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马西利亚分枝杆菌临床分离株的多位点序列鉴定和药物敏感性试验分析
目的 对单基因比对不能区分的马西利亚分枝杆菌(M.massiliense)临床分离株进行菌种鉴定,补充其药物敏感谱,为临床诊治提供依据.方法 2013年中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核病室共收集了47例疑似非结核分枝杆菌(NTM)感染的临床样本,用对硝基苯甲酸、噻吩-2-羧酸肼培养基和多位点PCR方法区分鉴别得到的分枝杆菌,采用基因序列比对进行NTM菌种鉴定,其中未能准确鉴定菌种的6株临床分离株进一步通过多位点序列分析(MLSA)方法进行定种鉴定.采用微孔板阿尔玛蓝测定法(MABA)对马西利亚分枝杆菌菌株开展36种药物的药物敏感性试验(简称“药敏试验“).结果 47例临床样本中鉴定出34株NTM,其中6株临床分离株综合5个管家基因(16S rRNA、hsp65、rpoB、sodA和recA)的单基因比对结果仍不能鉴定菌种,因此本研究采用MLSA方法构建邻位相加法进化树确认6株均为马西利亚分枝杆菌.药敏试验结果显示M.massiliense对阿米卡星为敏感(16 μg/ml)或中度敏感(32 μg/m1),对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、环丙沙星、乙硫异烟胺、卷曲霉素、对氨基水杨酸、氧氟沙星、卡那霉素、环丝氨酸、美罗培南、米诺环素12种药物耐药.结论 MLSA方法能有效鉴定马西利亚分枝杆菌;马西利亚分枝杆菌耐药程度较高.
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深圳市副溶血弧菌O3∶K6血清变异型病原学特征研究
目的 分析2006-2012年深圳市食物中毒中分离的副溶血弧菌O3∶K6血清变异型毒力基因和分子分型特征,及其与O3∶K6血清型的基因遗传关系.方法 对深圳市2006-2012年食物中毒病例肛拭子样本中分离的1 15株副溶血弧菌进行PFGE分型,并根据地域分布与分离时间的不同,选取了7株O3∶K6血清型为对照组,对其以及O3∶K6血清变异型分别进行tdh和trh毒力基因检测,群特异性PCR (GS-PCR)和orf8基因检测,及多位点测序分型(MLST).结果 115株副溶血弧菌中,带型相似度＞80％的菌株占58.3％(67/115),其中,O3∶K6血清型占67％ (44/67),O1∶KUT血清型占5％(4/67),O3∶K6血清变异型占28％(19/67).O3∶K6血清变异型中,O1∶ K25血清型占7％(5/67),O4∶K68血清型占10％ (7/67),O11∶K36血清型占10％ (7/67),其均携带tdh基因,不携带trh基因,GS-PCR扩增基因和orf8基因阳性占10/19,GS-PCR扩增基因和orf8基因阴性占5/19,GS-PCR扩增基因阴性、orf8基因阳性占4/19,ST-3型占17/19,ST-305型占2/19.对照组均携带tdh基因,不携带trh基因,为GS-PCR扩增基因、orf8基因阳性以及ST-3型.ST-305型与ST-3型在dtdS和PntA两个管家基因上有差异,在dtdS基因的第305个碱基处,ST-305型(147号等位基因)为T,ST-3型(4号等位基因)为C;在pntA基因的第33个碱基处,ST-305型(93号等位基因)为C,ST-3型(29号等位基因)为A.结论 04∶K68、O1∶K25、O11∶K36血清型毒力基因携带与O3∶K6血清型相似,且MLST结果一致,遗传关系接近,为O3∶K6血清变异型.
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万古霉素非敏感肠球菌的筛选和基因型分析
目的：对实验室保存的325株肠球菌进行万古霉素非敏感肠球菌筛选，并对筛选出的菌株进行耐药表型、耐药基因型、菌株同源性分析。方法采用琼脂平皿二倍稀释法筛选万古霉素非敏感肠球菌，并检测菌株对替考拉宁的敏感性；采用 PCR方法检测万古霉素非敏感肠球菌的耐药基因型；通过肠道细菌基因间重复一致序列（ERIC）PCR 技术、脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术、多位点序列分型（MLST）技术进行菌株的同源性分析。结果从325株临床分离肠球菌中共筛选出17株万古霉素非敏感肠球菌，包括1株粪肠球菌、11株屎肠球菌和5株鹑鸡肠球菌。其中1株粪肠球菌和11株屎肠球菌对万古霉素显示高水平耐药，对替考拉宁耐药或中介耐药， PCR检测结果显示 vanA型；5株鹑鸡肠球菌对万古霉素中介耐药，对替考拉宁敏感，PCR检测结果显示 vanC1型。ERIC 同源性分析显示同基因型的大多数菌株显示相似的分型；PFGE 同源性分析显示，17株临床万古霉素非敏感肠球菌分型不同，不属于单克隆流行播散；MLST 同源性分析显示，1株临床万古霉素非敏感粪肠球菌属于 ST4，11株临床万古霉素非敏感屎肠球菌共分为6个 ST型，其中4株属于 ST78，是屎肠球菌出现频率高的 ST型。结论我国万古霉素耐药菌在粪肠球菌中分离率较低，但屎肠球菌中万古霉素耐药情况较严重，并且耐药菌株携带易于传播和转移的 vanA基因。同源性分析结果显示万古霉素耐药存在同源性传播的可能性。
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耐甲氧西林金黄葡萄球菌的分子分型研究
耐甲氧西林金黄葡萄球菌(MRSA)是临床重要的致病菌之一,对除万古霉素外的几乎所有临床常用抗生素耐药,为临床治疗的难点.目前,葡萄球菌染色体mec盒分型(SCCmec)、脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)、多位点测序分型(MLST)是常用的分型方法.
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上海地区成人患者肺炎链球菌分子流行病学的分析
目的 研究上海地区成人患者分离的肺炎链球菌耐药、克隆分型、血清分型、毒力因子携带及生物膜形成等分子特征,为感染控制及治疗提供临床流行病学信息.方法 收集2011年1月至2013年12月上海华山医院37株来自门诊和住院成人患者感染分离的非重复肺炎链球菌,用K-B纸片法或E-test法测定对9种常用抗生素(青霉素、万古霉素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、头孢丙烯、头孢曲松、头孢噻肟、利奈唑胺)的敏感性;用PCR与肺炎链球菌荚膜型血清凝集法确定血清型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法分析不同血清型菌株的基因组特征;采用多位点序列分型(MLST)方法进行克隆分型;采用半定量生物膜形成试验分析其生物膜形成.PCR和凝胶电泳法检测10个主要肺炎链球菌的毒力基因(cbpA、pspA、cps2A、lytA、nanA、pavA、piaA、ply、psaA、spxB).采用Stata统计软件用Fisher's exact test进行相关性统计.结果 37株肺炎链球菌主要血清型包括19F(13.5％),23F(13.5％),14(10.8％),19A(10.8％),青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP)占64.9％.血清型19F、19A、23F与青霉素耐药有明显相关(x2 =5.89,P=0.015)并且都是多重耐药菌(MDR).克隆分型呈多态性,ST81、ST271对包括青霉素在内的抗生素耐药率较高(x2=4.57,P=0.033).生物膜阳性与血清型19A(x2=5.55,P=0.018)、克隆型ST320(x2=4.33,P=0.037)有明显相关,与青霉素耐药等没有明显相关(x2 =0.16,P=0.686).毒力基因检测中lytA、pavA、ply、psaA、spxB均阳性.结论 成人肺炎链球菌青霉素耐药率呈上升趋势.特定的血清型、流行克隆分型与抗生素耐药密切相关,为感染控制提供依据.毒力因子PspA等将是未来研制新型疫苗降低肺炎链球菌感染的新型靶标.
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耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌的基因分型研究
目的：研究耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌的耐药基因和基因分型。方法回顾性研究。收集2012年4月至2015年4月天津第一中心医院临床分离的碳青霉烯类药物不敏感的肺炎克雷伯菌52株。采用微量稀释法进行常规药敏试验,使用改良Hodge试验确证碳青霉烯酶的表型。采用多重PCR技术检测菌株携带的耐药基因,多位点序列分型( MLST)分型技术对肺炎克雷伯菌进行分型。结果药敏试验显示所有菌株具有多重耐药,对哌拉西林/舒巴坦、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、美罗培南全部耐药,耐药率100%(52/52),ST11型肺炎克雷伯菌对阿米卡星耐药率为93．5%(43/46),对环丙沙星的耐药率为97．8%(45/46),对左氧氟沙星的耐药率为97．8%(45/46),对复方磺胺甲唑的耐药率为17．4%(8/46),对替加环素的耐药率为0。 ST101型肺炎克雷伯菌对阿米卡星耐药率为3/3,对环丙沙星的耐药率为2/3,对左氧氟沙星的耐药率为3/3,对复方磺胺甲唑的耐药率为3/3,对替加环素的耐药率为0。 ST709型肺炎克雷伯菌对阿米卡星耐药率为1/1,对环丙沙星的耐药率为1/1,对左氧氟沙星的耐药率为1/1,对复方磺胺甲唑的耐药率为1/1,对替加环素的耐药率为0。 ST1393型肺炎克雷伯菌对阿米卡星耐药率为1/1,对环丙沙星的耐药率为1/1,对左氧氟沙星的耐药率为1/1,对复方磺胺甲唑的耐药率为1/1,对替加环素的耐药率为0。 ST2068型肺炎克雷伯菌对阿米卡星耐药率为1/1,对环丙沙星的耐药率为1/1,对左氧氟沙星的耐药率为1/1,对复方磺胺甲唑的耐药率为1/1,对替加环素的耐药率为0。 PCR检出46株产KPC-2型耐药基因菌株,5株OXA-48型菌株,1株DNM-1型菌株。 MLST分型ST11型是主要型别,共46株,均为碳青霉烯酶KPC-2型,产NDM-1型碳青霉烯酶的菌株MLST分型为ST2068型,产OXA-48型的5株菌MLST分型中3株为ST101型,1株为ST709型,1株为ST1393型。结论本院耐碳青霉烯类抗菌药物的肺炎克雷伯菌的耐药基因为KPC-2型,另外有散在OXA-48和NDM-1型；MLST分型主要为ST11,为我院感染治疗及防控病原菌的传播提供了切实有效的依据和参考。
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围生期孕产妇感染或定植的B族链球菌耐药情况、血清型、毒力基因及基因型分析
目的 探讨围生期孕产妇感染或定植的B族链球菌(GBS)的耐药情况、血清型、毒力基因及基因型特点.方法 选择2008年1月至2015年10月,从深圳市人民医院感染或定植GBS的孕产妇宫颈、阴道、血液及尿液样本中,分离获得的60株GBS菌株为研究对象.通过革兰染色及cAMP试验,进行GBS初步鉴定.采用全自动微生物鉴定、药敏分析(VITEK)系统鉴定GBS菌株.采用K-B纸片扩散法和E-test法测定GBS菌株耐药情况.应用乳胶凝集试验进行GBS血清学分型.聚合酶链反应(PCR)列阵技术检查GBS的红霉素耐药基因ermA、ermC、ermB、mef AE及erm TR,克林霉素耐药基因linB,四环素耐药基因tetL、tetK、tetT、tetS、tetO及tetM,以及GBS主要毒力基因bac、bca、scpB、lmb及hylB.采用多位点测序分型技术(MLST)进行GBS的基因分型.结果 ①60株GBS菌株对青霉素及万古霉素敏感度为100.0％,对四环素、红霉素、克林霉素及左氧氟沙星的耐药率分别为88.3％、70.0％、43.3％及35.0％.②本组产科GBS的主要血清型依次为Ⅰb型36.7％(22/60),Ⅰa型28.3％(17/60),Ⅲ型18.3％(11/60)及Ⅸ型10.0％(6/60).③本组产科GBS的毒力基因主要为hylB、lmb及scpB,其中100.0％ (60/60)含有hylB基因,78.3％(47/60)含有lmb基因,75.0％ (45/60)含有scpB基因.④产科GBS主要基因序列分型(ST)中ST19为30.0％(18/60),ST23为11.7％(7/60),ST12与ST103各为8.3％(5/60),ST485为6.7％ (4/60),另外还包括ST1、4、10、17、27、28、86、199、221、325、651、653及未知型.结论 标本收集医院孕产妇感染或定植的GBS,对红霉素及克林霉素的耐药率较高,治疗GBS感染时不建议使用;但是仍可选择青霉素.对青霉素过敏的孕产妇,可根据病情选择万古霉素或左氧氟沙星治疗GBS感染.产科孕产妇中,感染或定植GBS的主要血清型为Ⅰ b及Ⅰ a,主要含有hylB、lmb及scpB毒力基因,以基因型ST19及ST23为主.
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二代测序技术应用于家族性非髓样甲状腺癌易感基因筛查
目的：利用二代测序技术筛查非髓样甲状腺癌（ NMTC）的遗传易感基因。方法收集家族性非髓样甲状腺癌（ FNMTC）和散发性非髓样甲状腺癌（ SNMTC）患者的外周血，提取DNA。针对遗传性甲状腺癌相关基因的全外显子区域进行探针杂交捕获测序，筛查基因突变位点。结果在63例NMTC样本中，共发现分别位于13个基因的45个高质量的胚系突变。其中在47例FNMTC患者中发现37个突变，在16例SNMTC患者中发现8个突变。在8个FNMTC家系中，发现同一家系的患者携带相同的突变位点。在47例FNMTC患者中，基因突变携带者29例；16例SNMTC患者中，基因突变携带者6例，差异无统计学意义（ P＝0．092）。 FNMTC患者中，基因突变组（29例）和基因未突变组（16例）中中央区淋巴结转移患者分别为22例和7例，差异有统计学意义（P＝0．031）。在具有亲子关系的患者中，7例亲代患者中，有中央区淋巴结转移3例；9例子代患者均有中央区淋巴结转移，差异有统计学意义（ P＝0．019）。结论二代测序技术可用于筛查FNMTC患者特异性的遗传易感基因变异，有助于早期发现FNMTC患者和预测甲状腺癌患者家族成员的发病风险。
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三株社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型研究
目的 了解西南地区社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)流行株的基因特征.方法 用葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)多重PCR分型技术、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术和多位点测序分型(MLST)技术对3株分离自临床的CA-MRSA(s35301、s29635、s19165)进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素(PVL)基因.结果 3株MRSA的mecA基因(147 bp)全部为阳性扩增,还同时扩增出750 bp左右的片段,该产物经测序后证实为SCCmecⅣa型.spa分型:s35301、s29635为t437,s19165为t008.MIJST分型:s35301、s29635为ST59型,s19165为ST8型.s19165、s35301 PVL基因扩增阳性,s29635 PVL基因扩增阴性.结论 西南地区分离到CA-MRSA ST8-t008克隆株及ST59-t437克隆株.应注意控制CA-MRSA感染及传播.
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天津地区4株金黄色葡萄球菌多位点测序分型
目的:应用分子进化学方法和信息学分析,研究4株金黄色葡萄球菌(SA)临床株的来源和遗传背景.方法:微量肉汤稀释法测定MIC、PCR扩增mecA基因,PBP2a平板乳胶凝集法识别MRSA、MSSA;应用多位点测序分型(Multilocus Sequencing Typing,MLST)进行ST分型比较.结果:2株MRSA,SA 76和SA 137,mecA基因的PCR扩增阳性,PBP2a平板乳胶凝集法阳性.另2株MSSA,SA 11和SA 155,mecA基因的PCR扩增、PBP2a平板乳胶凝集法阴性.MLST分型显示SA 76和SA 137的等位基因谱为2-3-1-1-4-4-3,归属ST9型,SA 11为1-1-1-1-1-1-1,属ST 1型,SA 155为5-4-1-4-4-6-3,属ST 7型.结论:MLST作为SA分型方法,分辨率高,结果准确,易于标准化.通过信息学分析,可以将MRSA克隆株、MLST分型、遗传背景和SCCmec联系起来,适于进行分子进化学研究.
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下一代测序在白细胞抗原基因分型中的应用
白细胞抗原(HLA)基因位于人类第六号染色体的短臂6p21.31区,长3600 k,其多样性在器官移植和相关疾病方面扮演着重要的角色.随着聚合酶链反应(PCR)扩增技术和测序技术的应用,使HLA分型由血清学或细胞学阶段提升到分子生物学阶段.经过数十年的发展,科学家一直努力应对HLA群体大量的和不断扩大的等位基因(截止到2015年1月已有12 542个HLA等位基因)[1].这些多态性的拼接是初对编码HLA-Ⅰ类分子和HLA-Ⅱ类分子的外显子进行测序得到的.
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黔西南汉族人群表皮生长因子前体蛋白编码序列第14和16外显子中单核苷酸多态性研究
背景与目的单核苷酸多态性（SNPs）在蛋白编码序列中多以富集成簇的方式分布，并提示其可能有民族区域和人种之间的差异性，然而 SNPs 在黔西南汉族人群表皮生长因子前体蛋白（preproEGF）编码序列第14和16外显子中的分布状况迄今尚未见报道，本研究拟对35例黔西南汉族受试者进行研究，旨在分析 SNPs 在 preproEGF 编码序列第14和16外显子中的分布特征。方法设计合成4条引物，分别对35例汉族受试者 preproEGF 编码序列第14和16外显子区段进行 PCR 扩增和产物的 DNA 测序；检索单核苷酸多态性资料库（dbSNP）获取资料并与测序结果进行对比分析。结果35例黔西南汉族受试者中13例（37.1％）在 preproEGF 编码序列的2525 bp 位点出现 SNPs，基因型为 AG 和 GG，频率分别为69.2％和30.8％，其等位基因频率分别为 A 34.6％和 G 65.4％；27例（77.1％）在2576 bp 位点有 SNPs，基因型为 AA 和 AG，频率分别为66.7％和33.3％，等位基因频率分别为 A 83.3％和 G 16.7％。相比之下，北京汉族受试者较黔西南汉族受试者在 preproEGF 编码序列第14外显子内多了1个单核苷酸多态位点，即2619 bp 位点；欧美等其他民族不仅在 preproEGF 编码序列第14外显子内分布有 rs199935855等7个 SNPs，而且在其第16外显子内也分布有 rs149396988等6个 SNPs；黔西南汉族和北京汉族受试者在 preproEGF 编码序列的第16外显子内均未见有 SNPs 分布。结论在黔西南汉族、北京汉族和欧美等民族的 preproEGF 编码序列第14和16外显子中， SNPs 分别具有各民族、各种族的特征性分布，据此可区分不同地域的种族和人群，甚至进行个体识别。也可将这些呈特征性分布的 SNPs 视为遗传标记进而深入研究 SNPs 与疾病发生的关系。
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脑膜炎奈瑟菌分子分型方法的进展
目前,脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)分型方法可分为免疫学为基础的传统分型方法和分子生物学分型方法,前者包括血清分群和单克隆分型,后者包括脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)、多位点测序分型(multi locus sequence typing,MLST),核糖体分型(ribotyping),随机扩增多态性DNA分型(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)等.
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外显子组测序在皮肤肿瘤中的研究进展
皮肤肿瘤发病率有逐年上升趋势,环境因素和遗传易感性是皮肤肿瘤的主要致病因素.基因突变与皮肤肿瘤的发生、发展密切相关,为阐明皮肤肿瘤的发病机制提供线索.在黑素瘤、皮肤鳞状细胞癌、皮肤基底细胞癌等皮肤肿瘤中,已发现众多新的突变基因.外显子组测序作为筛查易感基因的有效平台,覆盖率深、数据准确性高,可以检测皮肤肿瘤及其他多种疾病的致病基因和新的候选基因,对皮肤肿瘤的诊断、治疗及预后判断有重要意义.
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银屑病的转录组学研究进展
银屑病是一种与多基因遗传相关的慢性炎症性皮肤病,确切病因尚不明确.近年来已有越来越多的研究在转录组水平上探索其病理生理机制.主要的研究方法包括:表达序列标签技术、基因芯片技术、第二代测序技术等.通过各种研究方法,现已发现微小RNA-21、微小RNA-203、微小RNA-31等非编码RNA在银屑病患者皮损中存在明显差异表达,且与角质形成细胞的分化增殖密切相关,为银屑病发病机制的研究提供了重要依据.
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广西性病门诊患者泌尿生殖道沙眼衣原体株高分辨多位点测序分型研究
目的：了解广西性病门诊患者中泌尿生殖道沙眼衣原体型别分布，同时对随访患者沙眼衣原体的感染情况进行分析。方法在广西壮族自治区皮肤病防治所收集泌尿生殖道沙眼衣原体感染患者，采集男性尿道和女性宫颈拭子标本，并对初筛阳性患者在治疗完成后进行随访和标本采集，同时采集患者基本信息和临床信息。应用QIAxtractor全自动核酸纯化仪提取DNA，巢式PCR扩增沙眼衣原体主要外膜蛋白基因（ompA）和MLST（高分辨多位点测序分型）所需的CT046（hctB）、CT058、CT144、CT172和CT682（pbpB）5个基因。对PCR产物进行序列测定，经序列比对和MLST型别分析获得菌株的ompA基因分型和型别，并用BioNumerics7软件对广西和意大利沙眼衣原体株绘制小生成树。结果在44份来自初诊患者和6份来自随访患者的沙眼衣原体阳性样本中，42份成功进行沙眼衣原体ompA和MLST分型。共发现7种ompA基因型和15种hr?MLST分型的ST型别，其中有3种ST型别为首次报道。广西地区沙眼衣原体基因型别较意大利地区具有特征性。6例随访患者经分型方法鉴定3例为再次的新发感染，3例因未能成功进行基因分型而未能确诊。结论广西性病门诊患者感染的沙眼衣原体具有独特的型别，在随访中出现泌尿生殖道沙眼衣原体再感染病例。
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耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌耐药基因研究
目的 了解对碳青霉烯类药物耐药的肺炎克雷伯菌(CRKP)碳青霉烯酶基因的携带情况.方法 收集本院2013年1月至2016年6月临床标本中分离的630株肺炎克雷伯菌,采用VITEK-2 Compact全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定和药敏检测以及改良Hodge试验筛选CRKP,采用聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,采用多位点序列分型(MLST)技术对CRPK进行分子遗传学分析.结果 630株肺炎克雷伯菌中,61株对亚胺培南耐药,为CRKP,占9.7%,CRKP对多种临床常用抗菌药物均显著耐药,对替加环素具有良好的敏感性.PCR结果显示59株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中53株携带bla KPC-2型基因(89.8%),4株携带bla NDM-1型基因(6.8%),2株携带bla OXA-48型基因(3.4%).MLST分型主要以ST11为主(49株,80.3%).结论 我院CRKP基因型主要为KPC-2型,另外有散在NDM-1和OXA-48型,MLST分型主要为ST11型.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型研究
目的 了解本地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)流行株的来源和遗传背景.方法 回顾分析华西医院127例MRSA感染者的病例资料,用SCCmec多重PCR技术、葡萄球菌A蛋白(spa)分型技术和多位点测序分型技术对其中10株MRSA临床分离株进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素基因.结果 病例资料显示127株MRSA中3株为社区获得性MRSA(CA-MRSA),其余均为医院获得性MRSA(HA-MRSA).进行分型研究的10株MRSA中,7株HA-MRsA为SCCmecⅢ-ST239-PVL(一),呈现高度的克隆一致性,spa分型进一步显示4株为t030,另外3株为t037;CA-MRSA s19165分型为ST8-t008,与USA300属同一克隆,并且携带SCCmecⅣa和PVL基因,符合USA300一般基因特征.另外2株CA-MRSAs5301、s29635均为SCCmecⅣa-ST59-t437,与我国其他地区的报道不同.结论 该院分离的MRSA仍以医院获得性为主(124/127),HA-MRSA呈现高度的克隆一致性,并与我国的主要流行株为同一克隆;分离到与美国主要CA-MRSA流行株USA300相同克隆的菌株,另外分离到的CA-MRSA ST59-t437克隆株在我国其他地区未有报道.MLST和spa分型技术是金黄色葡萄球菌分子流行病学研究的更为简便快速的方法.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 多位点测序分型 葡萄球菌A蛋白 -
广州地区老年人肺炎链球菌临床分离株的青霉素耐药研究与分子分型
目的 调查广州地区老年患者肺炎链球菌分离株对青霉素的敏感性,并分析其亲缘关系.方法 K-B纸片法对33株分离自老年住院病人的肺炎链球菌进行青霉素药敏试验;应用PCR技术检测青霉素结合蛋白基因pbpla,pbp2x,pbp2b;用盒式PCR(BOX-PCR)分析菌株间亲缘关系.用多位点测序分型技术(multilocussequence typing,MIST)检测青霉素耐药菌株的分子分型.结果 青霉素的耐药率为3.03%(1/33);用PCR方法鉴定PSSP的准确率为68.75%:BOX-PCR可将这33株肺炎链球菌分为21型.MLST分型显示,青霉素耐药菌株属ST271型.结论 广州地区老年患者肺炎链球菌对青霉素耐药率较低,用PCR方法检测PSSP有一定的可行性.BOX-PCR显示了较高的分辨率,能快速可靠地检测菌株间的亲缘关系.广州地区流行的耐药克隆与Taiwanl9F-14株同源.
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金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性及ST分型特点分析
目的:分析本地区金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性及ST分型特点,揭示金黄色葡萄球菌在本地区的临床规律.方法:收集深圳大学南山医院2010-2015年临床分离金黄色葡萄球菌,其中138株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),190株为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA).经BD phonixtm 100公司全自动药敏鉴定系统及琼脂稀释法测定其药敏,聚合酶链式反应(PCR)方法检测其管家基因进行多位点测序分型(MLST)分型,并分析其药敏与MLST的关系.结果:328株金黄色葡萄球菌标本主要来源于痰液、咽拭子、气管分泌物、血液、伤口拭子和脓液,MRSA的检出率为42.07％,阿米卡星、红霉素、环丙沙星、四环素、妥布霉素的耐药率分别为48.12％、95.62％、50.37％、65.94％、50.37％,MLST主要流行型别为ST239、ST59、ST1.MSSA红霉素、四环素、妥布霉素的耐药率分别为73.65％、40.42％、40.11％,主要型别为ST7、ST59、ST398、ST188.无万古霉素,利奈唑胺,替加环素,替考拉宁耐药株.结论:本地区金黄色葡萄球菌的标本来源于呼吸系统,MRSA对呋喃妥因,奎奴普汀,利福平敏感,MSSA对呋喃妥因,奎奴普汀,利福平,阿卡米星,环丙沙星敏感,ST239-MRSA、ST7-MSSA、ST398-MSSA、ST88-MSSA、ST120-MSSA多重耐药(3种或3种抗菌药物以上耐药).
