCmec其基因构件也不同,适应不同环境.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型SCCmec携带多个耐药基因,其多重耐药的表型适合于医院环境;Ⅳ和Ⅴ型SCCmec一般比较轻便,该类MRSA能获得较快的生长速率,适合于社区环境.在国际上,不同地区或不同环境流行的MRSA有多种类型,可以分为5大组(CC5、CC8、CC22、CC30和CC45).不同的MRSA流行株是通过获得不同类型的SCCmec,经过不同途径进化而来的.
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SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的分布
目的 探讨SCCmec相关的psm-mec在血液来源人葡萄球菌中的分布,了解人葡萄球菌的分子特征.方法 收集血培养阳性并经过全自动微生物鉴定系统准确鉴定的人葡萄球菌25株,通过PCR扩增mecA和psm-mec基因,采用多重PCR对耐甲氧西林人葡萄球菌SCCmec分型,分析psm-mec在人葡萄球菌中的分布.结果 PCR扩增结果显示,21株为耐甲氧西林人葡萄球菌,4株为甲氧西林敏感人葡萄球菌;耐甲氧西林人葡萄球菌psm-mec基因的检出率为47.6％,甲氧西林敏感人葡萄球菌中未检出psm-mec基因.多重PCR结果显示,21株mecA阳性人葡萄球菌中,3株属SCCmec类Ⅰ型,1株属SCCmecⅢA型,1株属SCCmecⅢB型,4株属SCCmec类ⅢA型,1株属SCCmec类ⅢB型,3株属SCCmec类Ⅳ,8株属SCCmec新型别.在psm-mec阳性菌株中,1株分布于SCCmecⅢA,1株分布于SCCmecⅢB,4株分布于SCCmec类ⅢA,1株分布于SCCmec类ⅢB,3株分布于SCCmec新型别.结论 SCCmec相关的psm-mec广泛存在于血液来源的耐甲氧西林人葡萄球菌中,主要分布于SCCmecⅢ型、类Ⅲ型和SCCmec新型别.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型研究
目的 检洲耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型,初步了解MRSA分子流行病学特征,从而进一步指导临床感染MRSA的治疗,更好地控制MRSA引起的毒染,并减少耐药株的出现.方法 以MRSA菌株65株为研究对象,使用多重PCR扩增技术检洲SCCmec基因分型,PCR产物进行琼脂糖电泳凝胶检测,阳性株进行基因测序,与目的 基因进行比对.结果 65株MRSA的SCCmec基因分型均为Ⅲ型.结论 我院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型,均为SCCmec-Ⅲ型,尚未发现CA-MRSA菌株.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 SCCmec -
IDI-MRSA PCR对75例手术患者进行MRSA筛选的使用评价
目的 评价IDI-MRSA PCR检测手术患者MRSA的性能和可靠性.方法 同时使用选择平板法、选择肉汤增菌法、普通PCR和IDI-MRSA PCR对75例手术住院患者进行MRSA筛选检测.并以选择肉汤增菌法为金标准,对其它三种方法进行各项指标比较.结果 选择平板法敏感度为78.6%,特异性为100%;普通PCR敏感度100%,特异性为90.2%;IDI-MRSA PCR的敏感度和特异性均为100%.结论 IDI-MRSA PCR克服了选择平板培养法的灵敏度低、普通PCR的特异性差以及金标准方法的耗时长等缺点,是筛选手术患者MRSA的较好的诊断方法.
关键词： MRSA IDI-MRSA PCR mecA SCCmec orfX
