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O139霍乱弧菌的分子流行病学特征
利用ctxA,Zot,Ace,RS1,st和iga等基因探针检测578株霍乱弧菌,发现其中1株埃尔托型霍乱弧菌和6株O139霍乱弧菌不含ctxA,进一步分析证明这7个菌株中,除1株含RS1序列外,其他毒力基因检测均为阴性,这为菌苗候选株的筛选提供了依据.用16SrRNA基因探针检测不同地区分离的62株O139菌株和O-1群埃尔托型菌株,将其分为9个16SrRNA基因型.结合ctxA探针检测结果,认为我国流行的O139霍乱弧菌有两种类型,与印度、孟加拉国分离的菌株不尽相同.本文首次报导,通过16SrRNA基因检测,可区分O-1群埃尔托型霍乱弧菌与O139霍乱弧菌,并建议将ctxA、16SrRNA两个基因作为确定O139霍乱弧菌分子流行病学特征的指标.
关键词： O139霍乱弧菌 16SrRNA基因型 分子流行病学 -
江苏省环境来源的O139群霍乱弧菌的核酸特征分析
目的 分析江苏省2003-2005年之间从环境样本中分离到的霍乱弧菌的核酸特征,及其差异的程度.方法 将11株目的菌株的表型特征(包括血清型,耐药谱,生化特征以及El Tor霍乱弧菌的噬菌体分型)和核酸特征(包括霍乱毒素基因ctx-A、zot、ace、tcp-A的分布情况和脉冲场凝胶电泳指纹图谱)结合起来进行比较和分析.结果 11株菌株中有10株O139群霍乱弧菌,1株El Tor小川;其中6株O139同时对5种以上抗生素耐受,2株O139对4种抗生素耐受,1株0139对2种抗生素耐受,另外1株O139(属于PFGE-C型)和1株小川分别只对一种抗生素耐受;11株霍乱弧菌的生化特征没有明显差异;8株O139同时携带4种毒力相关基因,1株0139只携带zot和ace,另外1株O139(05052)和1株小川未携带这4种基因;9株O139的脉冲场凝胶电泳指纹图谱聚为一类,另外1株O139和小川各自聚为一类.结论 10株O139中有1株(属于PFGE-C型)的耐药谱、毒力相关基因分布及PFGE指纹图谱与其他9株不同,而与分离地点相同的小川相似,提示自然环境中的O139群霍乱弧菌存在着差异.
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一株麦氏弧菌引起O1 39霍乱弧菌诊断血清凝集反应的情况分析
[目的]对可疑菌落进行属性鉴定.[方法]对可疑菌落作O139、O22、O155诊断血清玻片凝集试验;对凝集菌落进一步作试管凝集和生化试验.[结果]初步鉴定为O139乱弧菌;再经生化鉴定并结合形态特征,确定为麦氏弧菌.[结论]对霍乱弧菌的实验室鉴定,应以血清学性状为主,并结合形态学和生化学性状作出判定.应采用单克隆抗体作后鉴定,以排除假阳性.
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奉新县1例霍乱疫情流行病学调查及应急处置报告
霍乱是由O1群霍乱弧菌或O139霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,是发病急、传播快、波及面广、危害严重的甲类传染病,也是当今三种国际检疫传染病中严重的一种[1].奉新县自1957年成立防疫大队有记录以来,到本次疫情发生的56年间,无霍乱疫情报告.这次霍乱疫情也是江西省从2009年以来的首次报告发病[2].
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湖北省2012年流行株O139霍乱弧菌脉冲场凝胶电泳分型分析
目的 分析3起霍乱疫情病原O139霍乱弧菌分子分型特征和遗传相关性,探讨O139霍乱疫情流行特征.方法 对2012年湖北省3起霍乱疫情分离鉴定的35株O139霍乱弧菌菌株用水煮法提取DNA,利用聚合酶链反应检测霍乱肠毒素CT基因;取新鲜培养的菌株,制备约4.3个麦氏单位的细菌悬浮液,经裂解、洗涤及限制性内切酶NotI和SfiI酶切后进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型,用凝胶成像仪获取电泳图像,分析DNA片段并用BioNumeries V4.6软件UPGMA方法(复选Dice相关系数)进行聚类分析. 结果 35株O139霍乱弧菌ctxA基因PCR扩增产物约为308 bp,分离自聚餐食用的凉菜、病人、带菌者及厕所标本(对应病人家)O139霍乱弧菌均为产毒株,经NotI酶切分为9种PFGE带型,SfiI酶切分为6种PFGE带型;A市2株病人分离菌和4株带菌者分离菌PFGE带型为KZGN11O139.CN0077+ KZGS12O139.CN0054,B市1株病人分离菌和1株厕所分离菌PFGE带型为KZGN11O139.CN0302+KZGS12O139.CN0058,C市和D市分离菌株优势型为KZGN11O139.CN0276+ KZGS12O139.CN0007,包括3株食品分离菌、2株厕所分离菌及16株病人和带菌者分离菌,另有6株PFGE带型呈现多样性. 结论 2012年湖北省霍乱疫情特点为散发以及聚餐导致的局限暴发,3起疫情的分离菌株带型各不相同,呈现多样性,其中2起为单一菌型感染,1起为混合菌型感染,传染来源复杂且不明确,提示应加强霍乱的病原学监测.
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云南省O139霍乱弧菌引起的一次食源性霍乱爆发
霍乱是由O1霍乱弧菌(Vibrio cholerae O1)或O139霍乱弧菌(Vibrio cholerae O139)引起的一种肠道传染病,是发展中国家的一个主要公共卫生问题,2000年以来世界卫生组织每年报告霍乱病例数范围是101383～184311例,其中非洲报告病例数占86.8%～96.9%,亚洲占3.1%～8.2%,拉丁美洲占0.0%～2.3%,非洲、亚洲和拉丁美洲报告病死率范围分别是1.7%～3.3%、0.3%～0.6%和0.0%[1].
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崇明县海水产品霍乱弧菌污染调查
[目的]了解崇明县海、水产品霍乱弧菌感染情况.[方法]共采样366份,其中甲鱼95份、蛙类65份、鱼类42份、贝壳类77份、甲壳类75份及其他类12份.用霍乱弧菌食物中毒的国家标准检验方法检测.[结果]共有5份样品检测出O139霍乱弧菌,其中甲鱼4份(4/95),甲壳类1份(1/75).[结论]需采取相应的预防措施防止霍乱疫情.
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O139群霍乱弧菌在不同水和温度下的存活时间及变异的观察
[目的] 探讨O139群霍乱弧菌(VC)在不同水体、不同温度的存活时间及其变异情况.[方法] 采集不同水样,选用2个O139 VC菌株分别制成模拟标本,放置于不同温度定期观察.[结果] O139 VC在4种不同自然水体的存活时间不长,除低温冰冻外,均少于15 d,多在1周内转阴;但同样4种水体经高压灭菌后存活期长短不一,存活3～287 d 并与不同水体、置不同温度有关;此外,O139 VC在模拟水中生存较长时间后,其菌落特征、菌体形态及其部分生物学特性均会发生变化,直至自发变异成L型菌而延长存活时间. [结论] O139 VC在不同水体、置不同温度时的存活时间不同,且可发生各种各样变异,包括自发变异为L型菌.
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O139霍乱弧菌在模拟水中自发L型变异及其意义探讨
[目的] 探讨O139霍乱弧菌在水中自发变异为L型菌的情况;[方法] 采用消毒模拟水样长期观察,定期培养,检查L型菌及原菌. [结果] 多次从模拟水中检出L型菌,但检出频率与不同水体、不同环境温度有关. [结论] O139霍乱弧菌在水中可自发变异成L型菌,且与该菌在水体中的存活时间长短有关.
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外环境样品中检出2株带毒力基因的O139霍乱弧菌
霍乱是由霍乱弧菌所引起的急性肠道传染病,是发病急、传播快、波及范围广、易引起流行的国际检疫传染病之一.浙江省杭州市余杭区每年均有散发病例或带菌者检出,作为我省霍乱防治监测点之一,我中心每年5～10月均开展外环境样品监测,在2007年7月的监测中分离出2株带毒力基因的0139群霍乱弧菌,该菌为我中心成立以来在外环境样品中首次检出.我们对该菌的形态及生化等生物学特性进行了观察,现将检测结果报告如下.
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四株与O139群霍乱弧菌血清交叉凝集的维罗纳气单胞菌温和生物变种分离鉴定
目的:2005年至2008年对4株疑似O139群霍乱弧菌进行系统的分离鉴定.方法:依据检验标准,对样本进行分离培养、血清学试验、系统生化鉴定(VITEK32)、PCR检测其分型及毒素基因等鉴定.结果:该4株菌为维罗纳气单胞菌温和生物变种,与O139群霍乱弧菌诊断血清有交叉凝集;且其中一株还与大肠埃希菌O157诊断血清有交叉凝集.结论:该4株菌是与O139群霍乱弧菌血清发生交叉凝集的维罗纳气单胞菌温和生物变种(AeromoNAs veronii biovar sobria);为避免实验结果出现假阳性,必须进行系统化鉴定,以确保菌株鉴定的准确性.特别是在处理霍乱疫情时病原菌的正确鉴定可为控制疫情提供科学依据.
关键词： O139霍乱弧菌 维罗纳气单胞菌温和生物变种 交叉凝集 分离鉴定 -
血平板辅助检出急性腹泻患者粪便标本中O139霍乱弧菌
目的 研究在使用广谱抗生素治疗后的急性腹泻患者粪便标本中,分离培养霍乱弧菌的方法.方法 将使用抗生素治疗后的急性腹泻患者粪便标本在接种碱性蛋白胨水和TCBS平板、庆大霉素平板等进行常规细菌分离培养的同时,接种血平板辅助培养,于37℃培养10 h～12 h后挑取可疑菌落再转种碱性琼脂平板,于37℃继续培养.结果 接种血平板37℃培养10h后形成直径2 mm左右的可疑菌落,再转种碱性琼脂平板37℃继续培养10 h后分离得到O139霍乱菌株,而直接接种碱性蛋白胨水、TCBS平板和庆大霉素平板等常规方法分离培养12 h仍无菌生长.结论 利用血平板辅助培养可提高使用广谱抗生素治疗后的急性腹泻患者粪便标本中霍乱弧菌分离培养成功率,减少因抗生素抑菌作用而导致的漏检.
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淮南市O139霍乱疫情3种快速检测方法的应用比较及菌株相似性分析
目的 通过建立霍乱弧菌的快速检测方法,提高霍乱疫情应急检测的速度和检出率,溯源可疑的传染源.方法 将细菌分离鉴定,实时荧光PCR快速检测,胶体金免疫层析快速试纸法同时用于检测霍乱疫情处置期间所采集的患者水样便、外环境水质、食品及水产品,并对其结果进行比较分析;将分离到的O139霍乱弧菌进行脉冲场凝胶(PF-GE)电泳分型分析.结果 3种检测方法中实时荧光PCR快速检测和胶体金免疫层析快速试纸法阳性率较高,常规细菌分离鉴定阳性率较低,3种方法各有优势及缺点;PFGE分子分型分析提示本次O139霍乱疫情传染源为水产市场中甲鱼带菌,污染病人食用食物所致.结论 荧光PCR快速检测和胶体金免疫层析快速试纸法是菌株分离培养方法的有效补充;PFGE对不同来源的霍乱弧菌遗传同源相关性分析有较好的分辨能力.
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O139霍乱弧菌快速检测试纸条临床效果评价
目的评价O139霍乱弧菌快速检测试纸条的临床使用效果.方法采集腹泻病人及霍乱病人的密切接触者粪便标本,分别做O139霍乱弧菌快速检测试纸条和常规细菌分离培养,以后者为金标准,计算O139霍乱弧菌快速检测试纸条的灵敏度和特异度.结果O139快速检测试纸条的灵敏度为100%,特异度为95.20%,约登指数为0.95,阳性预测值为46.67%,阴性预测值为100%.结论O139霍乱弧菌快速检测试纸条可做为一种筛检方法在临床推广使用.
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多联实时荧光PCR检测几种重要肠道致病菌的实验研究
目的 建立一种能同时检测志贺氏菌(Sh)、O139霍乱弧菌(O139VC)和空肠弯曲菌(CJ)的多联实时荧光PCR定量方法.方法 根据Sh的ipaH基因序列、O139VC的wbfR基因序列、CJ的c基因序列的开放读码框(orf),分别利用ABI Primer experess 2.0和DNAStar中的Primer Select软件设计出数对特异性的引物和探针,筛选出佳的各组引物和探针组合,对引物、探针的浓度、Mg2+浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,从而建立了检测临床标本中Sh、O139VC和CJ的多联荧光PCR反应体系和检测方法.结果 实验显示该方法具有特异性强,灵敏度高,均达到100copies/ml.结论 多联实时荧光PCR方法可同时定量地检测临床标本中Sh、O139 VC、CJ,结果显示快速简便,准确高效,有利于上述病原菌所致疾病的早期诊断和治疗.
关键词： 志贺氏菌 O139霍乱弧菌 多联实时荧光PCR空肠弯曲菌 -
2003年湖南省衡阳市O139霍乱疫情流行病学调查
目的查明2003年接连发生的9起O139霍乱疫情的传染来源、传播途径及各起疫情间的内在联系,为指导今后的霍乱防治工作提供依据.方法以现场流行病学调查并采用PFGE对分离的O139菌株进行分子生物学检测.结果各起疫情间的人群之间无生活往来和接触,无家庭聚集性,疫区在地理方面元联系,以前均未发生过霍乱疫情,当地人群无腹泻病大面积流行,外环境污染率低,参与聚餐和食用剩菜人员培养阳性率高,厨师带菌污染食物的可能性很小.聚餐的共同食物--甲鱼主要来源于同一市场,疫情间菌株PFGE图谱基本一致.结论这几起疫情之间不存在人与人之间的连续传播,为通过食物传播引起,可疑的食物是甲鱼.食品制作时生熟未彻底分开是造成食物污染的原因.提示在今后的O139群霍乱防制工作中要重点加强对甲鱼等海水产品的监测,加强农村集体聚餐的卫生指导管理.
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两起由集体聚餐引起的O139霍乱弧菌感染
霍乱是由O1血清群和O139血清群霍乱弧菌引起的经消化道感染的急性肠道传染病,病人和带菌者是本病的传染源.夏秋季节为本病高发期[1].
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O139霍乱弧菌的由来
O139霍乱弧菌(VCO139)是O139霍乱的病原体,1992年10月先在印度南部城市马德拉斯(Madras)发现[1],由于它与O1-O138群霍乱弧菌诊断血清均不凝集,日本专家岛田(Shimada)等将其命名为O139血清群,并将"Bengal"作为O139群霍乱弧菌的同义词,以此纪念该菌种在孟加拉湾的海滨城市首次分离到[2].VCO139的出现并迅速传播,引起了世界的普遍关注,由于人群缺乏对O139霍乱弧菌的免疫力,极易发生爆发和流行,有些专家认为这可能是第八次霍乱世界大流行的开始[3].因此,对O139霍乱的防治是我们面临的一个新课题.关于VCO139的来源也一直是许多专家研究的热点问题.目前推测VCO139的来源有三种可能性.
关键词： O139霍乱弧菌 -
O139霍乱弧菌的毒素和耐药性
O139霍乱弧菌(VCO139)是引起O139霍乱的病原菌,1992年10月19日起源于印度南部城市马德拉斯,几周之内传播到印度其他地区,同年12月孟加拉国出现O139霍乱流行[1].到1993年3月两国报告10多万病人,一千多人死亡,同年泰国、中国、巴基斯坦等国家报告了O139霍乱,在美国等国家和地区出现了输入性O139霍乱病例[2].由于O139霍乱在临床上与EL Tor霍乱无法区分,有些专家甚至担心由于人群缺乏对O139的免疫力,极易发生爆发与流行,甚至有可能引发第八次世界霍乱大流行[3,4].霍乱弧菌产生多种毒素,在构成霍乱弧菌的毒力中起到关键作用,那么,VCO139能产生哪些毒素呢?它的耐药性怎样呢?现将目前有关研究简要总结如下:
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膜免疫层析一步法在霍乱弧菌诊断中的应用
目的:应用膜免疫层析(免疫沾棒)快速诊断01群霍乱弧菌.方法:采用病原学方法和免疫沾棒对309份标本和20株霍乱阳性菌株进行平行检验.结果:免疫沾棒的灵敏度为10u个/ml菌液,免疫沾棒特异性强.结论:目前的膜免疫层析试剂不适于临床快速诊断,仅仅只能作为一种辅助诊断技术用于外环境的监测和临床标本的诊断.还需研发灵敏度更高的膜免疫层析试剂盒.
