首页 > 文献资料
-
基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立
目的 建立基于内参的副溶血性弧菌实时荧光定量PCR方法,快速检测样品中的副溶血性弧菌.方法 根据GenBank已公布的副溶血性弧菌基因组序列,筛选特异性靶基因,设计特异性引物探针,优化反应体系,并在体系中加入内参(IAC),通过标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC,进而实时监控整个PCR反应.按照5～50 cfu/25 g的细菌量人工污染样品,以评价所建立反应的体系.结果 以副溶血性弧菌基因组DNA为模板,低检测限为l pg/μl;以10倍梯度稀释的菌液经水煮法提取的DNA为模板,低检测限为4×102 cfu/ml;以舍有gyrB的质粒为模板,低检测极限可以达到100 copies/μl;建立gyrB和gyrB-IAC标准曲线,Ct值与模板拷贝数均呈良好线性关系(r2=0.999);人工污染初始菌量为7 cfu/25 g时,样品中副溶血性弧菌增菌6h即可检出.结论 本研究所建立的gyrB-IAC实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中副溶血性孤菌,又能实时监测PCR反应过程,有效防止“假阴性”的发生,结果可靠,有利于实现海产品中副溶血性孤菌实时荧光定量PCR检测方法的标准化.
-
大肠埃希菌临床菌株对氟喹诺酮类的耐药机制
NA旋转酶编码基因(gyrA和gyrB)和拓扑异构酶编码基因(parC和parE)的染色体突变、多重药物外排泵AcrAB表达水平升高以及存在质粒介导acc(6′)-Ib-cr和各种qnr基因等耐药机制均可导致氟喹诺酮类药物对大肠埃希菌的MIC升高.
-
用gyrB、rpoD基因扩增测序进行气单胞菌分类的探讨
目的 获得气单胞菌更准确的分类结果.方法 收集经Vitek全自动细菌分析仪及配套的GN鉴定卡鉴定为气单胞菌的菌株231株,对其gyrB、rpoD两个管家基因进行PCR扩增及测序,并与GenBank中标准序列进行基因序列比对和单核苷酸替代率分析,综合分析gyrB、rpoD两基因测序结果并进行基因分类.结果 231株气单胞菌中,69株(29.9％)gyrB和rpoD基因均获得测序结果,86株(37.2％)仅获得gyrB序列,50株(21.6％)仅获得rpoD序列,26株(11.3％)两种基因均未获得序列.生化表型鉴定为嗜水气单胞菌的菌株中62.7％基因分类结果为达卡气单胞菌,仅22.4％为嗜水气单胞菌,其种间生化反应结果相近.结论 气单胞菌属的生化分类与基因分类结果存在差异.达卡气单胞菌与嗜水气单胞菌的鉴定依赖于基因序列分析.
-
基于定向PCR和UPLC-MS技术分析放线菌中的产物
目的 从放线菌中发现聚酮类或大环内酯环类化合物.方法 采用定向PCR方法从放线菌中筛选含Ⅰ型PKS基因,然后利用UPLC-MS技术分析该菌株发酵产物.结果 从40株放线菌中获得了18株PCR阳性菌株,进一步的UPLC-MS/MS分析,从菌株HCCB 11494发现了7个macrotetrolides类抗生素;该菌株的种属初步鉴定为小链霉菌.结论 采用PKSⅠ基因定向筛选结合UPLC-MS分析可从放线菌中筛选得到大环内酯化合物.
