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珠海市斯坦利沙门菌耐药特征和分子分型分析
目的 分析2012-2016年珠海市斯坦利沙门菌的耐药情况与脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.方法 将腹泻病人的粪便进行沙门菌分离培养,生化鉴定和血清学分型,采用药敏纸片法(K-B法)进行12种抗生素的耐药试验.根据美国PulseNet实验室推荐的沙门菌PFGE分型试验方案进行分子分型.结果 分离培养共获得斯坦利沙门菌108株,检出高峰期在7-10月,主要感染人群是小于1岁的幼儿(55.6％),感染病例男女比为1.84∶1.药敏试验显示本地斯坦利沙门菌对庆大霉素、三代和四代头孢类抗生素及环丙沙星较为敏感,对复方磺胺类抗生素耐药率为64.8％(70/108),对氨苄青霉素、萘啶酮酸、四环素、氯霉素和链霉素呈现低水平的耐药(10.2％～16.7％),但对链霉素的中度敏感率为68.5％,有18株(16.7％)菌呈多重耐药.108株菌经PFGE分型分为6个聚类簇,共获得66种带型,每种带型包含菌株数1～21株不等,相似值在62.4％～ 100％,优势带型为ST15(21株)和ST18(10株).结论 珠海市斯坦利沙门菌的耐药情况较为乐观,但对磺胺类抗生素耐药率比较高,也出现多重耐药株,需继续加强监测.斯坦利沙门菌遗传基因多样性,多重耐药株的型别多样,菌株来源广泛.
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食品中副溶血弧菌血清学分型与分子分型的研究
目的 分析深圳市2007～2010年监测食品中副溶血弧菌存在的优势血清型与基因型之间的相似性,初步建立深圳市食源性副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳分子分型监测网络.方法 选择2007～2010年监测食品中分离出来的副溶血孤菌主要血清群(O1-O4)55株,基因组DNA经Sfi1酶切,通过脉冲场凝胶电泳PFGE获得图谱,利用BioNumerics 分析软件对图谱进行聚类分析.结果 相似性在90％以上的有15株,其中有9株相似性为100％,分别是2株O2:K28;1株O1:KUT与1株O4:K42;5株O3:K6,其余菌株谱型差异较大.结论 监测食品中分离的副溶血弧菌PFGE型别多,且相互之间关系分散.PFGE分子分型监测网络的建立,有助于食源性疾病发生时的主动监测,爆发调查和传染源追踪.
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自贡市2017年1起O139霍乱确诊病例的流行病学调查
目的 对自贡市2017年1例O139霍乱确诊病例进行流行病学调查和溯源,为疫情防控工作提供参考.方法 对病例及密切接触者进行调查,对全市水产市场、生活饮用水水源地和水产养殖聚集地开展霍乱监测.结果 从病例粪便中检出O139霍乱弧菌,RT-PCR检测菌株ctxAB毒力基因阳性.从病例就业的餐馆甲鱼供应水产经营部盛装活甲鱼水、病家厕所余水标本中均培养出O139霍乱弧菌.脉冲场凝胶电泳检测显示,病例粪便与病家厕所余水中所分离的霍乱弧菌相似度评价值为100％,与盛装活甲鱼水中所分离的霍乱弧菌相似度评价值为94.7％,为同源菌株.水产市场和外环境监测未发现霍乱阳性标本.结论 本病例在餐厅处理被O139霍乱弧菌污染的甲鱼过程中受到感染.被污染甲鱼来自外地,未构成本地传播.应加强餐饮业工作人员霍乱等传染病的基础知识和个人防护宣传,从业人员在处理高风险水产食材处理工作时应做好戴手套等防护措施.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及同源性分析
目的 分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M RS A)感染及耐药情况,为临床提供科学依据.方法 收集2015年11-12月本院普外科7例住院患者粪便标本非重复分离的M RS A菌株作为研究对象,回顾性分析患者临床资料,采用全自动微生物分析系统对菌株进行药敏分析,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分析菌株同源性.结果 7例患者均为普通外科术后住院患者,手术前后均不同程度的使用过抗菌药物,尤其是术后均使用过3种或3种以上的抗菌药物;分离的7株M RS A菌株对喹努普汀/达福普汀、利奈唑胺、万古霉素、替加环素、利福平、复方磺胺甲噁唑均敏感,对青霉素、苯唑西林、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、红霉素、克林霉素、四环素均耐药.7株MRSA菌株均来源于同一克隆,其中A1型4株,A2型2株和A3型1株.结论 MRSA感染一般发生于有严重基础疾病且长期使用抗菌药物的住院治疗患者,院内感染是MRSA主要的传播方式.
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重庆某三甲医院耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌感染危险因素分析及分子流行病学调查
目的 分析耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌(Carbapenem resistant Citrobacter freundii,CRCF)感染危险因素及分子流行病学特征.方法 收集来自重庆医科大学附属第二医院2013年1月-2018年3月138例弗劳地枸橼酸杆菌感染患者临床资料,按照是否对碳青霉烯类抗生素耐药分为两组,CRCF组32例,非CRCF(Non-CRCF,NCRCF)组106例;用卡方检验及多因素logistic回归分析方法分析CRCF感染的危险因素;多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析细菌同源性.结果 138株弗劳地枸橼酸杆菌中CRCF检出率为23.2％;多因素logistic回归分析显示肿瘤(OR=4.057,95％ CI=1.574～10.458,P=0.004)和手术(OR=2.938,95％ CI=1.160 ～7.441,P=0.023)是CRCF感染的独立危险因素;共有7个MLST克隆型,以ST22(n =9)和ST115(n =9)型多见,两个新的ST型已被PubMlst数据库收录并分别命名为ST115和ST116;PFGE与MLST分型结果基本保持一致.结论 肿瘤和手术是CRCF感染的独立危险因素;ST22和ST115是CRCF感染的优势克隆型;应加强对CRCF的监测和控制,预防CRCF的播散流行.
关键词： 耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌 危险因素 MLST PFGE -
2015-2016年珠海市187株沙门菌Ⅰ耐药性和分子分型分析
目的 研究引起腹泻的鼠伤寒沙门菌H2阴性变异株(抗原式:Ⅰ4,5,12:i:-)的耐药与分子流行病学特征.方法 根据PulseNet实验室推荐的沙门菌PFGE分型方案与药敏试验肉汤稀释法,对2015-2016年腹泻病例分离菌株进行PFGE分子分型与小抑制浓度测定.结果 该变异株主要感染1～3岁的幼儿(52.4％),检出高峰期在夏秋季.该菌株药敏试验结果显示菌株对亚胺培南和阿奇霉素敏感;四环素和氨苄西林的耐药率较高,分别为89.84％和88.77％;对不同头孢类抗生素表现不一样的耐药,对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢他啶和头孢西丁的耐药率分别是47.06％、39.04％、13.9％和1.6％;多重耐药率为67.38％,以3种抗生素AMP-TE-CHL耐药为主,而同时对三种头孢类抗生素耐药的有25株(13.37％).PFGE分型结果显示187株菌分为11大聚类簇,共获得109种带型,菌株间相似值为55.4％～100％,优势型别为B58(12株)和B23(9株),菌株的PFGE型别和耐药型别间没有发现有相关性.结论 珠海市鼠伤寒H2阴性变异株对氨苄西林和四环素耐药比较严重,多重耐药率较高,对头孢类抗生素呈现一定水平的耐药.本地菌株呈现遗传多样性.
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河南省新发传染病EHEC O157:H7监测研究
[目的]了解河南省肠出血性大肠杆菌(EHEC)感染性腹泻的发病情况、宿主带菌状况、食品污染程度及志贺毒素(stx)基因型,为制订有效的防治对策提供依据.[方法]采集河南省监测点腹泻病人、家畜、家禽粪便,水和肉食品等标本分离EHEC菌株,应用分子生物学技术检测分析菌株rfbO157、rfbO111、hlyA、eaeA、str2和stx1等毒力基因和突变基因.[结果](1)从腹泻病人、家畜、家禽、食品、水、蜣螂和苍蝇中均分离出EHEC菌株共275株.总分离率7.88%;其中O157:H7菌株为232株(84.36%),携带stx2基因EHEC O157:H7菌株88株(37.93%);非O157:H7菌株43株(15.64%). (2)宿主动物中羊带茵率高(6.96%),是河南省EHEC主要宿主动物;多重PCR检测出8种不同毒力基因组合型,主要为rfbO157+、hlyA+、eaeA+、stx2+组合.stx2变种毒素GK探针检测出3种毒素变种杂交带型,其中stx2原毒素+stx2yha型占7.4%,stx2vha型的占72.2%,未知新杂交带型占20.4%. (3)EHEC O157:H7菌株可分为9个PFGE型,自羊、牛、鸡和蜣螂和腹泻病患者中分离的携带stx2vha菌株同属一个PFGE型.(4)144株不携带志贺毒素的O157菌株中发现O157:H38、O157:H42和O157:Hund(未确定型)新菌株.[结论]河南省家禽、家畜中普遍携带EHEC O157:H7大肠杆菌,羊是主要的宿主动物;EHEC O157:H7为我省优势菌型,其毒素基因型为stx2-eaeA-hlyA并以stx2vha亚型为主.EHEC在外环境中污染严重并可在人与人、动物与人之间传播,家畜、家禽携带stx2EHEC O157:H7率的高低与EHEC人群感染发病呈相关关系.
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淮安市417份腹泻患者粪便标本病原菌检测及病原学分析
目的 了解淮安市腹泻患者病原菌感染情况、耐药性以及分子分型,为淮安市腹泻患者病原菌的防治提供依据.方法 对2016年淮安市腹泻患者的粪便标本进行目标病原菌的分离培养,检测出的菌株进一步做药敏试验和PFGE分子分型.结果 在417份腹泻标本中共检出致泻大肠埃希氏菌16株,沙门菌5株,志贺氏菌2株,总检出率为5.52％.药敏结果显示,目标致病菌对12种抗生素普遍耐药,其中致泻大肠埃希菌对红霉素、氨苄西林、萘啶酸、庆大霉素的耐药率均超过50％,分别为100％、81.25％、56.25％和56.25％,高对10种抗生素耐药.沙门菌主要对红霉素耐药.PFGE分子分型分析显示,目标致病菌带型均比较分散,亲缘关系较近.结论 淮安市2016年腹泻患者病原菌感染主要以致泻大肠埃希菌为主,其次是沙门菌.菌株耐药性强,多重耐药谱广.菌株基因图谱比对显示淮安市腹泻致病菌呈多态性分布,且具流行相关性.
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泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染状况及病原学特征分析
目的 了解泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染状况、毒力基因、分子分型以及耐药性情况,为致泻大肠埃希氏菌防治提供依据.方法 对2013年泰州市215份腹泻病人粪便标本进行多重PCR鉴定和分离培养,并对分离的致泻大肠埃希氏菌菌株进行生化鉴定、脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分子分型以及药敏试验.结果 215份腹泻病人粪便标本共检测出致泻大肠埃希氏菌30株,其中EPEC 20株(占9.30％),EAEC 5株(占2.33％),ETEC 5株(占2.33％);PFGE结果表明,30株致泻大肠埃希氏菌PFGE带型种类多,各亲缘关系较近,但无100％的同源菌,同时PFGE分析结果表明在同一个粪便中有2种不同致泻大肠埃希氏菌感染情况存在;药敏试验表明,30株致泻大肠埃希氏菌对阿莫西林、四环素耐药性高,3耐以及以上占63.33％.结论 泰州市腹泻病人中致泻大肠埃希氏菌感染普遍存在,并以EPEC、EAEC、ETEC感染为主,菌株的耐药性较强,耐药谱广;基因型呈多态分布,且具有流行相关性.
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实时荧光定量PCR和PFGE在检测海产品中副溶血性弧菌的应用
目的 应用实时荧光定量PCR( RT-PCR)筛检海产品中副溶血性弧菌,结合常规培养以提高检出率;应用PFGE对32株副溶血性弧菌进行分子分型分析.方法 在常规培养的基础上,应用RT-PCR对96件样品增菌液进行初筛,再用常规培养法确证阳性;用阳性似然比与阴性似然比、符合率与Kappa值做为指标,评价RT-PCR筛检的真实性和可靠性;用限制性内切酶SfiI对32株菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version 5.01软件对图像进行聚类分析.结果 96件样品常规培养法检出率24.00％,RT-PCR/常规培养法检出率33.33％.阳性似然比为3.88,阴性似然比为0.06.符合率为80.21％,中、高度一致(Kappa值=0.57);32株菌得到31个PFGE图谱类别,相似性在62.1％～100.0％之间,可分5个聚类群.结论 RT-PCR在检测海产品中副溶血性弧菌有很好的初筛作用,RT-PCR/常规培养法使用价值高;海产品中副溶血性弧菌亲缘关系较远,显示高度多态性.
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2011-2012年四川省部分地区鸭源沙门菌分型及耐药性研究
目的 监测四川地区鸭养殖场中沙门菌污染状况,分析鸭源性沙门菌的污染源和耐药性.方法 四川省鸭养殖场监测中获得的沙门菌通过血清分型和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.用纸片扩散法(KB法)对分离菌株进行12种药物的药敏检测.结果 2011-2012年四川省鸭养殖场监测共分离得到96株沙门菌,分为15个血清型,36个PFGE型.5个血清型和3个PFGE型在两个年份均有检出.3个血清型和1个PFGE型在3个地区检出.鼠伤寒沙门菌(S.Typhimurium) PFGE型BTyp-1在2个年份、3个地区及多种样本类型中都有检出.检出的沙门菌对磺胺甲恶唑、萘啶酸的耐药率较高分别为97.9％,55.2％,对头孢他啶都敏感.多重耐药沙门菌22株,18株分离自内江养殖场,其中16株耐受8种以上药物.结论 沙门菌在鸭养殖场各环节广泛且长期存在污染.BTyp-1型为四川地区鸭养殖场广泛分布的型别.鸭养殖场分离沙门菌呈高耐药和多重耐药状况.应加强监测沙门菌污染及规范抗生素使用,降低沙门菌引起的食品安全风险.
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一起沙门菌食物中毒事件的病原检测和溯源分析
目的 对本地某高校一起商售食品污染肠炎沙门菌引起的食物中毒进行病原检测和溯源分析.方法 事件调查中采集的标本以BAX system Q7进行快速筛查后按照GB4789等标准方法进行致病菌检测和鉴定;沙门菌分离株以脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)分型后进行同源性分析.结果 事件调查中采集患者、食品制作人员和相关食品标本19份,首批患者标本在快速筛查中提示为沙门菌阳性;10份患者标本中检出5株肠炎沙门菌和6株O4群沙门菌(彻斯特沙门菌和圣保罗沙门菌),三明治和面包皮标本检出2株肠炎沙门菌;PFGE分型显示,7株肠炎沙门菌的电泳带型完全相同,而6株O4群沙门菌的相似度也为100％.结论 这是一起由不同血清型沙门菌混合感染引起的食物中毒,与污染的三明治密切相关;脉冲场凝胶电泳技术适用于突发公共卫生事件病原的准确溯源.
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荧光定量PCR和DNA分子分型在菌痢暴发中的应用
[目的]探讨实时荧光PCR快速检测和脉冲肠凝胶电泳(PFGE)分型方法在菌痢暴发流行病学研究中的应用.[方法]采用实时荧光PCR检测技术对一起菌痢患者的24份肛拭增菌液进行快速检测,同时从患者肛拭中分离的5株福氏4型志贺氏菌采用脉冲场凝脉电泳的方法进行了分子分型.[结果]在这一起菌痢疫情中,实时荧光PCR快速检测24份肛拭增菌液,5份阳性,并从PCR阳性的增菌液中分离到5株福氏4型志贺氏菌,而且5株志贺氏菌的脉冲场凝胶(PFGE)图谱显示DNA条带完全一致,具有高度的同源性.[结论]实时荧光定量PCR技术特异性强,灵敏度高,能在采样后数小时内检测到病原菌的DNA,达到快速诊断的目的.PFGE具有分型能力强,重复性好等特点,能直观地判断致病菌的亲缘关系,及时查明暴发流行的传染源从而有效控制疫情的蔓延,在志贺氏菌的分子流行病学研究中具有重要作用.
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一起学校细菌性痢疾暴发疫情的病原追溯和流行病学特征分析
目的 对学校发生的一起细菌性痢疾暴发疫情进行调查,并采用脉冲凝胶电泳(PFGE)方法对菌株进行同源性分析,为查找传染源、切断传播途径,提供参考依据.方法 开展现场流行病学调查,采用描述流行病学的方法对暴发原因进行分析,同时采集患者粪便、水样进行细菌学培养,运用PFGE对分离的菌株进行同源性分析.结果 此次暴发疫情的调查共发现病例60例,罹患率为10.12％,发病人群均为小学学生;从53例患者的粪便中共检出30例痢疾阳性病例,且菌群均为宋内志贺菌;水样检测发现2号水井及其旁边的水塘存在宋内志贺菌;对4份病例的粪便、2份水样进行PFGE分析,其结果显示,6份样本所检出菌株的电泳带型完全相同.结论 该事件是一起因饮用宋内志贺菌污染的水源而导致的细菌性痢疾暴发疫情.
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一起副溶血弧菌引起的食物中毒溯源分析
目的 采用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)对一起食物中毒分离的副溶血弧菌分子分型来确定引起本次食物中毒的原因,为预防食物中毒事件的发生提供依据.方法 采用实验室细菌分离培养、药敏试验、PFGE分子分型,并运用BioNumeries软件分析菌株之间的流行病学关系.结果 此次食物中毒事件中共检出6株副溶血弧菌;药敏试验表明6株副溶血弧菌结果一致,对头孢唑啉和红霉素耐药性都为100％;经PFGE图谱聚类分析可知此次食物中毒事件主要是因为食用污染了副溶血弧菌的海带引起.结论 运用PFGE技术了解细菌之间的亲缘关系,为食物中毒中快速溯源提供依据;我们也应加强食品卫生管理,做好对食物中毒相关危害知识的宣传工作,避免类似事件再次发生.
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2013年泰州市健康从业人员携带的沙门氏菌耐药状况以及分子分型研究
目的 了解泰州市健康从业人员携带的沙门氏菌血清型分布、耐药状况以及分子分型特性,为食源性沙门氏菌病的防治提供检测依据.方法 将2013年泰州市健康从业人员分离的58株沙门氏菌进行生化鉴定、血清学分型、药敏试验以及脉冲场凝胶电泳(Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE)分子分型,并运用BioNumeries软件分析菌株之间的流行病学关系.结果 58株沙门氏菌分为8种血清型,主要以蒙德维的亚沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、德尔卑沙门氏菌为主.药敏试验表明,58株沙门氏菌对四环素和萘定酸耐药性高;多重耐药谱显示耐2种抗生素及以上占39.66％,高耐10种抗生素.PFGE结果表明,同一血清型的沙门氏菌有多个PFGE带型,相似度大于50.00％,且均有带型100.00％一致的菌株存在.结论 泰州市健康从业人员携带的沙门氏菌耐药谱广,耐药性较强;基因型呈多态分布,但具有流行相关性;各血清型都有100.00％同源菌株,应结合流行病学调查,做好预防控制工作.
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江苏省霍乱病例病原学特征及与外环境污染间的关系
[目的]了解江苏省外环境中霍乱弧菌的污染现状,探讨其与病例发生、疾病流行问的关系.[方法]检测水体、水产品和熟食中霍乱弧菌的携带情况,比较外环境来源株与病例株在血清型、耐药性及毒索基因等方面的差异,应用PFGE分型技术分析不同来源菌株的遗传相关性.[结果]株外环境来源株均为不带毒力、对抗生素敏感的O1群非流行株,病人来源株为具有ctxA、zot、ace、tcpA毒力基因的O139群.11株O139群被分成7种PFGE带型,与O1群相似性系数为76.14%.[结论] 外环境来源株在表型及基因水平上与病例株差异较大,不是病例发生的原因.目前霍乱在江苏省处于低频的高度散发状态,近期大规模暴发和流行的可能性较小.
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40株院内感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及分子分型研究
目的 了解耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)在医院内感染的流行病学特征,为临床MRSA的预防和控制提供依据.方法 对从医院内收集的不同来源的MRSA进行生化鉴定、药敏试验及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,并运用BioNumeries软件分析其亲缘性关系.结果 本研究共收集院内感染分离的MRSA 40株.药敏试验表明,40株MRSA对苯唑西林(100.0％)、头孢西丁(100.0％)、青霉素(100.0％)耐药性达高,其次是红霉素(80.0％),克林霉素(75.0％);多重耐药谱显示3耐以及以上的占100.0％;PFGE分子分型表明40株MRSA共分为36个型,其中3个型别具有100.0％同源性的菌株.结论 院内感染分离的MRSA的耐药性强,多重耐药谱广,PFGE带型多样,且有100.0％同源性菌株,表明MRSA在院内存在相互传播的可能.应加强对其耐药性以及溯源分析,为院内感染溯源及预警,减少MRSA的暴发和流行提供实验室的技术支撑.
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PFGE在识别和追踪医院感染暴发及流行中的应用
医院感染是危害医疗安全重要的原因之一,据美国疾病预防控制中心统计每年约有200万住院病人发生医院感染,占住院总数的5%～10%,同时会导致每年约88 000人死亡以及带来45亿美元的经济损失[1],而近年来随着广谱抗生素、肾上腺皮质激素、免疫抑制剂等药物的广泛使用,各种侵入性诊疗措施的不断增多,由多重耐药菌株引起的医院感染暴发流行时有发生,有学者估计可能为5%[2].
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崇州市23株副溶血弧菌的病原特征分析
目的 分析四川崇州地区2014-2017年6起23株副溶血弧菌食物中毒疫情分离株毒力基因携带,耐药及分子分型特征,为该地区副溶血性弧菌疾病防治提供科学依据.方法 采用微量肉汤稀释法(MIC)检测13种抗生素的敏感性;实时荧光PCR法检测(tdh、trh)毒力基因;脉冲场凝胶电泳(PFGE)和BioNumerics软件对菌株进行分子分型分析.结果 23株副溶血性弧菌PFGE聚类分析共分为18个型别.2起暴发的病人之间分属同一PFGE型别,其余4起暴发病人、食品、环境之间相关性均低于60％;2起暴发病人分离株存在100％相似的带型.食品和环境分离株无毒力基因检出,病人分离株毒力基因检出率88.89％(16/18).食品环境分离株对头孢唑啉100％(5/5)耐药,对其他12种药物均敏感;临床分离株对氨苄西林27.78％(5/18)耐药、头孢唑啉100％(18/18)耐药,对其他11种药物均敏感.结论 该地区近年来由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件存在由多种不同型别和相同型别(PFGE带型100％相似)弧菌引起情况.
