首页 > 文献资料
-
不同毒力的问号钩端螺旋体对Vero及J774A.1细胞的黏附和内化
目的探讨问号钩端螺旋体对传代细胞黏附和内化的能力及其差异. 方法实验中采用非洲绿猴肾成纤维细胞(Vero)和小鼠单核巨噬样细胞(J774A.1)细胞株.采用透射电镜、扫描电镜和Fontana镀银染色法,观察问号钩端螺旋体强毒株黄疸出血群赖型56601、弱毒株波摩那群波摩那型56608黏附细胞及内化能力及其差异,采用腐生性的双曲钩端螺旋体三宝垄群patoc型PatocⅠ株作为对照. 结果问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株和波摩那群波摩那型56608株均能以一端或两端黏附于Vero及J774A.1细胞.钩体56601株和56608株对J774A.1的黏附率分别为49%和46.9%,对Vero细胞黏附率分别为24.2%和22.9%.钩体56601株和56608株可侵入上述2株细胞,在胞质内形成典型的吞噬泡.钩体56601株还可侵入宿主细胞核内,56608株则否.双曲钩端螺旋体三宝垄群patoc型PatocⅠ株不能黏附和侵入细胞. 结论两株受试的不同毒力问号钩体株均能黏附细胞,并以内化方式侵入细胞.细胞株的差异可明显影响钩体黏附和内化能力.问号钩体毒力的强弱可能与黏附能力无关,而与其侵入胞核的能力密切相关.
-
弓形虫侵入细胞过程中宿主胞内游离钙和胞外花生四烯酸的变化和来源
目的 探讨刚地弓形虫侵入不同类型传代细胞过程中宿主胞内游离Ca2+和胞外花生四烯酸(AA)的变化和来源.方法 采用核素液闪仪和激光共聚焦显微镜检测刚地弓形虫RH株侵入Vero和J774A.1细胞过程中宿主胞外AA和胞内游离Caz+的变化及来源.对所获数据进行方差分析和t检验.结果 弓形虫侵入J774A.1和Vero细胞后,宿主胞内游离Ca2+有不同程度升高,其高荧光强度变化分别为(1 219.7±58.4)%(t=4.982,P<0.01)和(356.3±23.6)%(t=2.593,P<0.05).Vero细胞内Ca2+升高多来源于胞内Ca2+库释放,而J774A.1细胞内Ca2+升高来源于胞内Ca2+库释放和胞外Ca2+内流.弓形虫侵入Vero和J774A.1细胞后,宿主胞外AA均明显升高,分别为感染前的5.02倍和8.44倍(t=3.124,t=3.852,均P<0.01).磷脂酶A2抑制剂作用弓形虫后可明显抑制AA升高.结论 弓形虫感染吞噬性细胞激活宿主胞膜磷脂酶C和弓形虫磷脂酶A2,引起宿主胞内游离Ca2+和胞外AA浓度升高,两者共同作用导致虫体侵入;虫体侵入非吞噬性细胞可能仅激活虫体磷脂酶A2.
-
问号钩端螺旋体诱导J774A.1细胞FasL/Fas表达上调及FasL/Fas相关细胞凋亡的研究
目的:了解FasL/Fas途径参与问号钩端螺旋体(简称钩体)诱导细胞凋亡及其FasL/Fas表达水平变化.方法:建立问号钩体黄疸出血群赖型56601株感染小鼠单核-巨噬细胞J774A.1模型.采用DAPI染色法观察问号钩体56601株感染细胞凋亡的形态学特征,流式细胞术定量检测感染细胞的凋亡率及FasL中和抗体对细胞凋亡的阻断作用.PE标记抗小鼠FasL或Fas单克隆抗体染色法,观察问号钩体56601株感染细胞FasL/Fas表达情况.采用流式细胞术定量检测感染细胞的FasL/Fas表达水平.结果:问号钩体56601株感染J774A.1细胞4 h时,部分细胞出现染色质浓缩及边缘化现象;感染24 h时上述病变现象更加明显且有部分细胞核裂解.问号钩体56601株感染J774A.1细胞4 h和24 h的凋亡率分别为53.6%和64.31%.FasL中和抗体预处理细胞后,问号钩体56601株感染细胞4 h或24 h的凋亡率分别为10.27%和15.90%.J774A.1细胞被问号钩体56601株感染后4和24 h,FasL表达率分别从感染前的4.19%上升至21.69%和65.70%,Fas表达率分别从感染前的12.88%上升至91.96%和88.01%.结论:诱导细胞凋亡是问号钩体56601株损伤J774A.1细胞的重要机制.问号钩体可上调靶细胞FasL/Fas表达水平,并通过FasL/Fas途径诱导J774A.1细胞凋亡.
-
问号钩端螺旋体磷脂酶C的活性及其内化时细胞内游离Ca2+水平的变化
目的:了解不同毒力的钩端螺旋体(简称钩体)对细胞内游离Ca2+水平的影响及其磷脂酶C(PLC)活性与细胞内游离Ca2+水平的关系.方法:建立问号钩体Vero和J774A.1细胞感染模型.采用fluo-3/AM胞内Ca2+特异荧光标记激光共聚焦技术,检测强毒力的问号钩体黄疸出血群赖型56601株和弱毒力的波摩那群波摩那型56608株及无毒力的双曲钩体Patoc Ⅰ株作用的Vero和J774A.1细胞胞内游离Ca2+水平.以[3H]PIP2为底物,采用同位素法检测上述3株钩体培养物上清、胞浆和胞膜中PLC的活性.结果:正常Vero和J774A.1细胞胞内游离Ca2+基础值分别为(102.3±8.2)%和(105.9±7.3)%,在观察时间内Patoc Ⅰ株钩体作用细胞的荧光强度变化百分数一直波动于(102.3±8.2)%～(102.2±8.3)%.问号钩体56601株感染的Vero和J774A.1细胞胞内游离Ca2+浓度呈双峰型增高,第一峰荧光强度变化百分数分别为(430.5±35.7)%和(747.5±18.5)%,第二峰荧光强度变化百分数分别为(380.6±17.4)%和(804.6±22.4)%.问号钩体56608株感染Vero和J774A.1细胞,其胞内游离Ca2+浓度均呈缓慢的单一坡型升高,其大荧光强度变化百分数分别为(235.0±19.3)%和(402.4±17.4)%,明显小于56601株问号钩体(P<0.01).问号钩体56601株和56608株及双曲钩体Patoc Ⅰ株的培养物上清、胞浆蛋白和胞膜蛋白成分中均显示PLC活性(P<0.05).结论:不同毒力的问号钩体所感染细胞的胞内游离Ca2+水平及其峰型有明显差异,而且与被感染细胞的种类有关,与PLC活性无关.
