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实时荧光定量PCR和PFGE在检测海产品中副溶血性弧菌的应用

严寒秋;李姗姗;黄瑛;曲梅;张新;吕冰;陈丽娟;王全意

摘要: 目的 应用实时荧光定量PCR( RT-PCR)筛检海产品中副溶血性弧菌,结合常规培养以提高检出率;应用PFGE对32株副溶血性弧菌进行分子分型分析.方法 在常规培养的基础上,应用RT-PCR对96件样品增菌液进行初筛,再用常规培养法确证阳性;用阳性似然比与阴性似然比、符合率与Kappa值做为指标,评价RT-PCR筛检的真实性和可靠性;用限制性内切酶SfiI对32株菌进行PFGE分子分型,用BioNumerics Version 5.01软件对图像进行聚类分析.结果 96件样品常规培养法检出率24.00%,RT-PCR/常规培养法检出率33.33%.阳性似然比为3.88,阴性似然比为0.06.符合率为80.21%,中、高度一致(Kappa值=0.57);32株菌得到31个PFGE图谱类别,相似性在62.1%~100.0%之间,可分5个聚类群.结论 RT-PCR在检测海产品中副溶血性弧菌有很好的初筛作用,RT-PCR/常规培养法使用价值高;海产品中副溶血性弧菌亲缘关系较远,显示高度多态性.

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