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核因子E2相关因子2与肾间质纤维化研究进展
肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是慢性肾衰竭的主要原因之一,是各种慢性肾脏疾病的共同结果,其发病机制与肾间质成纤维细胞,肾小管上细胞,炎性细胞以及肾小管周围毛细血管内皮细胞的转型,损伤和数量相关[1].氧化应激是导致细胞损伤、衰老和死亡的主要原因之一,其在神经退行性疾病、缺血性心脏病、肝、肺纤维化和癫痫等重要疾病的发生和发展中起重要作用[2-4].核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路是近年来发现的非常重要的抗氧化应激通路[5].本文就Nrf2/ARE通路的新研究进展,及其在氧化应激所致肾间质纤维化中的作用综述如下.
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对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮对肾成纤维细胞增殖及白细胞介素-6产生的影响
肾间质成纤维细胞(KFB)的增殖及细胞因子的分泌在小管间质病变及肾间质纤维化的进展中起重要作用.研究显示,在多种肾脏疾病中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的效应可能是通过核转录因子(NF)-kB的活性改变来介导的[1,2], 提示AngII对KFB的部分作用可能是通过NF-kB来调控的.本研究建立人KFB培养,研究NF-kB特异性抑制剂--对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基甲酮(TPCK)对KFB增殖及分泌白细胞介素(IL)-6的影响,及其对AngⅡ诱导的KFB增殖及分泌 IL-6作用的效应,探索NF-kB通路在人KFB中的重要作用.
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TGF-β1对诱导肾间质成纤维细胞活化并表达MMP-9及TIMP-1的影响
目的 研究转化生长因子-β1(transforming growth factor beta-1,TGF-β1)诱导的肾间质成纤维细胞(NRK-49F)发生表型转化时基质金属降解酶MMP-9及其抑制因子TIMP-1表达的变化及对分泌纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的影响.方法 以不同浓度hTGF-β1(0 ng/ml、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)刺激NRK-49F细胞48 h,分别应用ELISA法检测细胞上清FN的浓度,免疫荧光检测细胞表型标记物α-SMA、Vimentin的表达,Western blot、Northern blotting方法检测MMP-9、TIMP-1的基因及蛋白质表达.结果 0.5~ 10 ng/ml TGF-β1随刺激浓度增高NRK-49F细胞表达α-SMA明显增多、Vimentin明显减少,细胞上清中FN的含量显著增加(P<0.05或P<0.01);同时,TGF-β1浓度>2 ng/ml时显著上调TIMP-1 mRNA及蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01);以上效应均呈浓度依赖性,但对细胞MMP-9mRNA及蛋白表达无明显影响(P>0.05).结论 TGF-β1能诱导肾间质成纤维细胞活化,使FN的分泌增多,该作用可能与TGF-β1上调了TIMP-1基因及蛋白质水平,进而减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的降解有关.
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细胞原代培养实验教学的实践与思考
所谓原代培养,是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养,也叫初代培养.原代培养离体时间短,遗传性状和体内细胞相似,适于做细胞形态、功能和分化等的研究.我院在大学一年级第1学期细胞生物学实验课中开设细胞原代培养课程,培养小鼠肾间质成纤维细胞.成纤维细胞具有较强的分裂增生能力,适应性强,是容易培养的动物细胞类型之一.一般情况下,只要取材得当,杜绝污染,都能培养成功.虽然成纤维细胞较易培养,但在大学一年级开设细胞原代培养,学生普遍对无菌操作技术较为陌生,动手能力相对较弱,而原代培养操作过程又比较烦琐,学生要在老师的讲授和演示后自己完成整个无菌操作过程,所应用的器材多、步骤多、难度大,不易取得良好的实验效果[1].同时由于学生才学习显微镜的使用不久,观察染色标本尚可,而要观察未经染色的活细胞,难度较大;而实验课的课时又有限,老师没有时间一一指导,有的同学实验课结束后仍不能掌握成纤维细胞的形态特征.在现有条件下,如何在实验课有限的时间内取得良好的实验效果和观察效果,成为实验教学中急需解决的问题.针对教学中所出现的问题,我们进行了有益的尝试,取得了良好的效果.
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中药防治肾间质纤维化的研究新进展
近年来,多项研究表明,各种肾脏病进行性肾功能恶化主要取决于肾间质纤维化(RIF)的严重程度,因此,RIF已越来越受人们重视.其发病机制十分复杂,早期表现可为肾小管-间质局部炎症,随后出现多种细胞生长因子大量分泌,可直接诱导肾小管上皮细胞(RTEC)及肾间质成纤维细胞(RIFS)向肌成纤维细胞转变、RTEC凋亡过多、RIFS大量增殖及凋亡减少,从而导致肾间质内细胞外基质成分(ECM)过度积聚,终形成RIF.
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肾间质纤维化的形成机制及中药防治作用
肾间质纤维化(renal fibrosis,RIF)是各种肾脏疾病发展到慢性肾衰竭的共同途径,主要病理特征表现为肾间质成纤维细胞的增生和细胞外基质的过度积聚.近年来,随着对肾间质纤维化发病机制的深入研究,现代医学抗肾间质纤维化治疗已取得了长足的发展,但其治疗效果尚不理想.而现代药理研究表明,中药在肾间质纤维化的防治中显示出其良好的应用前景.本文现就肾间质纤维化的形成机制以及中药防治作用研究进展作一综述.
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从瘀论肾间质纤维化的防治
肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis)是指由多种原因引起的细胞外基质(extracellular-matrix,ECM)成分在肾间质内过度沉积和肾间质成纤维细胞(fibroblast)的增生.肾问质纤维化几乎是所有慢性.肾脏疾病进行性发展的共同通路,是导致慢性肾衰竭(CRF)的病理学基础.现代医学对于肾间质纤维化发病机制的研究已逐步全面,其中尤以转化生长因子-β(TGF-β)直被认为是肾纤维化治疗的靶点.
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肾间质纤维化的发生机制及其中药防治进展
肾间质纤维化(renal interstitial fribrosis)是指由多原因引起的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)成分在肾间质内过度沉积和肾间质成纤维细胞(fibroblast)的增生.肾间质纤维化几乎是各种肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径和主要病理基础.有研究表明小管-间质纤维化组织学分级与肾小球硬化的组织学分级相比更能反映肾功能的丧失程度[1].
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NF-κB与肾间质纤维化
肾间质纤维化是各种肾脏疾病发展到终末期肾衰竭的终结果,其主要病理改变表现为肾间质成纤维细胞的增生和细胞外基质的过度积聚.大量的临床和动物实验表明,各种肾脏疾病肾功能恶化的主要程度取决于肾间质受损的程度,因此,肾间质纤维化这些年来倍受人们重视,相关研究进展很快.NF-κB是一种多向性调节作用的核转录因子,参与了许多肾脏疾病的发生发展过程.本文就近些年来国内外NF-κB在肾间质纤维化的相关研究进展作一综述.
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冬虫夏草治疗肾纤维化研究进展
肾纤维化是肾脏对慢性损伤的病理修复反应,以细胞外基质(extracelluar matrix, ECM)成分在肾脏过度增生与沉积为特征,是多种慢性肾病的共同病理基础与慢性肾病向终末期肾衰竭进展的重要途径.肾纤维化发生在肾间质和肾小球等部位,分别表现为肾间质纤维化与肾小球硬化.肾纤维化病理机制复杂,但主要在于肾脏ECM生成细胞的活化.肾脏ECM生成细胞包括肾间质成纤维细胞、肾小球系膜细胞与肾小管上皮细胞,这些细胞在氧自由基、细胞因子、内皮素与血管紧张素等多种因子的刺激下,发生活化或转分化,细胞表型改变,均表现为表达α-平滑肌肌动蛋白的肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB)[1].
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肾纤维化中西医治疗进展
肾纤维化是各种原因引起的慢性肾脏病( chronic kidney disease,CKD )进展至终末期肾病( end stage renal disease, ESRD)的共同病理特征,包括肾小球硬化( glomerular sclerosis, GS)、肾小管间质纤维化( renal tubule-interstitial fibrosis,TIF)和血管硬化。其典型病理特征表现为肾小球内固有细胞数量减少、细胞外基质( ECM)过度沉积、肾间质成纤维细胞( MF)增生及间质毛细血管丧失。
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复方鳖甲软肝片方对TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞增殖及分泌细胞外基质的影响
目的:观察中药“复方鳖甲软肝片方”对TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞(NRK-49F)增殖及分泌细胞外基质的影响。方法:以2 ng/ml hTGF -β1诱导 NRK -49F 细胞,并以软肝片方大、中、小剂量(分别以7g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg)药物血清进行干预,分别应用MTT法、ELISA、免疫细胞化学方法,观察肾间质成纤维细胞增殖、细胞上清FN浓度及ColⅠ、ColⅢ的表达。结果:软肝方含药血清对hTGF-β1诱导的细胞增殖无影响;但大、中剂量软肝方能不同程度地降低FN的分泌及ColⅠ、ColⅢ的表达,软肝方大剂量组作用强(P<0.01)。结论:复方鳖甲软肝片方在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞ColⅠ或ColⅢ的表达,大剂量软肝方作用强。
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舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的研究
目的:肾间质成纤维细胞增殖是肾间质纤维化的重要启动机制之一,本研究将探讨舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的影响及其调控机制.方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F),舒拉明以不同浓度(0,10,50,100 μmol/L)处理细胞,观察细胞数目变化,显微镜拍照,MTT方法检测细胞活性变化,免疫印迹技术检测细胞周期蛋白CyclinD1和P27的变化.结果:研究发现,舒拉明以剂量依赖性效应抑制细胞生长;MTT方法检测发现随着舒拉明剂量的加大,显著下调细胞增殖活性;通过检测细胞周期正向调控蛋白(CyclinD1)和细胞周期负向调控蛋白(P27),证实舒拉明可剂量依赖性效应抑制CyclinD1表达,增强细胞周期负向调控蛋白P27表达.结论:舒拉明可在体外以剂量依赖性效应抑制肾间质成纤维细胞增殖,可能与其调控细胞周期蛋白表达有关.
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参芪方血清对慢性肾衰大鼠肾脏细胞增殖的影响
目的观察参芪方对大鼠肾小球系膜细胞和肾间质成纤维细胞增殖的影响.方法应用血清药理实验方法,采用MTT 比色法观察正常和肾衰大鼠血清对体外培养的肾小球系膜细胞和肾间质成纤维细胞增殖的影响.结果与正常空白大鼠血清相比较,参芪方含药血清非常明显抑制两种细胞的增殖(P<0.001);与肾衰大鼠模型组血清相比,该方含药血清能够抑制两种细胞的增殖(P<0.001).结论参芪方能通过这种作用机制延缓实验性大鼠慢性肾功能衰竭的病程进展.
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联合应用血管紧张素Ⅱ与四氯化碳致大鼠肝纤维化模型研究
Hafizi等[1]证明,将心肌间质、肾间质成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)溶液中孵育,可促成纤维细胞增殖及细胞外基质(ECM)合成.将激活的肝星状细胞(HSC)在AngⅡ溶液中培养可促其收缩、分裂和增殖[2].
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铅对肾间质成纤维细胞转分化的诱导作用
目的 观察铅对大鼠肾间质成纤维细胞转分化的诱导作用,探讨铅对肾脏的损伤作用及其机制.方法 体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK/49F),加入不同浓度醋酸铅(0、0.5、1.0、2.0 μmol/L)作用24 h,应用实时荧光定量PCR技术比较各组细胞的成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白mRNA的表达.采用Western印迹法比较各组细胞FSP-1、α-SMA、波形蛋白和纤维连接蛋白(FN)的蛋白质表达.结果 经醋酸铅作用24 h,随着醋酸铅浓度增加,各醋酸铅处理组的FSP-1、α-SMA、波形蛋白mRNA表达水平和FSP-1、α-SMA、波形蛋白、FN蛋白质表达水平均逐步升高,与未处理组间的差异均有统计学意义(P值均<0.01).结论 醋酸铅在肾脏炎性反应中具有诱导细胞转分化的作用.
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转化生长因子-β1对大鼠肾间质成纤维细胞整合素α5表达的影响
近年来,整合素α5β1在器官纤维化发病中的作用受到广泛的重视,在实验性大鼠肝纤维化发病中激活的Ito细胞整合素α5β1mRNA及其蛋白表达增强,认为增多的整合素α5β1对介导细胞激活,并向成肌纤维细胞和成纤维细胞转化起重要作用,由此启动了器官纤维化、硬化的进程[1].
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蛋白酶体抑制剂对肾间质成纤维细胞凋亡和增殖的影响
目的:探讨泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F)及其在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下的细胞凋亡和增殖情况,并初步探索其机制. 方法:采用5 ng/ml的TGF-β1作用于NRK-49F,不同浓度(0~5 μM)的蛋白酶体抑制剂MG-132预处理NRK-49F细胞,应用MTT法检测其增殖情况,LDH法检测细胞毒性,应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态学变化,Western blot检测p-IκB,IκB蛋白的变化. 结果:TGF-β1(5ng/ml) 能促进NRK-49F的增殖(0.661±0.04 vs 0.495±0.06),MG-132 (0.25~5 μM)呈剂量依赖型抑制这种效应;MG-132(0.1~5 μM)对NRK-49F有一定的细胞毒性作用,在0.5 μM时达高峰;TGF-β1单独不能促使NRK-49F的凋亡[(3.8±0.4)% vs (4.7±1.6)%],但加用MG-132(0.1~2.5 μM)干预后呈剂量依赖关系促进细胞凋亡,MG-132单独也有促进细胞凋亡作用;MG-132(0~1 μM)作用于TGF-β1诱导的NRK-49F后,其S期比例呈剂量依赖关系显著减少,G1期细胞比例增加;Hoechst 33258染色显示MG-132(0.5 μM)+TGF-β1组及MG-132组细胞核均出现核固缩、核碎裂、凋亡小体等凋亡特异形态学改变;Western blot结果显示,TGF-β1及MG-132(2.5 μM)+ TGF-β1均能以时间依赖方式诱导p-IκB、IκB蛋白表达增加,且MG-132能上调TGF-β1诱导下的p-IκB,IκB蛋白表达. 结论:泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对正常及病理状态下的NRK-49F都有促凋亡作用,并可能通过G1期阻滞过程来抑制其增殖作用.其机制可能与MG-132阻断IκB蛋白的泛素化降解有关.
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益肾降浊方防治慢性肾衰肾组织纤维化的机理研究
目的:观察益肾降浊方对5/6肾切除慢性肾衰(CRF)大鼠肾组织TGF-β1、BMP-7及体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞(MC)和贤间质成纤维细胞(FC)增殖情况,探讨益肾降浊方治疗慢性肾功能衰竭的机理.方法:采用动物模型和细胞培养的方法.清洁级7周龄雄性SD大鼠60只,随机分为空白组、假手术组、CRF模型组、CRF对照组、CRF治疗组.分别进行手术造模并予不同药物治疗后,免疫组化法观察肾组织TGF-β1、BMP-7;体外培养SD大鼠肾小球系膜细胞(GMC)、肾间质成纤维细胞(RIF),制备各组含药血清,细胞给药后MTT法测定细胞增殖情况.结果:益肾降浊方可降低CRF大鼠血清BUN、SCr(P<0.05),降低残余肾组织中TGF-β1而提高BMP-7(P<0.05);肾组织HE染色结果示肾组织纤维化减轻;益肾降浊方含药血清能抑制体外培养SD大鼠GMC和RIF的增殖(P<0.05).结论:益肾降浊方能够有效地减缓慢性肾衰肾组织纤维化发展,是防治慢性肾衰的有效方药.
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扶肾降浊法含药血清对肾小管间质损害大鼠成纤维细胞COLⅠ及COLⅢ mRNA和蛋白表达的影响
目的 观察扶肾降浊法中药对系膜增生性肾炎大鼠肾小管间质成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原(COL Ⅰ及COLⅢ)mRNA和蛋白的调节作用.方法 采用扶肾降浊法中药水溶液灌胃Wistar大鼠常规制备含药血清,体外培养12、16、20周龄系膜增生性肾炎大鼠模型的肾间质成纤维细胞,采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法研究扶肾降浊法含药血清对病理状态间质成纤维细胞COLⅠ及COLⅢmRNA和蛋白表达的影响.结果 系膜增生性肾炎模型大鼠肾间质成纤维细胞的COLⅠ及COLⅢmRNA和蛋白表达上调(P<0.05),扶肾降浊法含药血清能下调病理状态肾间质成纤维细胞的COLⅠ及COLⅢmRNA和蛋白表达(P<0.05).结论 扶肾降浊法含药血清可下调病理状态肾间质成纤维细胞的COL Ⅰ及COLⅢmRNA表达,减少COLⅠ及COLⅢ蛋白表达,对肾间质成纤维细胞具有保护作用.