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三类整合酶基因(intⅠ)的简并引物PCR方法建立及应用
目的建立一种筛选第一、二和三类整合酶基因(intⅠ)的简并引物PCR方法,并对临床菌株进行整合子筛选和分类. 方法用梯度PCR方法确定PCR反应的适退火温度,并对16株临床标本进行PCR扩增,通过对阳性PCR扩增产物的限制性内切酶分析进行整合子分类. 结果根据梯度PCR结果确定适退火温度为46℃.应用简并引物PCR法检测16株临床分离株,其中8株阳性,经酶切分类后确定其中4株只含有第一类整合酶基因,有3株含有第二类整合酶基因,1株同时含有第一类和第二类整合酶基因. 结论建立了一种同时筛选第一、二和三类整合子的方法,实际检测显示其可行性,为全面细致研究整合子介导的细菌耐药提供了一种快速、简便的方法.
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铜绿假单胞菌群体感应QS系统对Ⅰ类整合子intI1基因调控作用的初步研究
目的 研究铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子阳性株群体感应系统基因lasR与Ⅰ类整合子整合酶基因intI1表达水平的相关性,初步探讨群体感应系统对Ⅰ类整合子的调控机制.方法 通过荧光定量RT-PCR方法检测铜绿假单胞菌群体QS信号分子受体基因lasR和Ⅰ类整合子整合酶基因intI1在生物被膜中与阿奇霉素菌液中mRNA的表达水平,分析两基因表达的相关性.结果 铜绿假单胞菌群体感应系统lasR基因及Ⅰ类整合子intI1基因表达水平在生物被膜中均较在阿奇霉素菌液中升高(P＜0.05),且两者表达水平呈正相关性(r=0.565,P＜0.05).结论 铜绿假单胞菌群lasR和intI1基因表达呈正相关,且阿奇霉素对Ⅰ类整合子intI1基因表达抑制作用明显,提示intI1基因表达可能与群体感应系统的调控作用有关.
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鲍氏不动杆菌儿童分离株qacE△1-sul1及IntⅠ1基因与抗菌药物多药耐药性关系研究
目的 鲍氏不动杆菌(ABA)在儿科临床分离株的耐消毒剂-磺胺基因(qacE△1-sul1)、整合酶基因(IntⅠ1)以及与该基因阳性细菌多药耐药的关系.方法 28株ABA收集自2006年分离的儿科住院肺炎患儿的深部痰培养标本,均采用VITEK-32全自动微生物鉴定仪GNI和GNS卡进行细菌鉴定和药敏试验;qacE△1-sul1与IntⅠ1基因检测用聚合酶链反应(PCR)方法.结果 检测的28株ABA中3株呈多药耐药性,阳性率10.71%,复方新诺明(SXT)检出4株耐药菌株,耐药率14.29%,qacE△1-sul1基因检出11株,阳性率为39.29%,IntⅠ1基因检出4株,阳性率14.29%;4株复方新诺明耐药菌株(包括3株多药耐药株)均检出qacE△1-sul1和IntⅠ1基因,其余7株qacE△1-sul1基因阳性菌株对复方新诺明表型敏感.结论 ABA儿童分离株对SXT耐药的主要原因是获得了qacE△1-sul1基因;对于复方新诺明表型敏感,但qacE△1-sul1基因阳性菌株也应引起重视,防止在抗菌药物的压力下,出现耐药;因qacE△1-sul1、IntⅠ1基因两者之一为阳性即可表明该菌株携带Ⅰ类整合子,即可能含有多药耐药基因,其对抗菌药物表现多药耐药性,应引起儿科医生的高度重视.
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临床分离肺炎克雷伯菌中整合酶基因的检测分析
近年来肺炎克雷伯菌已成为医院感染的重要病原菌,同时院内分离的肺炎克雷伯菌往往有较高的产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)率并呈现多重耐药性[1,2].在肠杆菌科细菌耐药机制中,整合子起着非常重要的作用[3],通过位点特异性基因重组机制使细菌耐药基因盒( gene cassette)整合在一起,形成多种耐药基因的组合和排列,导致不同耐药基因的水平传播.
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儿童肠球菌多重耐药与Ⅰ类整合子的检测
目的 了解儿童临床分离肠球菌的耐药特征及其多重耐药与Ⅰ类整合子的相互关系.方法 采用琼脂稀释法测定常用抗菌药物对152株肠球菌的低抑菌浓度(MIC),用聚合酶链反应(PCR)检测肠球菌Ⅰ类整合子和Ⅰ类整合酶基因.结果 屎肠球菌对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、环丙沙星的耐药率分别为96.8%、95.2%和84.1%,粪肠球菌对上述3种抗菌药物的耐药率分别为23.6%、18.0%和49.4%,屎肠球菌的耐药率明显高于粪肠球菌(P<0.001);粪肠球菌中有2株对万古霉素的MIC为8 μg/mL,粪肠球菌和屎肠球菌对替考拉宁均敏感.儿童多重耐药肠球菌发生率高达93.7%.屎肠球菌耐药模式以耐氨苄西林、红霉素、环丙沙星、利福平、四环素、高水平庆大霉素6种抗菌药物为主,占屎肠球菌的59%,粪肠球菌以耐四环素、红霉素、利福平、氯霉素、高水平庆大霉素5种抗菌药物为主,占粪肠球菌的26%.全部152株肠球菌未检测到Ⅰ类整合子,仅有5株检测到Ⅰ类整合酶基因.结论 儿童肠球菌多重耐药十分严重,儿童肠球菌多重耐药与Ⅰ类整合子和Ⅰ类整合酶基因尚无明显关系.
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多重PCR方法检测多耐药鲍曼不动杆菌基因型
目的 建立一种适于临床微生物实验室快速检测多耐药鲍曼不动杆菌基因的多重PCR方法 .方法 筛选临床分离鉴定的多耐药鲍曼不动杆菌105株;用热煮沸法提取DNA,采用多重PCR技术,优化反应条件,同时扩增OXA酶基因(blaOXA-23-likeblaOXA-24-likeblaOXA-51-likeblaOXA-58-like)和整合酶基因(intI 1,intI 2),扩增产物经凝胶成像系统分析.结果 105株多耐药鲍曼不动杆菌中,76株是blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+intI 1基因型,18株是blaOXA-51-like+intI 1基因型,10株是blaOXA-51-like+blaOXA-23-like.基因型,1株是blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+blaOXA-58-like基因型.未检测出携带有blaOXA-24-like和intI 2基因的菌株.结论多耐药鲍曼不动杆菌的耐药性及流行趋势与其携带的OXA酶基因和整合酶基因相关.
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肺炎克雷伯菌连续分离株耐药性及Ⅰ类整合子遗传标记研究
目的 了解肺炎克雷伯菌(KPN)连续分离株整合酶基因存在情况和耐药性.方法 应用双基因聚合酶链反应法对44株KPN连续分离株进行检测.结果 44株KPN菌连续分离株中qacE△1-sul1基因阳性12株(27.3%).结论 在肠杆菌科细菌耐药机制中,Ⅰ类整合子起着非常重要的作用,它的3'-保守端有季胺类化合物(消毒剂)的耐药基因(qacE△1)和磺胺耐药基因(sul1)重叠基因,为Ⅰ类整合子遗传标记,整合子使细菌能够很快获得新的耐药基因以适应环境要求.
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亚胺培南耐药铜绿假单胞菌整合酶基因研究
目的 通过分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PAE)整合子所携带的耐药基因,探讨其耐药机制,为临床用药、院内感染防控和新药研发提供参考.方法 根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)2015年标准,应用纸片扩散法进行药敏试验,采用多重聚合酶链式反应对临床分离的48株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌进行整合酶基因(int)检测.结果 药敏试验示48株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌均为广泛耐株.5株为Ⅰ类整合酶阳性;24株为Ⅱ类整合酶阳性;6株Ⅰ、Ⅱ类整合酶均为阳性;未检出Ⅲ类整合酶.结论 亚胺培南耐药铜绿假单胞菌大多具备Ⅰ、Ⅱ类整合酶基因,这是泛耐株的重要耐药机制.
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多重PCR筛选临床细菌耐药整合子基因
目的:建立多重PCR方法并对临床菌株进行扩增及整合子分类.方法:采用多重PCR对21株来自临床的耐药菌株进行了第一、二和三类整合酶基因(int I)筛选.结果:16株携带第一类整合酶基因;1株携带第一和第二类整合酶基因;2株含第二类整合酶基因;1株含第三类整合酶基因;1株不含第一、二和三类整合酶基因.结论:筛选细菌耐药整合子基因分类的多重PCR方法简便可靠;整合子广泛存在于临床耐药细菌中.
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老年呼吸疾病住院患者嗜麦芽窄食单胞菌感染及耐药情况分析
目的 探讨老年呼吸疾病患者嗜麦芽窄食单胞菌(SMA)感染及耐药情况.方法 选择2013年至2017年期间住院的3719例老年呼吸疾病患者,分离所有SMA感染患者痰标本中的SMA,并检测其耐药性、整合酶基因及耐药基因.结果 3719例患者中,有402例感染SMA,感染率为10.8％,感染率呈逐年上升的趋势(P<0.05).SMA对头孢他啶、替卡西林/克拉维酸、米诺环素、复方新诺明、替加环素和左氧氟沙星的耐药率均呈逐年增加的趋势(均P<0.05).SMA的消毒剂-磺胺类耐药基因1、Ⅰ类整合子1类整合酶(IntⅠ1)、甲氧苄啶耐药基因dfrA12阳性率呈逐年上升的趋势(P<0.05).耐药菌株的IntⅠ1检出率高于非耐药菌株(P<0.05).结论 老年呼吸疾病住院患者SMA感染率较高,其SMA感染率及耐药率呈逐年增加的趋势可能与整合酶基因有关.
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细菌耐药整合子intI分类的多重PCR方法的建立及应用
目的建立快速筛选细菌耐药整合子的分类方法,并对21株来自临床的菌株进行整合子筛选和分类.方法根据GenBank/EMBL内的第一、第二和第三类的整合酶序列,通过软件Clustal W的多重比对分析设计出各类整合子的特异性引物,用对照菌株建立多重PCR方法并对21株临床菌株进行PCR扩增,通过其PCR扩增产物片段大小的不同进行整合子分类.结果对照菌株实验结果显示,21株临床分离菌株中,15株在565bp处有扩增片段,即为含有第一类整合酶基因;4株在403bp处有扩增片段,即含有第二类整合酶基因;1株在565bp和403bp处均有扩增片段,提示其同时含有第一、二类整合酶基因;1株没有得到任何扩增片段,即不含有这三类整合酶基因;在被测菌株中未发现第三类整合酶基因的阳性菌株.结论本文报道的筛选细菌耐药整合酶基因分类的多重PCR方法效果良好,具有可行性,为更加全面细致研究整合子类型以及整合子介导的细菌耐药机制提供了一种简单易行、快捷有效的方法.
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铜绿假单胞菌群体感应系统分子受体基因lasR与Ⅰ类整合酶intI1基因表达的相关性分析
目的 通过研究铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子阳性株群体感应系统基因lasR与Ⅰ类整合子整合酶基因intI1表达水平的相关性,初步探讨群体感应系统对Ⅰ类整合子的调控机制.方法 通过荧光定量RT-PCR方法检测铜绿假单胞菌群体QS信号分子受体基因lasR和Ⅰ类整合子整合酶基因intI1在液相菌与生物被膜菌中mRNA的表达水平,分析两基因表达的相关性.结果 铜绿假单胞菌在生物被膜中群体感应系统lasR基因及Ⅰ类整合子intIl基因的mRNA表达水平高于液相菌,两者表达水平呈现正相关性(r=0.695,P＜0.05).结论 铜绿假单胞菌群lasR和intI1基因表达呈正相关,提示intI1基因表达可能与群体感应系统的调控作用有关.
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阿奇霉素对铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因表达的影响
目的 通过研究阿奇霉素对铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子整合酶基因intI1表达的影响,初步探讨阿奇霉素对Ⅰ类整合子的抑制机制.方法 采用荧光定量RT-PCR方法检测铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因intI1在不同阿奇霉素浓度中mRNA的表达水平,分析阿奇霉素对intI1表达的影响.结果 阿奇霉素对铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因intI1的表达抑制作用明显,Ⅰ类整合酶基因intI1mRNA随着阿奇霉素浓度的增高表达水平呈明显下降趋势.结论 阿奇霉素对Ⅰ类整合酶基因intI1表达具有明显抑制作用,提示可能与阿奇霉素对铜绿假单胞菌群体感应系统抑制机制间接相关.
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大肠埃希菌连续分离株耐药性与三类整合酶基因的研究
目的 了解大肠埃希菌连续分离株整合酶基因存在情况和耐药性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)法对耐药的大肠埃希菌进行int I1、int I2、int I3三类整合酶基因检测与分析.结果 PCR结果显示:整合酶基因检测68株中int I1基因阳性47株(69.1%),intI2基因阳性1株(1.5%),无intI3基因阳性.结论 整合子在细菌耐药性播散过程中起非常重要的作用,整合子使细菌能够很快获得新的耐药基因以适应环境要求.
