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抗生素抗性基因传播及潜在危害
抗生素的使用,为挽救生命做出了巨大的贡献,是一项及其伟大的发现.但是随着生活节奏的加快及经济的发展,抗生素滥用现状非常严重,科学家将其称作新型的环境污染,人们也越来越认识到其严重的后果.相关的研究也陆续展开,关于抗生素的来源,其目前在环境中的水平含量,抗生素中抗性基因的传播机制等,如何有效的预防抗生素抗性基因的扩散传播,有效的降解抗生素的抗性基因都是目前研究的重点;如何改进污水处理流程,改进工艺更好的降解抗性基因,以及如何有效的避免多重抗性的产生,多重抗性产生的原理依据有哪些等也是非常严重的挑战.这些都直接危害生态环境及人们的身体健康.超级细菌的出现更是叫人们恐慌,人们也清楚的认识到如何不采取进一步的措施,任由其发展的话,总有一天我们会到无药可用的地步.本文从抗生素的基础知识出发,首先介绍了抗生素的来源,抗生素抗性基因的转移,以及如何有效的控制抗生素抗性基因的传播扩散.后针对目前的现状,讨论将来研究的重点方向.为抗生素更好地为人类服务,减少污染提出策略.
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24株医院感染白色念珠菌对醋酸氯己定的抗性研究
目的 研究临床分离的白色念珠菌抗性基因qacE△1-sulI、qac A/B的携带情况及其对醋酸氯己定的抗性水平.方法 采用PCR方法测定qacE△1-sulI、qac A/B基因,通过沙氏培养液稀释法检测其对消毒剂的抗性变化,并于白色念珠菌标准菌株进行比较.结果 临床分离的24株白色念珠菌,其抗性基因qacE△1-SulI、qacA/B检测均为阴性.醋酸氯己定对其中11株的小抑菌浓度(MIC)低于标准菌株,其余均与标准菌株相同.其中,有1株白色念珠菌的小杀菌浓度(MBC)高于标准菌株,7株的MBC值低于标准菌株,其余均与标准菌株相同.结论 白色念珠菌对醋酸氯己定可能尚未产生抗性.
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对碘伏抗性的研究
目的：研究临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对碘伏消毒剂的抗性变化及其抗消毒剂基因携带情况。方法采用肉汤稀释法和基因检测技术，对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性变化进行了观察。结果共检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌152株，其中有11株携带qacA/B基因，携带率为7.24％。碘伏消毒剂对携带qacA/B基因MRSA菌株的MIC值为100~300 mg/L范围，有4株菌的MIC值为300 mg/L。碘伏消毒剂对非携带qacA/B基因的MRSA菌株MIC值为100~200 mg/L范围。结论携带qacA/B基因的MRSA菌株对碘伏消毒剂的抗性有增大趋势，其抗性可能与qacA/B基因有关。
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 碘伏消毒剂 抗性 抗性基因 -
临床分离肺炎克雷伯杆菌对消毒剂耐药性观察
目的 观察临床分离的肺炎克雷伯杆菌对常用消毒剂的耐药情况及抗消毒剂基因携带状况.方法 采用琼脂扩散法和聚合酶链反应法,对96株临床肺炎克雷伯杆菌抗消毒剂和抗性基因携带情况进行检测.结果 3种季铵盐和三氯生对96株肺炎克雷伯杆菌的MIC值均高于标准菌株,氯己定对96株肺炎克雷伯菌中的93株MIC值高于标准株.临床分离的肺炎克雷伯菌qacE△1和qacE携带率均为76.0％;qacE-qacE△1携带率为70.8％.qacE、qacE△1和sugE(c)阳性菌株对三氯生、溴化铵、苯扎氯铵和醋酸氯己定等消毒剂抗性较阴性菌株强.结论 该医院临床分离的肺炎克雷伯杆菌对3类低效消毒剂显示出抗力增强的趋势,消毒剂抗性基因携带率也比较高,提示慎用低效消毒剂消毒关键性物品.
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三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因检测及其对碘伏的抗性研究
目的 了解临床分离的革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性.方法 采用基因扩增法和稀释法对临床分离的三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因和抗菌性能进行了检测,并与标准菌株作平行比较检测.结果 临床分离的三种21株革兰阴性杆菌中,检出抗消毒剂基因(qaeEAl-sul Ⅰ)阳性菌株有13株,阳性率为61.9%;三种菌抗消毒剂基因携带率之间无明显差别,大肠杆菌标准株抗消毒剂基因检测阴性.有1株抗消毒剂基因阳性的铜绿假单胞菌对碘伏的小抑菌浓度明显高于其标准株.结论 临床分离的三种21株革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带率比较高,但其对碘伏消毒剂的抗性未观察到明显变化.
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葡萄球菌消毒剂抗性基因研究进展
葡萄球菌多定植于人和动物的皮肤、粘膜,也可在环境中检出,传播途径广、致病力强,是导致医院感染的重要致病菌.医院长期大量使用消毒剂进行感染控制,已导致葡萄球菌消毒剂抗性菌株出现和传播,给感染控制带来新挑战.以下就此现象及研究进展进行综述.1 细菌对消毒剂抗性定义目前细菌对消毒剂抗性定义以Russell的描述较为常用:细菌对消毒剂抗性指在能杀灭或抑制绝大部分该种细菌的消毒剂浓度下出现不能被杀灭或抑制的菌株[1].多数学者认为这是一个相对概念,与菌量、消毒剂浓度和作用时间有关,还受到pH值、温度和有机物等多种因素的影响.
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中国蒙古族人群中人类免疫缺陷病毒1感染相关的基因多态性的初步研究
目的 调查中国蒙古族人群中与人类免疫缺陷病毒1(HIV-1)感染相关的等位基因CCR5-Δ32、CCR2b-64I和SDF1-3′A的频率和多态性分布.方法 随机采集血样,提取基因组DNA,经聚合酶链式反应(PCR)或聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)电泳分析,计算各个突变基因的频率;并对其群体分布、性别分布和三者的相关性进行统计分析,同时与其他已报道的种族人群进行比较.结果 等位基因的突变频率分别为CCR5-Δ32 1.1%、CCR2b-64I 24.8%、SDF1-3′A 22.0%.三种突变等位基因群体分布均符合Hardy-Weinberg平衡;CCR2b-64I突变频率在性别上的分布有明显差异(P＜0.1),女性的分布频率高于男性,而其他两个等位基因在性别之间差异无显著性;任何两个基因之间也未发现有相关性.结论 同美国白种人群相比,中国蒙古族CCR2b-64I和SDF1-3′A等位基因的突变频率比较高,与汉族人群的接近,而CCR5-Δ32突变频率比美国白人低,而比汉族人群的高,有关机制有待于进一步阐明.
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中缅边境地区恶性疟原虫药物抗性基因多态性分析
目的 研究中缅边境地区恶性疟原虫4个与抗疟药抗性相关基因的多态性,并与该地区以往检测结果进行比较,了解和分析该地区恶性疟原虫药物抗性新趋势. 方法 应用巢氏PCR或普通PCR方法检测中缅边境地区2014年恶性疟现症病人血样中恶性疟原虫4个抗药相关基因点突变情况,并与2007-2009年检测结果进行比较分析. 结果 该地区的恶性疟原虫DHFR基因51,59,108和164位点氨基酸有不同程度突变,其中三突变NRNL型为28.1％,IRNI型为1o.0％,四突变IRNL型为61.9％,未见野生型和双突变.对PfDHPS的436,437,540和581位点的突变情况进行分析,仅见三突变,突变频率分别为SGEG型14.4％,SGNG型35.6％,AGEA型50.o％.对PfMDR1的86和1246位点进行分析,仅有86位点突变,频率为32％.未见1246位点突变.对PfATPase6分子的多态性分析显示全部为野生型,未见突变型. 结论 中缅边境地区恶性疟原虫抗性相关基因多态性与以往年比较有变化,其中DHFR、MDR1基因突变率升高,可为该地区恶性疟的防治提供参考.
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杭州市淡色库蚊对杀虫剂的抗性及抗性基因研究
目的了解杭州市淡色库蚊对杀虫剂的抗性及抗性基因,为蚊虫防制提供依据.方法 浸液法和PCR技术.结果 杭州市淡色库蚊对溴氰菊酯的抗性倍数为9.10倍,敌敌畏为4.52倍,三氯杀虫酯为2.77倍,残杀威为2.04倍,高效氯氰菊酯、丙烯菊酯未形成抗性;经PCR扩增,检测到11个与抗性相关的基因,其中P450类1个,钠离子通道基因2个,酯酶基因2个,乙酰胆碱酯酶受体基因1个,超氧化物歧化酶基因1个,其他相关基因4个.结论 杭州市淡色库蚊对溴氰菊酯和敌敌畏产生了抗性;PCR检测,存在11个抗性相关基因.
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复合PCR-RFLP技术用于尖音库蚊复组抗性相关酯酶基因分子分型
目的 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测法,建立尖音库蚊抗性酯酶等位基因分型方法.方法 根据尖音库蚊抗性酯酶基因保守区序列设计引物;提取单个蚊虫基因组DNA,采用PCR-RFLP分析的方法,对抗性酯酶等位基因分型.结果 酯酶基因扩增片段长度为860 bp,经限制性内切酶酶切后,尖音库蚊抗性Est-β11纯合型有5条带(70、89、147、198和347 bp);Est-β2纯合型出现4条带(60、147、207和437 bp);Est-β11/Est-β2杂合型出现5条带;Est-βN纯合型出现3条带(147、207和506 bp).结论 PCR-RFLP方法能快速、有效地检测尖音库蚊抗性酯酶等位基因类型.
关键词： 尖音库蚊复组 抗性基因 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 分子分型 -
浙江省不同地区淡色库蚊杀虫剂抗药性监测
目的 对浙江省不同地区淡色库蚊抗药性水平进行调查,了解淡色库蚊的抗性表型与有关基因特征及其相关性,为浙江省蚊虫控制提供科学依据.方法 淡色库蚊抗药性表型采用幼虫浸渍法;对浙江省4个区域的淡色库蚊进行抗药性测定,基因型研究采用PCR扩增后测序确定.结果 不同地区淡色库蚊抗药性表型差异较大,对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、丙烯菊酯、敌敌畏、三氯杀虫酯、残杀威的半数致死浓度(LC50)分别在同类药物抗性差异变化范围为2.1～42.8倍,其中以高效氯氰菊酯抗性差异高.舟山种群拟除虫菊酯类药物抗性水平明显高于其他地区,其拟除虫菊酯抗性相关基因vssc基因具有较高多态性,部分样本vssc基因内含子区域出现3个紧邻的大小分别为20、53和40 bp的片段缺失.结论 浙江省不同地区淡色库蚊抗性表型差异较大,抗性基因监测发现舟山种群kdr基因存在较复杂的多态性,是否为导致其抗性表型变化的直接原因还有待进一步研究证实.
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病媒昆虫抗药性产生的分子机制
病媒昆虫抗药性的产生是在杀虫剂的选择下,带有抗性基因的昆虫个体存活下来并繁殖后代的结果[1].近年来,随着分子生物学技术在昆虫研究中的应用,病媒昆虫抗药性的分子机制研究取得了一些重要成果.笔者主要就病媒昆虫代谢抗性和靶标抗性的分子机制研究进展作简要综述.
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提高逆转录病毒滴度和靶细胞感染率方法的建立与应用
逆转录病毒载体广泛用于基因靶向治疗,干细胞基因工程,以及感染其他方法难以转染的细胞系,如某些肿瘤细胞,神经细胞,原代培养细胞等.重组小鼠干细胞病毒(recombinant murine stem cell virus,rMSCV)是一种常用的逆转录病毒载体,除可携带目的基因或DNA片段外,该载体还有药物抗性基因和绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)基因.
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人白细胞抗原多态性与HIV/AIDS的关联及其在疫苗设计中的意义
人白细胞抗原(HLA)系统是目前所知为复杂的遗传多态性系统,它们负责免疫细胞与其它细胞间的相互识别,参与诱导和调控免疫应答反应.HLA与疾病相关性的研究至今已有30多年的历史,HLA的Ⅰ类和Ⅱ类抗原在某些传染病和自身免疫病的作用,已被人们广泛认识.艾滋病(AIDS)是由艾滋病病毒(HIV)感染引起的严重传染性疾病,目前尚无有效的预防性疫苗和治愈措施.近几年来的研究表明,HLA与HIV感染及发病进程存在关联,有些HLA型别的个体表现出对该疾病的天然抗性,虽多次暴露而不被感染.相反,有些型别的个体则对HIV易感.寻找AIDS的易感和抗性基因是一项非常重要的研究工作,对AIDS与HLA相关性的探讨或许可以另辟蹊径,来阐明疾病的发生机制,为AIDS的基因治疗和免疫预防提供有效的切入途径.
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MRSA和鲍曼不动杆菌抗药基因检测及对3种醇类消毒剂抗性研究
目的 观察耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和鲍曼不动杆菌(ABA)对3 种醇类消毒剂的抗性与耐药基因携带情况.方法 选择小抑菌浓度(MIC)试验、悬液定量杀菌试验和耐药基因PCR检测方法进行研究,并与标准菌株作平行比较检测.结果 2株MRSA对3种醇的MIC值高于6株鲍曼不动杆菌,稍高于标准菌株6538和8099.杀菌实验结果显示,3种醇对2株MRSA的杀灭对数值均低于标准株6538和8099,对MRSA-1杀灭对数值大于MRSA-2,对6株鲍曼不动杆菌的杀灭对数值大于标准株8099;作用至1 min时,3种醇均能将8099全部杀灭,对6株鲍曼不动杆菌的杀灭对数值D162＜3070122＜3070341＜3040217＜WJ0147,WJ0135与WJ0147相似.PCR 结果显示,鲍曼不动杆菌D162、3070122、3070341、3040217株qacEΔ1基因阳性;鲍曼不动杆菌3040217和WJ0135株NDM1基因阳性.结论 2株MRSA对消毒剂的抗性普遍高于标准菌株,6株鲍曼不动杆菌对消毒剂的抗性普遍低于标准菌株;3种醇的杀灭效果以"乙醇+正丙醇"强,"乙醇+异丙醇"次之,单独乙醇弱;PCR 检测发现4株菌携带耐消毒剂基因,2株携带NDM1基因.
关键词： 醇类消毒剂 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 鲍曼不动杆菌 抗性基因 -
霍乱弧菌超级整合子
整合子(integron)的主要的功能是一些抗生素抗性基因的获得和在不同革兰阴性细菌中间的转移.近在霍乱弧菌发现的超级整合子(super-integron,SI),扩大了其在基因进化过程中的作用.霍乱弧菌超级整合子在染色体的一个集中的部位汇集了上百个基因盒,后来发现这种结构在其他一些革兰阴性细菌同样存在.我们就整合子的特点,霍乱弧菌超级整合子的结构及基因特点,以及超级整合子与整合子的关系等进行综述.
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天津海河流域抗生素抗性基因分布特征及与指示微生物的关系
目的 研究海河流域抗生素抗性基因的时空间分布规律及与指示微生物的相关性.方法 选取天津海河流域7个采样点连续采集水样12个月,分别对水样中7大类8种抗生素抗性基因、耐热大肠菌群和大肠埃希菌进行检测和分析.结果 全年检出的8种抗生素抗性基因(检出率)分别为sul1 (79.8％),aac(6')-lb (76.2％),blaNDM-1(60.7％),gyrA(57.1％),tetA(56.0％),clmA(53.6％),ermB(51.2％)和ampC(47.6％).磺胺类抗性基因sul1的大拷贝数达到6.4×109copies/ml,为海河流域中的优势抗性基因.经统计学分析可知春、夏季抗性基因的检出率显著高于秋、冬季,而各采样点抗性基因的分布无显著差异.ermB 、aac(6')-1b 、clmA基因分布与2种指示菌均具有显著相关性,其它5种抗性基因与指示菌之间未见相关性.结论 抗性基因在海河中呈现春、夏季高于秋、冬季的规律,现有水中指示微生物指标对大部分抗性基因不具有指示作用.
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公共消毒环境中金黄色葡萄球菌对季铵盐类消毒剂抗性研究
目的 检测消毒环境分离的金黄色葡萄球菌对季铵盐类化合物的抗药性和相关抗性基因,为有效控制细菌抗药性的发展提供科学依据.方法 收集医院公共消毒环境中分离的金黄色葡萄球菌共26株,采用小抑菌浓度(MIC)方法 对其抗药性进行检测,PCR扩增金黄色葡萄球菌中耐季铵盐消毒剂的qacA/B,smr,qacG,qacH和qacE△1基因.结果26株葡萄球菌中,其中15株MIC值大于标准菌株,均在45 μg/ml以上.其中9株携带qacA/B,1株携带smr,qacG、qacH和qacE△1均未检出.结论 医院消毒环境中金黄色葡萄球菌对季铵盐的抗药率高,应加强耐药监测,合理使用消毒剂.
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核酶对白血病耐药细胞株K562/A02耐药性逆转的研究
肿瘤耐药及其逆转是当今肿瘤治疗研究的热点.耐药的发生与多药耐药基因(mdr1)及其编码的P糖蛋白(P-gp)过度表达关系密切.我们采用电击基因导入法将特异切割mdr1 mRNA的锤头状核酶基因导入白血病耐药细胞株K562/A02,研究该核酶抑制mdr1基因及P-gp表达,逆转肿瘤细胞耐药性的作用.材料和方法1 细胞株 K562细胞株系人红白血病细胞株[1],由上海血液学研究所提供.K562/A02细胞株为阿霉素诱导K562细胞建立的多药耐药细胞株,由中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供.2 质粒真核表达载体pHβApr-1 neo/mdr-Rb含有新霉素G418抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、T7RNA聚合酶启动子和特异切割mdr1 mRNA 880位密码子的核酶基因(TAATACCACTCACTATAGTGCTTGTCCACTGATGAGTCCGTCAGGACGAAA-CAACATTT),由美国Berlex实验室 Scanlon教授提供.
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伤寒沙门菌多药耐药株的整合子及抗性基因检测
目的 为鉴定伤寒沙门菌的耐药性获得与整合子之间的关系,确定该菌抗性基因扩散的可能机制.方法 我们选取32株多药耐药的伤寒沙门菌株提取全基因组DNA,扩增整合子,并以此作为模板检测抗性基因.结果 以伤寒沙门菌基因组DNA为模板有81.2%的菌株,能够扩增出相应整合子的目的 片段.具有四环素抗性、氨苄青霉素抗性和复方磺胺抗性的样品,以其扩增产物作为模板全部能扩增出相应抗性基因suⅡ、blaTEM-1和tetG.结论 伤寒沙门菌的抗性基因是整合在Ⅰ类整合子中的,故整合子的转移应是伤寒沙门菌抗性基因传递的一种主要途径.
