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错配PCR技术在快速检测耐药结核分枝杆菌中的应用
耐药结核病的早期快速诊断是结核病控制中亟待解决的关键问题之一.利用基因型检测耐药性包括PCR产物直接测序法,错配PCR法等[1-2].错配PCR技术早由Newton等于1989年建立并用于人抗胰岛素基因缺陷的检查,目前已广泛应用于基因点突变的检测[3-4].根据PCR引物设计的不同,可将其分为间接错配PCR,即引物与野生型完全互补,以突变株为模板不能扩增得到PCR产物,和直接错配PCR,即引物与特定的点突变完全互补,以野生株为模板不能扩增得到PCR产物.已有用间接错配PCR方法检测结核分枝杆菌利福平耐药的报道[5-6].本研究以检测耐利福平的结核分枝杆菌rpoB基因531位点的点突变为对象,建立了直接错配PCR法,并与间接错配PCR法进行了比较.
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微小 RNA 在肺腺癌发生与发展中的研究进展
全世界每年约有160万新诊断的肺癌患者,肺癌已成为男性常见恶性肿瘤,为女性肿瘤发病率的第2位[1],在肺癌中,多为非小细胞肺癌(NSCLC),其中肺腺癌尤为常见,并且大部分患者在确诊时已是晚期,失去了手术机会。在治疗方面,虽然手术、放化疗、靶向治疗等治疗手段飞速发展,但其生存率仍不令人满意。微小 RNA(microRNA,miRNA)是一种真核生物内源性小分子单链 RNA,包括约21~25个核苷酸,是一组不编码蛋白质的短序列 RNA,其5′-非翻译区的2-7个核苷酸的“种子序列”可以与靶 mRNA 的3′-非翻译区以碱基配对方式完全或不完全互补结合,诱导 mRNA 的切割降解,翻译抑制或者其他形式的调节机制抑制靶基因的表达[2-4]。1993年发现首个 miRNA:miRNA-lin-4,miRNA 的编码基因是目前大的一类调节基因。近年来研究显示, miRNA在细胞的生长、增殖、分化和凋亡过程中发挥着重要的调节作用,并与许多肿瘤的发生、发展有关[5-8]。本文对目前 miRNA 研究在肺腺癌领域的进展,综述如下。
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MicroRNA在胃癌研究中的应用前景
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类广泛存在于多种生物体内、序列长度约19~25个核苷酸、不编码蛋白质的单链小RNA.成熟的miRNA能够识别特定的靶mRNA 3'非编码区,并与之结合,如果两者碱基序列完全互补,则可使靶mRNA降解,如不完全互补,则抑制靶mRNA 翻译,影响蛋白质表达水平,但不影响靶mRNA的稳定性;另外,它可以指导其靶向基因的mRNA快速脱腺苷化,进而导致mRNA的快速衰减和表达水平的降低等.
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基因芯片技术(下)
3 基因芯片技术的应用3.1 DNA序列测定3.1.1 原理[5] 基因芯片测序采用的是杂交测序(SBH)的原理.该技术包括:末知序列的DNA与大量的短链寡核苷酸探针杂交;所形成完整的双链体的鉴定与分析.如对于一种12碱基的靶基因片段,假设其核苷酸顺序为5'-AGCCTAGCT GAA-3'.用它与一组8个碱基完全排列组合的寡核苷酸探针群混合杂交.在这一组由总数为48=65536种8个碱基的寡核苷酸组成的完全探针群中,仅有5种会同靶基因片段形成完全互补的双链分子.根据这5种发生了完全杂交的8个碱基的寡核苷酸之间重叠序列的线性关系,可推算出这段l2个碱基的靶基因分子的核苷酸顺序.
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病毒编码miRNA与宿主免疫
MicroRNA(miRNA)是一类不编码的,长度为19~25nt的小RNA分子,通过与靶基因形成完全或者不完全互补的双链来抑制靶基因的翻译或者降解靶蛋白,也可通过调控促进蛋白表达.MiRNA首次于1993年由Ambros及其同事在模式生物线虫中发现[1],通过基因组研究,证实miRNA为一种具有发卡结构的小RNA,通过与其靶标转录本3‘UTR结合抑制靶标的转录后翻译[2].本来miRNA被认为只在线虫特异性存在,后来证实这些线虫miRNA在其他的多细胞生物比如人体内保守存在[3].
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微小RNA调控肝细胞生物学功能的研究进展
微小RNA(miRNA)是一类长约18-24个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,可通过完全或不完全互补结合靶信使RNA(mRNA)3'非编码区(UTR),降解靶mRNA或抑制靶蛋白合成,从而调控基因表达.生物体内约10 %-30%的基因表达受miRNA调控,因此,miRNA作为重要的转录后调控手段,近年来引起广泛关注.
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miR-223与恶性肿瘤
microRNA是一类19~25个核苷酸组成的非编码的微小RNA,广泛存在于各种真核细胞中,参与调节细胞的生长、发育、分化和凋亡.microRNA是基因表达的重要调节因子,通过其"种子序列"与靶mRNA的不完全互补结合,导致mRNA降解或抑制蛋白翻译.研究发现[1],microRNA的异常表达与恶性肿瘤的发生有关.miR-223在骨髓中显著高表达并参与造血系统分化过程使其备受关注,其异常表达会导致血液系统恶性肿瘤的发生,进一步的研究发现miR-223也参与实体恶性肿瘤的发生.本文就 miR-223与恶性肿瘤关系的研究进展进行综述.
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微小RNA与肝纤维化关系的研究进展
微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类大小为19~22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA,通过与靶mRNA完全或不完全互补配对,引起mRNA降解或翻译抑制,从而对基因转录后水平进行调控.miRNAs广泛存在于真核生物体内,参与动植物的组织器官发育、细胞增殖、分化和凋亡、脂肪代谢、激素的分泌等各种过程,并广泛参与肿瘤的发病机制.近年来,有研究表明miRNAs在肝纤维化的发生、发展中发挥着重要的作用.本文就miRNAs与肝纤维化关系的研究新进展作一综述.
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微小 RNA -21与血液肿瘤
微小 RNA(MicroRNAs,miRNAs)是一类具有调控功能的内源性非编码单链小 RNA 分子,通常与一个或者多个靶基因 mRNA 3′端非翻译区(3′-UTRs)完全或不完全互补结合,抑制翻译或降解靶标 mRNAs 而调节基因的表达,参与生命过程中一系列的重要进程,包括早期发育、细胞增殖、分化、凋亡、死亡、免疫调节和脂肪代谢等。 miRNAs 在肿瘤的发生和发展中扮演着重要的角色,具有癌基因或抑癌基因的作用。 microRNA -21(miR -21)是一个典型的致癌性 miR-NA 分子,在多种肿瘤组织中表达升高。近年来,国内外不断有学者在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液肿瘤中发现miR -21呈现过表达,并可能通过调控多种抑癌基因、凋亡相关分子及相关信号通路促进血液肿瘤的发生,影响肿瘤的进展及预后,然而具体作用机制不明。此外,miR -21还与血液肿瘤的耐药密切相关,使用转染反义寡核苷酸等分子生物学方法降低 miR -21的表达可以抑制肿瘤细胞的生长、侵袭等生物学的行为并提高肿瘤细胞对化疗的敏感性。 miR -21的功能研究和新靶点鉴定已经成为分子生物学研究中大的热点和突破口之一。
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从中医角度探讨微小RNA调控造血机制
微小RNA(microRNA,miRNA)的研究已成为当前生物学、医学领域的一大热点。自从Lee等[1]首次发现miRNA后,各国学者不断对其深入研究,发现miRNA在发育调控、细胞增殖和死亡、造血过程以及肿瘤的发生等方面发挥着重要作用。
1生物特性
miRNA是一种大小约19-25个碱基的单链非编码小分子RNA,通过其"种子序列"与靶mRNA 3'端非翻译区(UTR)的序列完全互补或不完全互补结合,导致靶mRNA降解或翻译抑制,从而在转录后水平负调控靶基因的表达。研究表明miRNA调控了体内超过1/3的蛋白编码序列表达,几乎参与了所有的生物学过程。由于miRNA属于非编码因子,非编码RNA自身不能编码蛋白质,但它可调控下游靶基因mRNA的表达,进而影响蛋白的表达情况。