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恶性疟原虫丝氨酸重复抗原部分基因的克隆及其表达
采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫云南株(PFD-3/YN)丝氨酸重复抗原基因片段,经基因序列测定后克隆于pWR450-1融合蛋白表达载体,并转化大肠杆菌TG1.在不同菌体浓度及不同剂量IPTG诱导下检测SERA融合蛋白的表达.采用dot-ELISA及Western-blot分析对表达产物进行鉴定,结果显示SERA基因与pWR450-1重组后在大肠杆菌TG1中表达一72kDa的融合蛋白,当工程菌OD590值为0.8～1.2时,加入终浓度1mmol/L IPTG进行诱导,表达量较高.dot-ELISA和Western blot分析表明SERA基因表达产物能被抗SERA单克隆抗体所识别.
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3种恶性疟原虫红内期抗原基因的测序和序列分析
目的测定我国恶性疟原虫海南株(FCC1/HN)谷氨酸富集蛋白(GARP)、丝氨酸重复抗原(SERA)和裂殖子表面蛋白1(MSA1)基因序列,并进行序列分析. 方法采用PCR技术从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中扩增GARP、SERA和MSA1基因片段,分别插入到测序载体上进行测序.应用DNAstar软件辅助分析3种抗原基因的结构及3种抗原在不同恶性疟原虫株间的分化情况. 结果恶性疟原虫FCC1/HN株GARP基因全长2 263 bp,编码682个氨基酸残基,谷氨酸占23.61 %,包含5个典型的氨基酸重复序列;SERA基因全长3 448 bp,编码995个氨基酸残基,丝氨酸含量为10.65 %,包含1个连续32个丝氨酸(S)残基的序列;MSA1基因全长5 085 bp,编码1 694个氨基酸残基,MSA1的氨基酸序列符合MAD20型特征.恶性疟原虫FCC1/HN株与3D7、FC27株GARP的序列差异主要集中于C-末端;FCC1/HN株与FCR3、3D7、FCBR、Hondulas-1株SERA的序列差异主要集中于N-端.FCC1/HN株与MAD20、3D7、HN1、HN2、FC27、RO-71、RO-33、CAMP和Palo-alto株MSA1的同源性高,K1和WELLCOME株MSA1的同源性高,各分离株MSA1的序列差异主要处于第2至16分区. 结论了解了恶性疟原虫FCC1/HN株GARP、SERA和MSA1的初级结构及其编码基因结构.恶性疟原虫FCC1/HN株与其它分离株GARP和SERA的氨基酸序列差异集中于特定区段,FCC1/HN株MSA1不同分区的氨基酸序列与其它分离株MSA1的对应序列存在不同程度的差异.
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017用基因枪和肌肉注射法接种恶性疟原虫丝氨酸重复抗原DNA疫苗诱导的免疫反应
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恶性疟原虫海南株丝氨酸重复抗原部分基因序列分析
该文采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫海南株(FCC-1/HN) SERA基因片段,并将该基因片克隆于M13噬菌体,用双脱氧链末端终止法进行测序,应用PCGENE软件对该基因序列进行了分析,结果显示该基因片段长度为453 bp,A+T/G+C为2.6:1,符合恶性疟原虫结构基因的特点.同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守,我国FCC-1/HN虫株SERA与B1、B2、B3(巴西)株及S16(塞内加尔)株仅一个氨基酸不同,与FCR3(刚比亚)、FCBR(哥伦比亚)、及S14、S15(塞内加尔)等其它虫株SERA基因序列完全一致.抗原表位预测分析显示该多肽N端和C端可能有抗原表位存在.
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恶性疟原虫丝氨酸重复抗原基因在大肠杆菌中的表达
采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫云南株(PFD-3/YN)丝氨酸重复抗原基因片段,经基因序列测定后克隆于pGEX-4T-1融合蛋白表达载体,并转化大肠杆菌TG1.SERA基因与pGEX-4T-1重组后能在大肠杆菌TG1中表达一45KDa的融合蛋白,当工程菌OD590为0.8～1.0时,加入终浓度1mmol/L IPTG进行诱导,表达量较高.采用dot-ELISA对表达产物进行鉴定.结果表明SERA融合蛋白能被抗SERA单克隆抗体所识别.
