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  • 黄芪皂苷Ⅰ调控PI3K/Akt/NF-κB通路抑制LPS诱导BV-2细胞激活

    作者:刘宏帅;李文慧;沈慧;唐韵迪;石海莲;吴辉;黄菲;吴晓俊;胡之璧

    目的:探讨黄芪皂苷Ⅰ (ASTⅠ)对脂多糖(LPS)诱导BV-2小胶质细胞激活的作用及其分子机制.方法:不同浓度的AST Ⅰ(25、50、100μ mol/L)预处理BV-2细胞2h后,加入LPS(200ng/mL)诱导20h,收集培养基上清及细胞:CCK-8法检测不同浓度的AST Ⅰ对BV-2细胞活性的影响;分别采用ELISA和Greiss法检测培养上清中肿瘤坏死因子d (TNF-α)和一氧化氮(N0)的含量;qPCR法检测细胞中CDllb,TNF-α,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白介素1β(IL-1 β)mRNA水平;Western blot法检测细胞PI3K/A KT/NF-κB信号通路蛋白表达;细胞免疫荧光(ICC)法观察p-NFκB的入核情况.结果:AST I在不影响BV-2细胞存活率的条件下,能显著抑制LPS诱导BV-2细胞TNF-α和NO分泌的增加(P<0.01).qPCR结果显示,AST I能够显著抑制TNF-α,iNOS及IL-1 β的mRNA生成(P<0.001,P<0.001,P<0.05),但对BV-2细胞CDllb的mRNA水平无显著影响.同时,AST Ⅰ能显著抑制BV-2细胞中LPS诱导上调的iNOS,COX-2蛋白表达.AST Ⅰ能够降低LPS诱导的p-NF-κB的核转位作用,并且能够减少LPS引起的PI3K/Akt/NF-κB/IκB蛋白的磷酸化作用.结论:AST I能够抑制LPS诱导BV-2细胞的大量激活,作用机制可能与其抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关.

  • 补肾化痰益智法对老年性痴呆细胞模型释放炎性细胞因子的影响

    作者:胡玉萍;王平;孔明望;袁德培;石和元;刘萍

    目的:在成功建立目前公认的老年性痴呆(AD)体外模型基础上,观察补肾化痰益智法抗炎治疗AD的作用及机制.方法:运用A β 1-42作用于BV-2细胞,同时用补肾化痰益智方含药血清进行干预,以吲哚美辛为对照.ELISA法检测细胞释放白介素-1β (IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的情况,RT-PCR法检测IL-1β mRNA的表达.结果:补肾化痰益智组与吲哚美辛组比较,能够更有效抑制IL-1 β的表达(P<0.05),并能够从基因水平调节IL-1β mRNA的表达,从而抑制BV-2细胞分泌炎性因子的作用.结论:A β神经毒性与AD免疫炎性反应具有相关性.补肾化痰益智法能够调控炎性细胞因子IL-1 β、IL-6、TNF-α及IL-1 βmRNA的表达,从基因水平抑制炎性反应.

  • 天麻素对高糖诱导的神经小胶质细胞IL-1β,IL-6表达的影响

    作者:

    目的:研究天麻素对高糖诱导的神经小胶质细胞白介素-lβ(IL-1β)、白介素-6(IL-6)表达的影响.方法:将体外培养的小鼠小胶质瘤细胞(BV-2细胞)分成对照组、高糖组、天麻素低、中、高(25,50,100 mg·L~(-1))剂量组,培养24 h,观察细胞形态.应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清中IL-1β,IL-6蛋白浓度,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法评价IL-1β,IL-6 mRNA表达.结果:与对照组相比,高糖组培养24 h后,细胞出现聚集,胞体、胞核变大,枝状突起明显,胞浆内颗粒物增多现象,天麻素各剂量组上述改变较轻.与对照组相比,高糖组细胞培养上清液中IL-1β,IL-6浓度,以及细胞内IL-1β,IL-6 mRNA表达明显增加,具有显著统计学差异(P<0.05);而与高糖组相比,天麻素各组细胞培养上清液中IL-1β,IL-6浓度,以及细胞IL-1β,IL-6 mRNA表达均降低,均具有显著统计学差异(P<0.05),其中以中浓度天麻素组为显著,与高、低浓度组相比,均具有显著统计学差异(P<0.05).结论:天麻素能抑制高糖诱导的神经小胶质细胞IL-1β,IL-6表达.

  • 三七皂苷Rg1抑制脂多糖诱导的小胶质细胞激活

    作者:宗一;戴纪男;孙俊;杨萍;张伟;艾青龙;陆地

    目的 探讨三七皂苷Rg1(Rg1)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞系BV-2细胞炎性因子释放的抑制作用.方法 用LPS刺激BV-2细胞构建炎症模型,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测Rg1对BV-2细胞活力的影响,免疫荧光染色和反转录PCR方法检测不同浓度Rg1(10、20、40μmol/L)对细胞炎性蛋白酶诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2 (COX-2)、细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)、炎性信号分子NF-κB蛋白与mRNA的表达变化.结果 不同浓度的Rg1在转录水平和翻译水平上明显抑制了LPS诱导的细胞炎性蛋白酶iNOS和COX-2、细胞炎性因子TNF-α和IL-1β与炎性信号分子NF-κB的上调,并且iNOS、COX-2和NF-κB的表达呈剂量依赖性.结论 Rg1可通过调控LPS诱导的小胶质细胞系BV-2细胞炎性因子释放从而抑制小胶质细胞激活,发挥抗神经炎症的作用.

  • 蛇床子素通过c-Jun氨基末端激酶和p38蛋白调节海人酸活化BV-2小胶质细胞增殖

    作者:沈阳;曾常茜

    目的 观察蛇床子素对海人酸活化BV-2小胶质细胞增殖以及c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白和p38蛋白表达的影响,探讨蛇床子素对BV-2细胞增殖抑制的分子机制.方法 将BV-2细胞随机分为对照组、海人酸组和蛇床子素组,孵育24 h后在倒置显微镜下观察各组细胞形态;免疫组化法检测各组BV-2细胞JNK蛋白和p38蛋白表达.结果 倒置显微镜下对照组BV-2细胞贴壁生长,分布均匀,形态规则,胞体瘦小,突起细长,胞体透亮折光性好;海人酸组BV-2细胞生长密集,聚集成团,胞体变大变圆,突起变短或消失;蛇床子素组BV-2细胞形态和数量与对照组相似,分布较为均匀,形态规则,胞体瘦小,呈现树枝状突起.p38和JNK蛋白表达阳性率海人酸组较对照组增高(p38:0.438±0.014比0.216±0.013,JNK:0.456±0.013比0.279±0.013,均P<0.05),蛇床子素组p38和JNK蛋白表达阳性率分别为0.238±0.013、0.211±0.012,较海人酸组均降低(均P<0.05),但与对照组差异无统计学意义(均P>0.05).结论 蛇床子素抑制海人酸活化BV-2细胞增殖,其机制可能通过下调BV-2细胞JNK蛋白和p38蛋白表达而实现.

  • 沉默Annexin-A1对小胶质细胞BV-2生长和迁移能力的影响及其机制

    作者:魏礼清;刘璐;丁钟欢;肖潇;施静;卢忠心;罗振钊

    目的 探讨沉默Annexin-A1(Anxa1)基因对小胶质细胞系BV-2细胞生长、迁移能力的影响及其可能机制.方法 采用RT-PCR和Western blot法从基因和蛋白水平验证小干扰RNA(siRNA)对小胶质细胞系BV-2细胞内Anxa1的沉默效率,采用MTT法检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞增殖的作用,膜联蛋白Ⅴ/碘化丙啶(AnnexinⅤ/PI)双染流式细胞术检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞凋亡的影响,应用Transwell小室检测Anxa1 siRNA对BV-2细胞迁移能力的影响,Western blot法检测细胞周期和迁移相关信号通路蛋白的表达.结果 Anxa1 siRNA干扰组在24 h、48 h、72 h细胞生长抑制率分别为(16.9±2.1)%、(23.1±3.6)%和(42.4±1.7)%,与siRNA-NC组[分别为(1.35±0.5)%、(2.06±0.7)%和(8.65±0.9)%]比较,差异有统计学意义(P<0.05),沉默Anxa1对BV-2细胞的增殖发挥抑制作用;转染后48 h Anxa1 siRNA组细胞凋亡率为(18.4±2.1)%,明显高于siRNA-NC组(5.2±0.3)%和空白对照组(4.3±0.2)%;Anxa1 siRNA干扰组细胞迁移能力(28.7±5.2)明显低于siRNA-NC组(173.4±11.4,P<0.01),Anxa1 siRNA干扰可显著下调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达水平和激活p38与JNK信号通路.结论 siRNA沉默Anxa1基因可抑制小胶质细胞的生长、迁移能力,分别通过下调Cyclin D1和激活p38与JNK信号通路来实现.

  • 儿茶素对脂多糖诱导的BV-2细胞炎性反应的作用

    作者:王青;贾哲琳;宋丽娟;尉杰忠;杨智超;姜维佳;肖保国;马存根

    探索儿茶素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2细胞炎性反应的作用.MTT法观察儿茶素对BV-2细胞增殖的影响;1 mg·L-1 LPS处理BV-2细胞建立体外小胶质细胞炎症模型;在该模型下加入儿茶素共孵育后,分别用ELISA法、HE染色和Western blot法检测儿茶素对LPS诱导的BV-2细胞分泌的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β (interleukin-1β,IL-1β)及细胞形态改变和NF-κB磷酸化的影响.另外,采用transwell法检测不同浓度儿茶素对LPS介导的细胞趋化行为的影响.儿茶素对BV-2细胞无毒性;且与LPS组相比,儿茶素可显著降低LPS引起的BV-2细胞的TNF-α和IL-1β的释放及细胞趋化行为,逆转细胞形态改变,抑制NF-κB的磷酸化.因此,儿茶素能够抑制LPS诱导的BV-2细胞的炎性反应.

  • 18 ku转位蛋白选择性配体YL-IPA08对皮质酮诱导BV-2细胞凋亡的保护作用

    作者:蒋湘云;张黎明;夏登云;孙树峥;李雷;郭颖;龚洁;张有志;王恒林;李云峰

    目的:探讨18 ku转位蛋白TSPO选择性配体YL-IPA08对皮质酮诱导BV-2细胞凋亡的保护作用,并研究其可能的作用机制。方法选择性TSPO配体YL-IPA081~100 nmol·L-1和(或)TSPO拮抗剂PK11195100 nmol·L-1预处理小胶质细胞系BV-2细胞2 h,加入皮质酮200μmol·L-1继续培养24 h,分别用流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞存活,Western蛋白质印迹法检测TSPO蛋白表达水平,ELISA法检测细胞培养上清中四氢孕酮的水平。结果与溶剂对照组相比,YL-IPA081~100 nmol·L-1与阳性化合物AC-5216一样能降低皮质酮处理的BV-2细胞的凋亡率(P<0.01),且100 nmol·L-1时作用为显著,该作用能被PK11195100 nmol·L-1所拮抗(P<0.05)。细胞活性检测显示,YL-IPA08100 nmol·L-1时能显著升高细胞活性(P<0.01),PK11195100 nmol·L-1处理会拮抗该作用(P<0.01)。Western蛋白质印迹和ELISA法结果显示,YL-IPA08100 nmol·L-1时能显著增加皮质酮处理的BV-2细胞TSPO蛋白的表达(P<0.05)并显著升高培养液中四氢孕酮的水平(P<0.05),PK11195100 nmol·L-1显著逆转该现象,降低四氢孕酮的水平(P<0.05)。结论 YL-IPA08显著抑制皮质酮诱导BV-2细胞的凋亡,表现出对小胶质细胞的保护作用,该作用与其增加TSPO蛋白的表达、升高四氢孕酮的水平密切相关。

  • 外源性黄体酮对Aβ1-42诱导的小胶质细胞活化及其对海马神经元存活的影响

    作者:宋书莲;周妍;赵超;周洁;金国良;韩晶晶;花放

    目的 研究黄体酮对Aβ1-42诱导的小胶质细胞激活和炎症因子的释放及其所致的海马神经元损伤的影响.方法 通过Aβ1-42诱导体外培养的小胶质细胞(BV2细胞)活化,并予以外源性黄体酮处理.应用Aβ1-42诱导的BV2细胞的上清液处理海马神经元(HT22细胞).应用ELISA法检测各组BV2细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β的含量;CCK8法检测Aβ1-42-BV2小胶质细胞条件培养基对HT22海马神经元细胞的存活率.结果 与对照组相比,Aβ1-42组的TNF-α、IL-1β的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性.外源性黄体酮能降低Aβ1-42诱导的BV2细胞IL-1β、TNF-α的释放;Aβ1-42诱导BV2细胞炎症因子的释放,可导致HT22细胞死亡,而外源性黄体酮可通过抑制活化的胶质细胞炎性因子的释放而减轻神经元的死亡.结论 黄体酮能够抑制Aβ1-42诱导的小胶质细胞的激活并减轻其导致的神经死亡.

  • 脂多糖对BV-2细胞的形态及肿瘤坏死因子-α表达的影响

    作者:黄红伟;沈伟

    目的 探讨脂多糖对BV-2细胞的形态及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 DMEM高糖培养基中培养的BV-2细胞平均分为空白对照组与脂多糖处理组.脂多糖处理组BV-2细胞采用含100ng/ml脂多糖的培养基培养24h;空白对照组用PBS替代脂多糖.采用免疫组化染色法观察BV-2细胞的形态及TNF-α蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测BV-2细胞培养上清液中TNF-α的浓度.结果 空白对照组BV-2细胞形态呈上皮细胞样,每个细胞有2~3个突起,突起较细长,细胞核较小.脂多糖处理组BV-2细胞多数聚集成团,大部分胞体肥大、饱满,细胞核大而圆,核仁明显,胞体突起短小,形态均具有小胶质细胞激活后形态特征.BV-2细胞中TNF-α蛋白的阳性表达均主要在胞浆中,为棕黄色颗粒.空白对照组BV-2细胞TNF-α蛋白阳性表达产物的OD值(5.46±0.87)明显低于脂多糖处理组(53.01±5.72),差异有统计学意义(t=26.01,P<0.01).空白对照组BV-2细胞培养上清液中TNF-α浓度为(218.13±24.10)pg/ml,脂多糖处理组BV-2细胞培养上清液中TNF-α浓度为(1098.69±72.18) pg/ml,两组间比较差异有统计学意义(t=23.14,P<0.01).结论 脂多糖可显著诱导BV-2细胞系TNF-α的表达,同时可显著改变BV-2细胞的形态.

  • 氧化苦参碱抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子分泌的实验研究

    作者:董晓巧;杜权;俞文华;张祖勇;朱强;车志豪;陈锋;王昊;陈军

    目的:观察氧化苦参碱对脂多糖所致小胶质细胞白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素一6(IL-6)分泌的影响.方法:予终浓度分别为1、10、20μg/mL的氧化苦参碱培养BV-2细胞30 min,再加终浓度为1μg/mL的脂多糖培养BV-2细胞30 min、1 h、3 h和6 h,应用ELISA法测定各时间点细胞培养上清液IL-1β、TNF-α和IL-6浓度.结果:在30 min、1 h、3 h和6h四个时间点.终浓度为1 μg/mL的氧化苦参碱不能显著降低细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度(P>0.05),终浓度为10、20 μg/mL的氧化苦参碱剂量依赖性地降低细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度(P<0.05).结论:氧化苦参碱可抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子分泌.

  • 槲皮黄酮对脂多糖诱导BV-2小胶质细胞损伤的保护机制研究

    作者:曾颜;何标

    目的 探讨槲皮黄酮对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小神经胶质细胞炎症反应的抑制作用及其可能机制.方法 体外培养BV-2细胞,采用LPS刺激细胞诱导炎症模型,将细胞分为正常对照组、模型组和槲皮黄酮低中高(10,20,40 μg.mL-1)剂量组,CCK8法检测槲皮黄酮对BV-2细胞增殖情况的影响,ELISA法检测细胞上清中TNF-α和IL-6的表达量,免疫印迹实验检测iNOS、COX-2、Traf6、p65及p-p65蛋白的表达水平.结果 槲皮黄酮可显著促进BV-2细胞的增殖,并明显降低细胞的炎症反应.槲皮黄酮可明显抑制TNF-α和IL-6的释放,还可显著抑制炎症相关蛋白iNOS及COX-2的表达,并且还可以抑制Traf6/p65信号通路的活化.结论 槲皮黄酮可明显抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,抑制炎症相关蛋白的表达,其可能作用机制是通过抑制Traf6/p65信号通路的活化实现的.

  • 甲酰肽受体-2促进LPS诱导的BV-2细胞炎症反应

    作者:王青;宋丽娟;尉杰忠;杨智超;姜维佳;李艳花;郭文娟;马存根

    目的 考察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活的BV-2细胞中甲酰肽受体-2(formyl peptide receptor-2,FPR2)的表达及其对细胞炎症反应的作用.方法 1 mg· L-1的LPS刺激BV-2细胞12 h,建立体外小胶质细胞炎症模型.Western blot法检测FPR2的表达;分别用FPR2特异性激动剂MMK-1和拮抗剂Boc-2孵育LPS-BV-2细胞后,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的分泌情况;Western blot法检测下游信号分子NF-κB的磷酸化;Transwell小室法考察LPS-BV-2细胞的迁移情况.结果 LPS可使BV-2细胞上的FPR2表达上调,并激活NF-κB.与LPS组比较,激动剂MMK-1可促进LPS-BV-2细胞的TNF-α、IL-1β的分泌和趋化,拮抗剂Boc-2可抑制这些反应.结论 LPS可诱导BV-2细胞膜表面FPR2表达上调,FPR2可使LPS诱发的炎症反应增强.

  • 川芎嗪通过AMPK-NF κB信号通路抑制BV-2小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达

    作者:刘长安;朱洁;蔡标;汪天明;黄金玲

    目的 观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对Aβ25-35诱导的BV-2小鼠小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达及对一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-核因子κB(nuclear factor kappa B,NF出)信号通路的影响.方法 采用Aβ25-35激活BV-2细胞的炎性反应,测定TMP高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10 μmol/L)对Aβ25-35诱导的BV-2细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisactor α,TNF-α)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS) mRNA表达水平的影响.在AMPK激活剂(AICAR)及抑制剂(化合物C)存在下,检测TMP对AMPK及p65(NFκB亚基)磷酸化的影响.结果 TMP高、中剂量可明显抑制BV-2细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS基因mRNA表达水平(P<0.01),高剂量TMP可激活BV-2细胞中AMPK (P<0.01),并抑制p65磷酸化(P<0.01).结论 TMP通过激活BV-2细胞中AMPK活性,抑制NF κB活化,进而抑制促炎性细胞因子基因的表达.

  • 栝楼桂枝汤对谷氨酸诱导的BV-2细胞损伤的保护作用

    作者:李钻芳;林如辉;毛敬洁;胡海霞;朱晓勤;陈文列;陈立典

    目的 研究栝楼桂枝汤水提物(Glgzd)对谷氨酸诱导的小鼠小胶质细胞(BV-2)损伤的保护作用. 方法 用30 mmol/L谷氨酸作用于BV-2细胞诱导其损伤,采用MTT检测Glgzd对谷氨酸损伤后BV-2细胞的活性;倒置显微镜下观察Glgzd作用24 h后BV-2细胞形态的变化;透射电子显微镜下观察BV-2细胞的超微结构变化. 结果 谷氨酸诱导的BV-2细胞出现收缩、漂浮现象,活性显著降低,线粒体肿胀、空泡化,内质网扩张,细胞核出现明显的异染色质边聚等早期凋亡现象.经Glgzd干预后,BV-2细胞活性增加,细胞凋亡现象明显较少. 结论 栝楼桂枝汤可抑制谷氨酸引起的BV-2细胞损伤,并呈剂量依赖性,500~1 000μg/mL的效果较好.

  • 原花青素B1与B2抑制脂多糖诱导的BV-2细胞 炎症反应作用的比较

    作者:王青;宋丽娟;李艳花;杨智超;王婧;刘建春;姜维佳;马存根

    目的:比较原花青素二聚体的2种同分异构体——原花青素B1和B2对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)诱导的BV-2细胞炎症反应的抑制作用.方法:体外培养BV-2细胞,MTT法检测原花青素B1与B2对BV-2细胞活力的影响;以1 mg/L的LPS刺激BV-2细胞12 h建立的细胞炎症模型为研究对象,分别采用ELISA法、Transwell趋化实验和Western blot法比较原花青素B1和B2对LPS诱导的BV-2细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、趋化行为及核因子κB(NF-κB)磷酸化的抑制作用.结果:原花青素B1和B2对BV-2细胞没有毒性.与LPS组比较,原花青素B1和B2均可显著降低LPS诱导的TNF-α和IL-1β的释放及BV-2细胞的趋化作用,并抑制NF-κB的磷酸化.结论:原花青素B1和B2均能抑制LPS诱导的BV-2细胞炎症反应,其作用强度无显著差异.

  • SIRT1对脂多糖活化BV-2细胞分泌IL-6和TNF-α的调节作用

    作者:叶杰明;刘振华;谢惠芳;魏继鹏;陆伶俐;黄燕君;贺月

    目的 观察脂多糖(LPS)对BV-2细胞形状变化及白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌情况的影响,探讨沉默信息调控因子1(SIRT1)在LPS诱导BV-2细胞释放前炎症因子过程中的作用. 方法 BV-2细胞分为调零组、对照组及LPS组,调零组不含细胞,只加培养基;对照组常规培养;LPS组分别加入不同浓度的LPS; MTT法检测各组存活率.另取BV-2细胞分为调零组、对照组、DOSO药物载体组及白藜芦醇组、Sirtinol组,调零组、对照组处理方法同前,DOSO药物载体组加入体积分数为0.3%的DMSO;白藜芦醇组加入10、25、50、100 μmol/L白藜芦醇;Sirtinol组加入1、2.5、5、10、25、50 μmol/L Sirtinl; MTT法检测各组细胞存活率.根据实验结果,选取适当浓度的LPS、白藜芦醇及Sirtinol,将BV-2细胞分为对照组、LPS组、白藜芦醇+LPS组、Sirtinol +LPS组,分别用ELISA方法检测各组细胞相应处理12、24 h后上清液中的IL-6和TNF-α的含量,Western blotting检测SIRT1在上述各组细胞加药处理24 h后的表达水平. 结果 与对照组相比,LPS组BV-2细胞数目增多,胞体肿胀,突起变短、增多.随着LPS浓度的增加,BV-2细胞存活率明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,LPS组BV-2细胞分泌的IL-6、TNF-α增多,S IRT1的表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05).与LPS组比较,经白藜芦醇处理后,细胞内SIRT1的表达量上升,而IL-6 、TNF-α的分泌水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);相反,细胞经Sirtinol处理后,胞内SIRT1的表达量下降,IL-6、TNF-α的分泌水平上升,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 LPS可显著改变BV-2细胞形状并诱导细胞前炎症因子的表达,干预SIRT1的表达量对上述现象有明显的调节作用.

  • SIRT1对激活型小胶质细胞BV-2毒性损伤PC12细胞的保护作用及机制研究

    作者:叶杰明;刘振华;谢惠芳;魏继鹏;陆伶俐;黄燕君

    目的 探讨沉默信息调控因子1(SIRTl)在激活型小胶质细胞介导PC12细胞损伤中所起的作用及相关机制. 方法 体外常规培养BV-2小胶质细胞和PC12细胞,ELISA检测1μg/mL脂多糖(LPS)作用BV-2细胞6、12、24 h后上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的水平;MTT检测LPS与BV-2细胞共培养上清对PC12细胞存活率的影响,同时设对照组、LPS组、单纯BV-2上清液组;MTT检测SIRT1激活剂藜芦醇(5、10、25、50、100 μmol/L)、SIRT1抑制剂尼克酰胺(5、10、25、50 mmol/L)对PC12细胞存活率的影响,以筛选二者的干预浓度.实验分对照组、LPS+BV-2细胞共培养上清液组、白藜芦醇干预组、尼克酰胺干预组,分别加入培养基、LPS+BV-2细胞共培养上清液、50 μmol/L白藜芦醇、25 mmol/L尼克酰胺,培养18h后MTT检测4组细胞存活率,Western blotting检测细胞内SIRT1、乙酰化p53的表达水平. 结果 LPS作用BV-2细胞6、12、24 h后IL-6、TNF-α分泌量均依次增高,差异有统计学意义(P<0.05);MTT比色显示与对照组、LPS组、单纯BV-2上清液组比较,LPS+BV-2细胞共培养上清组PC12细胞存活率下降,差异有统计学意义(P<0.05);1 00μmol/L白藜芦醇组、50 μmol/L尼克酰胺组细胞存活率较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05),因此选择50 μmol/L白藜芦醇、25 μmol/L尼克酰胺进行实验;与对照组比较,LPS+BV-2细胞共培养上清组细胞存活率降低,SIRT1的表达下降,乙酰化p53的表达上升,差异有统计学意义(P<0.05),与LPS与BV-2共培养上清组比较,白藜芦醇干预组细胞活性上升,SIRT1的表达水平较高,乙酰化p53的表达量较低,尼克酰胺干预组结果相反,细胞活性下降,SIRT1的表达较低,乙酰化p53的表达较高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 在LPS与小胶质细胞共培养上清损伤多巴胺(DA)能神经元过程中,SIRT1具有保护作用,其机制与乙酰化p53受抑制有关.

  • 消退素D1(resolvin D1)抑制小鼠激活型小胶质细胞对PC12细胞的损伤及机制

    作者:郭慧玲;王艳萍;赵小娜;刘盼梅;连一闻;李新新;李明明;马民玉

    目的 探讨消退素D1(RvD1)在小鼠活化BV-2小胶质细胞介导PC12神经元损伤中所起的作用及相关机制.方法 BV-2细胞分为对照组、脂多糖(LPS)处理组、RvD1联合LPS处理组和RvD1组.各组BV-2细胞处理12 h、24h,ELISA检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;收集以上各组细胞培养24h的上清液培养PC12细胞24h后,MTT法检测PC12细胞存活率,Western blot法检测各组BV-2细胞核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白的水平.结果 与对照组比较,LPS处理的PC12细胞存活率降低,BV-2细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平均升高,NF-κB p65核转位增加;而与LPS处理组相比,RvD1联合LPS处理组PC12细胞存活率升高,BV-2细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量均降低,NF-κB p65核转位减少.结论 RvD1可通过抑制NF-κB p65核转位,抑制LPS激活的BV-2细胞对PC12神经元的损伤.

  • 亚低温抑制BV-2细胞脂多糖诱导的Toll样受体4活化和炎症因子表达

    作者:刘利;解启莲;李小双

    目的 探讨亚低温对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)及下游炎症因子表达的影响.方法 体外培养的BV-2细胞,分为33℃和37℃条件下的生理盐水组和LPS组.利用实时定量PCR检测BV-2细胞中TLR4、NF-κB mRNA表达,用Western blot法检测BV-2细胞中TLR4、NF-κB蛋白的表达,利用ELISA检测培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平.结果 LPS刺激BV-2细胞可导致炎性信号通路中的TLR4通路蛋白呈先升高后降低趋势,而通路下游的NF-κB蛋白表达呈持续上升趋势,炎性因子TNF-α、IL-1β的释放明显增加,亚低温明显抑制TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白表达及炎症因子的释放.结论 亚低温条件能够抑制BV-2细胞中LPS/TLR4通路,并抑制细胞因子TNF-α、IL-1β的表达.

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