Ipr1DNA疫苗诱导BALB/c小鼠免疫应答的探讨

目的 构建真核表达质粒pBud-Iprl-OriM,探讨其诱导BALB/c小鼠的免疫应答,为新型结核病疫苗的研制提供新思路.方法 将鼠胞内病原体抗性基因1(Intracellular pathogen resistance,Ipr1)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的复制子OriM插入真核表达质粒pBudCE4.1,构建pBud-Ipr1-OriM表达质粒(Ipr1DNA疫苗)；将BALB/c小鼠随机分为4组:生理盐水对照组、BCG组、pBud-OriM组及pBud-Ipr1-OriM组,pBud-OriM组及pBud-Ipr1-OriM组经肌肉注射免疫相应的重组质粒,BCG组经背部皮内注射BCG,每隔2周注射1次,共3次；末次免疫后2周,处死小鼠,分离血清,采用ELISA法检测小鼠血清中IL-12和IFNγ的水平；取脾组织,采用流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞数量,同时观察肺脾组织的病理学变化.结果 经酶切、测序鉴定证实,重组真核表达质粒pBud-Ipr1-OriM(Ipr1DNA疫苗)构建成功；pBud-Ipr1-OriM组免疫小鼠血清中IL-12水平及小鼠脾组织中CD4+和CD8+T细胞数量均高于其他组,肺脾组织未见病理学改变.结论 Ipr1DNA疫苗能有效诱导BALB/c小鼠的细胞免疫应答,为新型结核病疫苗的研制奠定了基础.

革兰阴性菌中整合子携带超广谱β-内酰胺酶的研究进展

整合子是一种主要存在于革兰阴性菌中的基因捕获和表达的遗传单位,能够选择性捕获或去除各种特异性耐药基因盒,从而加速了细菌耐药性的扩散.近年来,整合子介导的细菌耐药机制引起了研究人员的极大关注,成为研究细菌耐药传播机制的一大热点.目前已明确的位于整合子上的抗性基因已超过70多种[1],其中包括相继发现的一些超广谱β-内酰胺酶(ESBL)被整合在整合子上,这无疑加速了ESBL的传播速度.本文就整合子的分类、结构,革兰阴性菌中整合子携带ESBL的流行病学特征、检测和协同耐药基因的表达等作一综述.

美国微生物学会杂志摘要

1.Hibbard提出了一个可以讨论的问题:"如果在感染初期采用联合抗微生物治疗,人类是否可以控制微生物感染?"支持这一观点的理由为:①当抗微生物药物的作用机制不同,同时采用2～3种抗微生物制剂将可减少微生物因突变而同时出现对数种药物耐药的菌株;②联合使用抗生素后,可在病人血清中出现杀死微生物的浓度;③近来临床采用局部联合消毒剂,较单用一种消毒剂更有效,而并未增加其不良反应;④基因转录的图谱显示如表达过多的抗性基因,微生物的一些重要基因产物将被上调;⑤如果某种抗生素的药物动态学显示互相之间并无拮抗作用,联合使用抗菌药物可缩短疗程.作者认为联合使用的抗菌药物应分别具有不同作用机制,方有价值,但是经济问题应做深入研究以作全面考虑.

050 恶性疟原虫氯喹抗性基因CG2及其多态性分析

免疫途径及载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究(摘要)

目的探讨DNA载体结构及接种途径对DNA疫苗免疫效果的影响。方法分别构建插入HBV表面抗原编码基因的表达载体pcDNA1.1/SA(无抗性基因)和pcDNAI/Amp/SA(含氨苄青霉素抗性基因)，肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力；同时比较不同接种途径(肌内、皮内、皮肤划痕)及CpG免疫刺激元件(ISS)对DNA疫苗诱生免疫效果的影响。结果pcDNAI/Amp/SA的免疫效果优于pcDNA1.1/SA。pcDNA1.1/SA的免疫效果可被ISS增强，而pcDNAI/Amp/SA诱生特异性免疫应答的能力则可被ISS抑制；诱生免疫应答的能力以肌肉注射强，皮内注射免疫其次，皮下划痕法较弱。结论不同HBsAg表达载体诱生免疫应答的能力不尽相同；CpG免疫刺激元件在决定DNA疫苗免疫原性中起重要作用，可增强不含相应结构DNA疫苗的免疫效果；皮内注射可诱发与肌内接种相似的免疫应答，是一种简便、有效的免疫接种途径。

青藏高原藏族人群HLA-DRB1基因与包虫病遗传抗性关联研究

目的 确定青藏高原地区藏族人群包虫病患者的人类白细胞抗原-DRB1(Human leukocyte antigen-DRB1,HLA-DRB1)等位基因中易感基因和抗性基因,为研究藏族人群包虫病的感染机制及遗传特点提供依据.方法 本研究采用病例对照法.病例组选取青海省玉树和果洛藏族自治州的世居藏族囊型包虫病63例和泡型包虫病73例;对照组选取该地区无血缘关系的藏族健康人,共计60例.应用聚合酶链反应-直接碱基序列基因分型(PCR-SBT)技术,比较等位基因频率.结果 泡型和囊型包虫病病例组HLA-DRB1*04等位基因频率均小于对照组(χ2=4.71、4.31,P均<0.05).结论 HLA-DRB1*04等位基因与青藏高原藏族人群囊型和泡型包虫病相关联,对其感染有保护作用,是其抗性基因.

杭州库蚊复组抗性相关酯酶Est-β11、Est-β2基因序列测定与分析

目的 了解杭州市库蚊复组抗性相关酯酶Est-β11和Est-β2基因序列,及其与标准抗性系序列的差异及变化情况.方法 采集杭州市区库蚊,提取单个蚊虫基因组DNA,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性( PCR-RFLP) 方法检测酯酶等位基因.然后分别对相应酶型的PCR产物进行纯化、克隆、序列测定及分析.结果 PCR扩增出860bp目的条带.用限制性内切酶酶切确定酯酶酶型(Est-β11 、Est-β2).测序结果与标准系之间各自一致性分别为100%和97.8%以上.结论 杭州市库蚊复组抗性酯酶Es-β11 、Est-β2测序和同源性分析表明它们与标准抗性系比对具有较高的同源性,提示这些酯酶Est-β基因序列高度保守,不易发生变异,有共同的起源.

抗感染海洋天然产物marformycin生物合成基因簇中调控基因及转运基因的功能研究

目的 对海洋放线菌Streptomyces drozdowiczii SCSIO 10141抗感染次级代谢产物marformycins生物合成基因簇中的调控基因mfnM与转运基因mfnR进行生物信息学分析和功能鉴定.方法 利用生物信息学对mfnM与mfnR的功能进行预测,利用PCR-targeting技术对mfnM与mfnR进行体内阻断,构建双交换突变株△mfnM和△mfnR,对突变株进行发酵并利用HPLC对发酵液进行分析.结果 突变株△mfnM和△mfnR丧失了生产marformycins代谢产物的能力.结论 初步阐明了mfnM与mfnR的功能,mfnM编码1个正调控因子,对marformycins的生物合成起正调控作用;而mfnR编码的ABC转运蛋白,负责marformycins的胞外转运.

HIV-1感染者及其密切接触者HIV-1抗性基因的研究

目的:研究CCR2-64I、SDF1-3′A 2种HIV-1抗性基因在山东省HIV-1感染者及其密切接触者中的分布,以及它们对艾滋病病程进展和人群易感性的影响.方法:利用体外扩增(PCR)和限制性片段长度多态性分析(RFLP)检测目标人群中的HIV-1抗性基因,用统计学方法分析基因分布频率与病程进展和易感性的关系.结果:CCR2-64I、SDF1-3′A的突变频率分别为23.64%、23.94%,含SDF1-3′A1的患者平均潜伏期为(8.33±1.16)年,含CCR2-64I患者平均潜伏期为(8.94±1.17)年,野生纯合子患者为(7.42±1.33)年.结论:本研究首次阐明了CCR2-64I、SDF1-3′A在山东省HIV-1感染者及其密切接触者中分布的特点,并发现2种抗性基因的存在均可延缓感染者的病程.

副溶血性弧菌耐药传播及机制研究进展

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种嗜盐的革兰阴性、食源性致病菌,在近海的淤泥、海水等环境及贝类、鱼、虾等海产品中广泛存在[1].由于交叉污染,淡水产品中也可被大量检出[2].副溶血性弧菌经食源性感染后,会引起人类出现腹泻、发烧、血便等急性肠胃炎症状,是全球范围内引起水产类食物中毒的首要病原菌,尤其在中国、日本和印度等亚洲国家以及美国等沿海国家[3-5].

金华市淡色库蚊抗药性相关基因特征研究

目的 了解金华市淡色库蚊对杀虫剂的抗性基因,分析蚊虫抗性形成的机制,为蚊虫防制提供依据.方法 采用PCR技术检测,利用Vector序列分析软件进行比对分析.结果 金华市淡色库蚊现场品系与敏感品系抗性相关基因中vssc基因序列差异较大,序列相似度仅有84.1％;Est-2基因、ace1基因和cyp6f1基因序列分别存在4个、2个和1个核苷酸的差异;NYD-GBE、NYD-MLC2基因序列无差异.通过将发生点突变的基因序列翻译成氨基酸序列再进行比对发现,Est-2基因、ace1基因和cypf1基因的点突变均为无意突变,不会导致氨基酸序列变化.结论 本研究中检测的6个基因片段中,金华市淡色库蚊现场与敏感品系的氨基酸序列完全相同.

干眼患者眼表宏基因组研究

目的 通过比较干眼患者和健康受试者眼表宏基因组的异同探讨眼表微生物组的改变在干眼发病机制中的作用.方法 在解放军总医院眼科和中山大学中山眼科中心收集干眼患者20例及健康受试者90名.对所有受试者双眼进行结膜印迹细胞样本采集,提取核酸后进行宏基因组测序.通过计算Shannon指数比较两者微生物群落α多样性的差异;对两者微生物种群的相对丰度及代谢途径进行生物信息学分析.并对微生物中的抗生素抗性基因进行比对.结果 干眼患者眼表微生物的α多样性与健康受试者相比差异无统计学意义(P=0.13).干眼患者眼表15种微生物的相对丰度较高,健康受试者10种微生物的相对丰度较高,且在代谢途径上存在着差异.干眼患者眼表微生物中的抗生素抗性基因明显多于健康受试者.结论 虽然干眼患者眼表微生物的多样性与健康受试者相似,但某些特定微生物种群的相对丰度及代谢途径存在特征性的改变,表明这些特定的微生物种群可能与干眼的发病机制有关.

支原体四环素耐药与渔畜禽类养殖业中抗性基因TetM污染的关联性研究

目的:探讨支原体四环素耐药与养殖业抗性基因污染的相关性.方法:采集渔畜禽类养殖业周边环境部分标本、产品标本和临床分离出的四环素耐药支原体,检测各类标本中的TetM基因进行比对.结果:支原体对四环素的耐药菌株和中介菌株中均有部分菌株检测到TetM基因存在,检出率分别为82.86％和49.28％;渔畜禽类养殖业环境标本共计60份,TetM基因检出率为95％;渔畜禽类产品食材标本TetM基因共计检出率为80％.结论:本地区的支原体临床分离株四环素耐药基因TetM检出率较高,养殖业抗生素的大量使用导致抗性基因对环境的污染情况非常严重,推断可能因为TetM基因与可移动元件相结合,通过污染环境和食物链整合到人体菌群,包括感染的支原体,导致耐药的发生.

乙肝DNA疫苗的研究进展

免疫接种是预防 HBV感染的一项重要措施。第 1代 HBV疫苗以无症状携带者血浆中纯化的 22nm球形亚单位病毒颗粒作为疫苗。第 2代 HBV疫苗由在真核细胞中表达的相同的亚单位病毒颗粒组成 [1]。但是血源疫苗需要大量 HBsAg携带者血浆，又需要较高的灭活技术、成本也较高；基因工程疫苗、全程疫苗需接种 3剂疫苗，这可降低免疫覆盖率， 15％～ 20％的人群对其呈现无应答或应答低下，另外，对有可能逃避现有疫苗保护作用的 HBsAg突变株存在争论 [2]，所以乙肝 DNA疫苗在此基础上应运而生。 1 乙肝 DNA疫苗的组成 1.1 目的基因的选择 HBV 基因组含有多种抗原： preS1基因、 preS2基因、 S基因、 c基因、 e基因、和 X基因。因为 preS1蛋白、 preS2蛋白和 S蛋白均可诱导机体产生相应特异抗体，其中抗 -HBs具有保护力， preS2抗体可能与病毒清除密切相关。 c基因产物 -HBcAg是机体特异性 CTL的主要靶抗原。所以目前目的基因的研究主要集中在 S， S1， S2基因 [3]和 c基因 [4]。1.2 质粒载体的选择因涉及到 DNA 疫苗的安全性，美国 FDA已规定应用于人体的质粒 DNA疫苗不应含有氨基甙类抗生素（如氨苄青霉素）抗性基因，他们推荐使用含卡那霉素和新霉素等抗性基因的表达载体。国内学者袁正宏等分别构建插入 HBV表面抗原编码基因的表达载体 pcDNA1.1/SA（无抗性基因）和 pcDNAI/AMP/SA（含氨苄青霉素抗性基因），发现 pcDNAI/AMP/SA的免疫效果优于 pcDNA1.1/SA， pcDNA1.1/SA的免疫效果可被 CpG免疫刺激元件（ ISS）增强，而 pcDNAI/AMP/SA诱生特异性免疫应答的能力则被 ISS抑制 [5]。另外， Waltrand提出：（ 1） HCMV启动子的调节能力较佳。（ 2）在 HCMV启动子控制的 HBV DNA疫苗中，内含子、 neo基因、 HBV X 基因等存在与否意义不大。（ 3） DNA疫苗分子大小对免疫效果可能有影响，因大分子不易被摄取。

头状链霉菌中丝裂霉素C抗性基因mcrAB的克隆及其作用研究

丝裂霉素C属于苯醌类抗肿瘤抗生素,在生物体内作为前药,经酶催化还原后可阻碍DNA的复制.我们从头状链霉菌中克隆出丝裂霉素C抗性基因mcrAB,测序结果与另一丝裂霉素产生菌-淡紫灰链霉菌的mcrAB基因序列进行了比较,结果表明此序列是高度保守的.同时还构建了带有mcrAB基因的质粒载体pYG206,将pYG206用原生质体转化法导入变青链霉菌TK64,并在此菌中表达,大大提高了该菌对丝裂霉素C的抗性.进一步研究表明:在有氧条件下,mcrAB基因表达的蛋白可抑制菌体对丝裂霉素C的转化作用.

大肠杆菌头孢哌酮抗性基因亚克隆及序列初步分析

为了确定耐药质粒pFC所编码β-内酰胺酶衍化类型,用从临床分离出的大肠杆菌耐药质粒pFC头孢哌酮抗性基因,经分段亚克隆,构建重组质粒pFB1、pFB2、pFB3,对上述3个重组质粒分别测序获得的抗性基因序列经Internet互联网同源性检索,表明该抗性基因部分序列,与肺炎克雷伯氏菌编码超广谱β-内酰胺酶TEM-52的抗性基因序列存在高度同源性(97%),提示pFC头孢哌酮抗性基因所编码的β-内酰胺酶可能衍化自TEM型.