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自然反义转录物Lmo4as对神经系统重要编码基因Lmo4的调节作用
目的 探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能.方法 1)使用cDNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(polyA)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量PCR和原位杂交技术确定Lmo4as及相应编码基冈的时空表达谱;3)使用荧光素酶报告基因实验在体外验证Lmo4as对Lmo4是否具有调控作用.结果 1)Lmo4as是一个具有多聚腺苷酸(polyA)尾的非编码RNA转录本,获得其RNA全长信息;2)Lmo4as与相应编码基因转录Lmo4的丰度在时间上具有协同性,而在空间表达上具有明显不同的分布;3)Lmo4as对Lmo4在转录后水平具有负性调节作用,另外miR-124也能够抑制Lmo4的表达.结论 编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对其转录后水平的负性调节与 microRNA的调节共同发挥作用.
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LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响研究
目的 探讨LMO4基因沉默对Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)的影响.方法 体外培养非小细胞肺癌A549细胞,取对数生长期细胞进行实验,根据转染慢病毒分为sh-NC组(转染sh-NC慢病毒)、sh-LMO4组(转染sh-LMO4慢病毒)、Snail组(转染Snail慢病毒)和Snail+ sh-LMO4组(转染Snail慢病毒和sh-LMO4慢病毒).采用实时定量RT-PCR检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4mRNA相对表达量,采用Western Bloting法检测sh-NC组和sh-LMO4组LMO4蛋白相对表达量及4组N-eadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白相对表达量,采用Transwell实验检测4组细胞侵袭个数,采用细胞划痕实验检测4组细胞迁移距离.结果 sh-LMO4组LMO4 mRNA相对表达量和LMO4蛋白相对表达量均低于sh-NC组(P＜0.05).Snail组侵袭细胞个数多于sh-NC组,sh-LMO4组侵袭细胞个数少于sh-NC组,Snail+ sh-LMO4组侵袭细胞个数少于Snail组、多于sh-LMO4组(P＜0.05).培养24 h后Snail组细胞迁移距离长于sh-NC组,sh-LMO4组细胞迁移距离短于sh-NC组,而Snail+ sh-LMO4组细胞迁移距离短于Snail组、长于sh-LMO4组(P＜0.05).Snail组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-NC组,E-eadherin蛋白相对表达量低于sh-NC组(P＜0.05);sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于sh-NC组,E-eadherin蛋白相对表达量高于sh-NC组(P＜0.05);Snail+ sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量低于Snail组,E-cadherin蛋白相对表达量高于Snail组(P＜0.05);Snail+ sh-LMO4组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量高于sh-LMO4组,E-cadherin蛋白相对表达量低于sh-LMO4组(P＜0.05).结论 LMO4基因沉默可逆转Snail诱导的非小细胞肺癌A549细胞EMT.
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大鼠局灶性脑缺血后LMO4和pCREB的表达
目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后核转录因子LMO4和pCREB在缺血半暗带的表达规律及与凋亡抗原的共表达.方法 将雄性SD大鼠随机分为假手术组及缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、48h组,线栓法制备局灶性大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2h后恢复再灌住,采用Western blot法、免疫荧光法检测LMO4、pCREB在缺血半暗带的表达变化,免疫荧光双标观察LMO4、pCREB的表达定位及与TUNEL阳性细胞之间的共表达情况.结果 与假手术组比较,缺血侧半暗带皮层组织LMO4蛋白水平再灌后3h开始升高,24h达高峰,48h明显下降,pCREB蛋白水平6h开始升高,24h达高峰,48h逐渐下降(P＜0.05或P＜0.01)；LMO4、pCREB阳性细胞数再灌后6h开始升高,24h达高峰,48h显著下降(P＜0.05或P＜0.01)；免疫荧光双标显示LMO4和pCREB仅表达于神经元,LMO4主要表达于细胞核,少量位于细胞浆,pCREB仅表达于细胞核；LMO4与pCREB完全共表达；LMO4、pCREB均与TUNEL阳性细胞呈分离表达.结论 脑缺血再灌后诱导LMO4、pCREB表达升高,并呈动态变化趋势,可能为神经细胞对缺血再灌注损伤的一种内部适应性保护机制.
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pGEX-5X-1-hLMO4原核质粒构建及重组蛋白表达
目的:构建hLMO4的原核表达载体并诱导、纯化和鉴定其表达.方法:hLMO4全长编码基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)在BL21大肠杆菌中诱导GST-hLMO4融合蛋白表达,利用Glutathione Sepharose 4B纯化诱导的融合蛋白,并经Western blot鉴定结果.结果:hLMO4编码序列克隆至pGEX-5X-1载体中,双酶切鉴定片段大小为500 bp,在E.coli BL21中IPTG诱导融合蛋白的表达,分子质量约为49 000 Da,成功纯化出GST及GST-hLMO4蛋白,Western blot检测到蛋白表达.结论:构建了hLMO4基因原核表达载体,鉴定了GST-hLMO4融合蛋白表达.
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LMO4的异位表达对NB4细胞增殖和分化的影响
目的 探讨LMO4 对急性早幼粒白血病细胞系NB4细胞增殖和分化的影响. 方法 利用 qRT-PCR和 Western blot法检测 NB4 中 LMO4 表达;利用慢病毒介导 LMO4 的cDNA感染NB4 细胞后,建立过量表达 LMO4 的 NB4 细胞株;采用MTT法检测细胞增殖;使用全反式维甲酸( ATRA)诱导NB4细胞分化0 ~48 h,瑞氏染色观察分化的细胞特性;流式细胞术分析NB4 细胞分化后产生CD11b阳性的细胞比例. 结果 qRT-PCR 和 Western blot 结果均提示 NB4中LMO4表达增加;ATRA诱导NB4分化时,LMO4的表达降低;MTT结果证实过量表达LMO4促进NB4增殖;瑞氏染色和流式细胞术结果均显示,过量表达LMO4能够促进ATRA诱导NB4细胞分化. 结论 LMO4参与调节NB4细胞的增殖,并能增加NB4细胞对ATRA的敏感性,促进其分化.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 NB4 Lmo4 全反式维甲酸 -
早期胃癌中淋巴结微转移及 LMO4、DLEC1表达的临床意义
目的：探求早期胃癌中淋巴结微转移及LMO4、DLEC1表达的临床意义。方法纳入研究对象为早期胃癌患者共50例，均行胃癌根治术。术后平均随访35．2个月（28～60个月），每位患者平均淋巴结24．5枚不等，将所有淋巴结用HE和CK进行免疫组化染色。对淋巴结微转移情况及LMO4、DLEC1的表达进行统计分析。结果淋巴结微转移明显高于常规淋巴结转移率，组织学类型和浸润胃壁深度与淋巴结微转移有正相关性，而其他临床病理因素与淋巴结微转移无明显相关性。 LMO4表达与浸润深度、淋巴结微转移、组织分化程度、肿瘤大小呈明显正相关，DLEC1表达与浸润深度、淋巴结微转移、组织分化程度、肿瘤大小呈明显负相关。 LMO4与DLEC1表达存在负相关。淋巴结微转移与无淋巴结微转移的患者5年无瘤生存率无显著差别。结论对于早期胃癌，若淋巴结中检测出微转移，其预后较差，术后复发率较高，术后应予以积极的辅助治疗。
