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甘氨酸和Triton X-100对ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达影响的初步研究
目的 考察不同浓度的甘氨酸和Triton X-100对葡萄球菌蛋白质A ZZ亲和肽-增强型绿色荧光蛋白(ZZ-EGFP)融合蛋白在大肠杆菌分泌表达的影响.方法 研究设计为两因素三水平析因设计.向液体培养基中分别加入终浓度0、1%、2%的甘氨酸和0、1%、2%的Triton X-100(共9种组合方式,终浓度均为0者为对照组),诱导大肠杆菌周质腔内ZZ-EGFP融合蛋白泄漏到液体培养基中,以培养上清液荧光强度为观察指标,通过ZZ-EGFP融合蛋白浓度-荧光强度标准曲线快速检测培养基中ZZ-EGFP融合蛋白表达量.结果 培养基中分别加入1%、2%甘氨酸或1%、2%TritonX-100培养后,培养上清液荧光强度分别为 283±11、711±19和622±25、733±25,与对照组(74±5)比较,组间差异均有统计学意义(甘氨酸:F=10.881,P=0.024;Triton X-10:F=12.848,P=0.018);而且甘氨酸与TritonX-100两者之间有交互效应(F=5.441,P=0.005),其中培养基中同时含有终浓度2%甘氨酸及1%Triton X-100时培养上清液荧光强度高(1854±45),ZZ-EGFP融合蛋白分泌表达量达到10.4 mg/L,与对照组(0.94 mg/L)相比提高了11倍.结论 甘氨酸和Triton X-100能提高ZZ-EGFP融合蛋白在液体培养基中的分泌表达量.
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荆州地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子型别及相关临床特征
目的：了解湖北省荆州地区流行的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ MRSA）的主要分子型别和相关临床特征。方法连续收集2014年1至12月分离自湖北省荆州市中心医院住院患者并经mecA基因检测确证为MRSA的80株临床分离株。采用全自动微生物检测仪Vitek 2 Compact对所有菌株进行药敏试验，采用多重聚合酶链反应（ PCR）和基因测序分别检测菌株的葡萄球菌A蛋白（ SPA）和葡萄球菌染色体mec基因盒（ SCCmec）分子型别，并采用PCR法检测所有菌株的杀白细胞素（ PVL）基因。采用χ2和Wilcoxon秩和检验对数据进行处理。结果80株MRSA中共检出16种spa基因型别，以t030和t437为主，分别为40株（50％）和23株（28．8％）；共检测到SCCmecⅠ～Ⅴ型77株，以SCCmecⅢ和SCCmecⅣ型检出多，分别为36株（45．0％）和28株（35．0％），且SCCmecⅢ型对应的spa型以t030（33／36，91．7％）为主，SCCmecⅣ型对应的spa型别以t437（20／28，71．4％）为主。t030型／SCCmecⅢ型MRSA感染患者年龄大于t437／SCCmecⅣ感染的患者（ T＝446．500和607．500， P＜0.01）；前者多来自外科和重症监护病房（ ICU），后者多来自儿科，两种型别感染者的病区分布差异有统计学意义（χ2＝33．724和29．768，P＜0．01）；t030／SCCmecⅢ型MRSA对利福平、红霉素、克林霉素、四环素、左氧氟沙星、莫西沙星、环丙沙星和庆大霉素的耐药性均＞70％；t437／SCCmecⅣ型MRSA除对红霉素、克林霉素和四环素耐药外，对多种非β-内酰胺类抗菌药物均敏感，耐药率基本＜20％。另外，检出携带pvl毒力基因的MRSA 11株（13．8％），以t437-SCCmecⅣ型为主（7株）。结论荆州地区流行的MRSA分子型别众多，但以t030-SCCmecⅢ型和t437-SCCmecⅣ型为主。 t030-SCCmecⅢ型菌株表现出多重耐药的特点，感染对象多为外科和ICU病区的老年患者；t437-SCCmecⅣ型菌株对多种非β-内酰胺类抗菌药物敏感，感染对象主要为儿童和青少年。
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三株社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因分型研究
目的 了解西南地区社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)流行株的基因特征.方法 用葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)多重PCR分型技术、葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术和多位点测序分型(MLST)技术对3株分离自临床的CA-MRSA(s35301、s29635、s19165)进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素(PVL)基因.结果 3株MRSA的mecA基因(147 bp)全部为阳性扩增,还同时扩增出750 bp左右的片段,该产物经测序后证实为SCCmecⅣa型.spa分型:s35301、s29635为t437,s19165为t008.MIJST分型:s35301、s29635为ST59型,s19165为ST8型.s19165、s35301 PVL基因扩增阳性,s29635 PVL基因扩增阴性.结论 西南地区分离到CA-MRSA ST8-t008克隆株及ST59-t437克隆株.应注意控制CA-MRSA感染及传播.
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免疫吸附治疗急性吉兰-巴雷综合征2例和多发性肌炎1例
例1,男,45岁.因四肢麻木1个月,双下肢乏力15天于2005年3月28日入院,患者于2003年3月在我院被诊断为急性吉兰-巴雷综合征(guillian barre syndrome,GBS),治疗出院后症状完全消失.本次入院后查体发现四肢腱反射消失,四肢末梢袜套样痛、温觉减退,双下肢肌力5级-,双侧正中神经、桡神经、腓总神经运动末端潜伏期(ML)及感觉传导速度(SCV)和胫后神经F波潜伏期(Fw)均存在异常.腰穿示脑脊液糖4.37 mmol/L,氯123.8 mmol/L,蛋白757mg/L,细胞数正常.
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尿IgG亚类的分离纯化和鉴定
目的:建立一种简便快捷的分离纯化肾病患者尿IgG亚类的方法.方法:收集的肾病患者24h尿液经硫酸铵盐析、DEAE-cellulose离子交换层析和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析等3步分离纯化,即可得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG4 4种亚类,后用Western blotting和SDS-PAGE电泳的方法鉴定样品及其纯度.结果:SPA亲和层析洗脱曲线显示有4个独立的洗脱峰,Western blotting和SDS-PAGE方法鉴定表明提纯的样品为高纯度的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4.结论:本方法通过3步即可一次性将样品中的4种不同的IgG亚类全部分离纯化,且纯度高,简便快捷,效果良好.
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葡萄球菌蛋白A胶体金分子结构特点及作为原子力显微术标记物的可行性
目的 分析葡萄球菌蛋白A胶体金(SPA-CG)分子的特征性构象特点,探讨其作为原子力显微镜观测原位标记物的可行性.方法 应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的葡萄球菌蛋白A胶体金分子,并进行结构分析及理论计算.结果 极少数平卧的SPA-CG呈中部球形隆起,两端长短不一的弯曲棒状肽链环抱球形隆起的独特结构,形成反"C"字形结构,球形隆起直径为单个胶体金直径的3～4倍;极少数SPA-CG呈逗号样;绝大多数SPA-CG呈一侧面稍凹的椭球形结构,结构稳定、均一,长径为(40.88±1.58)nm,宽径为(20.82±0.68)nm,高度(Z轴)为(10.51±0.28)nm.结论 单个胶体金标记的葡萄球菌蛋白A分子具有独特、稳定、均一的特征性构象,可作为原子力显微术观测的原位标记物.
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A蛋白与凝固酶凝集试验在金黄色葡萄球菌快速鉴定中的应用
目的 探讨金黄色葡萄球菌快速检测的可能性.方法 用凝固酶(CA)(试管法和玻片法)和葡萄球菌A蛋白(SPA)两种方法检测667株葡萄球菌.结果 378株金黄色葡萄球菌中二者同时呈阳性的有303株,阳性率为80.2%,特异性、准确性均为100%;CA与SPA试验联合使用的阳性率之和高至98.9%,而其他289株葡萄球菌CA与SPA试验的阳性率之和仅为12.4%.结论 CA与SPA试验联合运用对金黄色葡萄球菌的鉴定具有快速、准确、简便易行及特异性强等优点.
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葡萄球菌蛋白A胶体金分子三维构象的原子力显微镜分析
目的确定葡萄球菌蛋白A胶体金分子特征性构象. 方法应用原子力显微镜扫描生理状态下分布在云母表面的葡萄球菌蛋白A胶体金分子,并进行理论计算. 结果葡萄球菌蛋白A胶体金分子为57.00 nm×33.00 nm×21.61 nm 椭圆球形"左轮手枪状"复合物. 结论原子力显微镜可以在生理状态下直观测定生物大分子纳米尺度结构.葡萄球菌蛋白A胶体金分子的特征性结构可以作为神经细胞膜表面N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)原子力显微镜观测的原位标记物.
