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p53在苯并[a]芘诱导所致p21和细胞周期蛋白改变中的作用
目的 探讨在苯并[a]芘(B[a]P)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)中p53蛋白对p21、cyclin D1和CDK4蛋白间相互作用的影响.方法 向转染p53小干扰RNA(p53 siRNA)质粒的HELF细胞即p53-H细胞组、载体CMV的HELF细胞即HELF/CMV细胞组中分别加入2μmol/L B[a]P作用24 h,向p53化学抑制剂Pifithrin-α(PFT-α)组即HELF/CMV+ PFT-α细胞组中同时加入2μmol/L B[a]P和20 μmol/L PFT-α作用24 h,各组同时设立不做任何处理的对照组.用免疫印迹(Western blot)法检测细胞中p53、p53-ser20以及p21、cyclin D1和CDK4蛋白水平的变化,同时利用免疫沉淀方法分析p53蛋白对p21、cyclin D1以及CDK4蛋白间相互作用的影响.结果 利用PFT-α或p53 siRNA技术抑制p53蛋白后,B[a]P诱导的p53蛋白20位丝氨酸磷酸化水平和p21蛋白水平的增高受抑制,B[a]P诱导的cyclin D1水平的增加不受影响,CDK4的水平不受B[a]P的影响;免疫沉淀实验结果表明,B[a]P引起的p21和CDK4结合的增加受到抑制,B[a]P引起的p21与cyclin D1结合的增加不受影响,cyclin D1和CDK4的结合不受B[a]P的影响.结论 B[a]P通过p53-ser20影响人胚肺成纤维细胞p21和CDK4的结合.
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洛伐他汀对MCF-7细胞核转录因子和细胞周期调控蛋白表达的影响
目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(LOV)对MCF-7乳腺癌细胞核转录因子(IκBα)和细胞周期调控蛋白表达的影响.方法 MCF-7乳腺癌细胞经4 μmol/L、8μmol/L和16 μmol/L终浓度的LOV处理后,流式细胞仪观察细胞周期分布状况, Western blot分析胞浆中IκBα、CDK4、p16、pRb的蛋白表达及核内IκBα的蛋白表达. 结果不同剂量的LOV处理48～72 h能显著阻滞MCF-7细胞细胞周期于G0/G1期,且具有一定的剂量-效应和时间依赖关系; 同剂量的LOV能显著下调胞浆内IκBα、CDK4和pRb蛋白表达,上调核内IκBα蛋白表达,但对p16蛋白表达无明显影响. 结论洛伐他汀可能通过影响IκBα和细胞周期调控蛋白的表达,诱导MCF-7细胞周期受阻于G0/G1期.
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细胞周期调控蛋白与肾脏疾病
无论是生理情况下或病理情况下,细胞都在进行着分裂、增殖、肥大或凋亡与坏死,而这一系列细胞分裂增殖活动受到细胞周期调控蛋白的调节.本文主要就细胞周期调控蛋白与肾脏疾病之间的关系和相关进展作一综述.
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全反式视黄酸对新生鼠头盖骨成骨细胞的影响
目的:探讨全反式视黄酸(ATRA)对体外培养的新生大鼠成骨细胞增殖与分化的影响.方法:从新生大鼠颅骨分离出成骨细胞,细胞增殖实验采用噻唑盐(MTT)比色试验法;细胞分化实验采用氨基安替比林法(金氏法)测定碱性磷酸酶(ALP)的活性,并用免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1表达的影响,研究ATRA对成骨细胞代谢的影响及部分作用机制.结果:培养液中加入10-5、10-6、10-7、10-8和10-9mol/L ATRA培养72 h对成骨细胞有促细胞增殖作用,而10-5、10-6、10-7mol/L的ATRA在24、48、72 h均能显著促进成骨细胞分化,免疫细胞化学染色Cyclin D1蛋白表达降低.结论:ATRA对成骨细胞具有促增殖和诱导分化作用,细胞周期调控蛋白可能在ATRA诱导成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用.
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甲状腺肿瘤中的分子标志物
确定能鉴别良、恶性甲状腺肿瘤的特异性分子标志物，建立可靠、可行的检测手段，对甲状腺肿瘤病人的诊断及治疗具有重要意义。近年研究表明，不同组织类型的甲状腺肿瘤中可存在不同的基因突变；在恶性甲状腺肿瘤中端粒酶活性常异常增高；一些细胞周期调控蛋白在甲状腺癌中特异性表达。本文综述上述肿瘤标志物与甲状腺肿瘤的关系及其潜在临床意义的研究进展。
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苦参碱对白血病细胞癌基因和细胞周期调控蛋白表达的影响
目的:探讨在苦参碱诱导下,白血病细胞株K562增殖和分化时相关癌基因及细胞周期调控蛋白表达的改变及意义。方法:应用分子生物学Northern Blot和Dot Blot杂交技术检测人红白血病细胞株K562在苦参碱作用后的c-myc、N-ras及p53 mRNA表达;同时用Western Blotting-ECL分析苦参碱作用前、后24、48、72小时K562细胞CyclinD1,CyclinE,Cdk2,Cdk5的不同表达水平。结果:在增殖的K562细胞(培养48小时)中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在苦参碱作用24小时分化启动的细胞中,随着DNA合成减少,N-ras、p53 mRNA表达增强;c-myc mRNA表达明显受抑;同时CyclinD,Cdk5表达增强。结论:苦参碱抑制K562细胞增殖并诱导分化可能与相关癌基因表达和CyclinD1/Cdk5,CyclinE/Cdk2不同表达有关。
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舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的研究
目的:肾间质成纤维细胞增殖是肾间质纤维化的重要启动机制之一,本研究将探讨舒拉明对血清刺激的大鼠肾间质成纤维细胞增殖的影响及其调控机制.方法:体外培养大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49F),舒拉明以不同浓度(0,10,50,100 μmol/L)处理细胞,观察细胞数目变化,显微镜拍照,MTT方法检测细胞活性变化,免疫印迹技术检测细胞周期蛋白CyclinD1和P27的变化.结果:研究发现,舒拉明以剂量依赖性效应抑制细胞生长;MTT方法检测发现随着舒拉明剂量的加大,显著下调细胞增殖活性;通过检测细胞周期正向调控蛋白(CyclinD1)和细胞周期负向调控蛋白(P27),证实舒拉明可剂量依赖性效应抑制CyclinD1表达,增强细胞周期负向调控蛋白P27表达.结论:舒拉明可在体外以剂量依赖性效应抑制肾间质成纤维细胞增殖,可能与其调控细胞周期蛋白表达有关.
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细胞周期调控蛋白在乙型肝炎病毒相关性IgA肾病与原发性IgA肾病肾组织表达对比研究
目的 探讨细胞周期调控蛋白cyclin D1、p27及p57在乙型肝炎病毒相关性IgA肾病(HBV-IgAN)与原发性IgA肾病(pIgAN)中肾组织表达变化及意义.方法 以2008年1月至2010年7月在南京军区福州总医院并经肾穿刺活检病理诊断为HBV-IgAN患者29例、pIgAN患者32例为研究对象.采用免疫组化方法检测29例HBV-IgAN和32例pIgAN患者肾活检组织中cyclin D1、p27及p57的表达情况,分析其与临床病理指标的关系.8例正常肾组织为对照.结果 在正常肾组织的肾小球中cyclin D1呈微弱表达或不表达,p27及p57呈高表达..随着病变加重,肾小球中cyclin D1逐渐上调,p27表达逐渐下调,两种疾病之间差异无统计学意义;与正常组相比,p57表达在pIgANⅡ级组无明显变化,而HBV-IgANⅡ级组明显下调(P＜0.01),pIgANⅢ～Ⅳ级和HBV-IgANⅢ～Ⅳ级组表达弱,差异无统计学意义.肾小球发生球囊粘连、硬化时cyclin D1表达上调,p27和p57表达均下调;伴新月体者肾小球p57的表达明显下调,而p27和cyclin D1无明显变化.肾小球p57表达在尿蛋白＞1.0 g/24 h组显著低于≤1.0 g/24 h组(P＜0.05),两种疾病之间差异无统计学意义.结论 HBV-IgAN与pIgAN中cyclin D1上调和p27下调促进肾小球病变的进展.足细胞p57表达下调在HBV-IgAN出现较早,促进蛋白尿的形成及新月体的形成.
关键词： 细胞周期蛋白 细胞周期调控蛋白 乙型肝炎病毒相关性肾炎 IgA肾病 -
急性肾损伤与细胞周期调控
急性肾损伤是临床常见的危重症,病死率高.急性肾损伤导致的细胞增生、肥大或凋亡与细胞周期调控有关,其中细胞周期G1/S检测点和G2/M检测点是急性肾损伤细胞周期的关键调控靶点,而细胞周期调控蛋白在其中起着关键性作用.但其确切调控机制尚不清楚,该文就急性肾损伤细胞周期调控机制进行简要概述.
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体外siRNA-GAS5干扰肝癌HepG2细胞生物学行为改变
目的 探究生长特异性调节转录因子5 (GAS5)在肝癌组织表达及GAS5小干扰RNA(siRNA-GAS5)转染对HepG2肝癌细胞的侵袭增殖的影响,并进一步分析其可能的调控机制.方法 选取手术肝癌切除的癌组织及其癌旁组织20例,qRT-PCR检测肝癌及其癌旁组织长链非编码RNAGAS5(GAS5)表达以及Western blot检测周期依赖性蛋白激酶6(CDK6)表达.利用脂质体转染siRNA-GAS5干扰HepG2细胞株中GAS5表达水平,划痕实验、Transwell和CCK-8检测转染后HepG2细胞的迁移、侵袭及增殖能力,流式细胞仪检测干扰后HepG2细胞凋亡周期变化.Westernblot、qRT-PCR验证细胞周期调控蛋白周期素D1(CyclinD1)、CDK6、E2F-1表达.结果 肝癌组织中GAS5表达水平低于对应癌旁组织,CDK6表达高于癌旁组织.转染siRNA-GAS5的HepG2细胞迁移侵袭增殖能力明显增强.转染siRNA-GAS5的HepG2细胞Cyclin D1、CDK6、E2F-1蛋白表达下降,干扰后的HepG2细胞周期发生G1/S期改变.结论 GAS5在肝癌组织的表达出现下调;GAS5可明显抑制肝癌细胞迁移、侵袭及增殖能力;GAS5调控肝癌细胞周期变化可能是通过CyclinDl/CDK6/E2F-1通路.
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急性肾损伤组织中细胞周期调控蛋白的表达变化及其意义
目的 观察细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)、p21在不同原因所致急性肾损伤(AKI)组织中的表达变化,并探讨其意义.方法 选择行肾穿刺活检术的患者纳入研究,包括AKI患者108例和无器质性肾脏病变的肾功能异常的患者(对照组)39例.AKI患者中,肾毒性AKI 63例(肾毒性AKI组)、缺血性AKI 45例(缺血性AKI组).取各组肾穿刺活检标本,采用免疫组织法检测Cyclin B1、CDK4、p21蛋白.结果 肾毒性AKI组、缺血性AKI组的肾小管细胞和肾间质中p21、Cyclin B1、CDK4蛋白表达积分均高于对照组(P均<0.05).肾毒性AKI组及缺血性AKI组肾组织中Cyclin B1、CDK4、p21蛋白表达积分相比,P均>0.05.结论 AKI组织中p21、Cyclin B1、CDK4蛋白表达上调,在肾毒性AKI和缺血性AKI中三种细胞周期调控蛋白表达变化的趋势一致;细胞周期调控蛋白的表达与AKI病因无关.
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SLC22A18表达抑制胶质瘤细胞增殖的分子机制
有研究表明,SLC22A18表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖和恶性生物学特征[1-2],推测SLC22A18调控U251细胞重要细胞周期调控蛋白p21和p27是其抑制U251细胞增殖的主要机制.本研究旨在探讨SLC22A18表达抑制胶质瘤U251细胞增殖的分子机制,揭示SLC22A18的基因功能.
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细胞周期调控蛋白在K562细胞的表达及意义
目的:探讨细胞周期调控蛋白CyclinD1,CyclinE,Cdk2,Cdk5在K562细胞增殖和分化时的不同表达.方法:本实验采用Western-Blotting-ECL方法分析了苦参碱作用K562细胞前、后24,48,72h,CyclinD1,CycliE,Cdk2,Cdk5的不同表达.结果:在增殖的K562细胞中,伴随着DNA合成增加,CyclinE和Cdk2保持高表达;而在分化的细胞中,随着DNA合成减少,CyclinD1,Cdk5表达增强.结论:在细胞从增殖向分化途径逆转时,伴随着一些特殊的Cyclin/Cdk表达的改变.
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儿茶素对肾病大鼠肾小球脏层上皮细胞增生的影响
目的探讨儿茶素对肾小球上皮细胞增生的影响,阐明儿茶素对防治肾病综合征的部分可能机制.方法 36只SD雌性大鼠随机分成正常组、肾病组、激素组、儿茶素预防组、儿茶素治疗组、儿茶素+激素治疗组共6组.实验末应用生化法测定24h尿蛋白排泄量,应用免疫组化法测定肾小球上皮细胞细胞周期调控蛋白P21、P27、TGF-β1、PCNA阳性表达率,并应用半定量评分法对各组大鼠肾小球与肾小管间质病理改变进行计量分析.结果与肾病组相比,儿茶素治疗组、儿茶素预防组,儿茶素+激素联合治疗组大鼠肾小球上皮细胞P21 (P＜0.01)、P27 (P＜0.01)、TGF-β1 ( P＜0.05,0.05,0.01) 表达降低,差异有显著意义,CyclinD1(P＜0.01,0.05,0.01)、PCNA(P＜0.05,0.01,0.01)表达,差异有显著意义.实验末,24h尿蛋白的排泄量依次为:肾病组＞儿茶素治疗组＞儿茶素预防组＞激素治疗组＞联合组,各组与肾病组大鼠相比,差异有显著意义.病理损害儿茶素治疗组、儿茶素预防组,儿茶素+激素联合治疗组大鼠较肾病组减轻 (P＜0.05,0.01,0.01)表达,差异有显著意义.病理积分与实验末24h尿蛋白排泄及肾小球上皮细胞P21、P27、TGF-β1表达正相关(γ＝0.748,0.702,0.821,0.687,P＜0.01)与肾小球上皮细胞PCNA与CyclinD1表达负相关(γ＝-0.668,-0.744,P＜0.01).结论儿茶素可通过增强肾小球上皮细胞增生能力及降低尿蛋白排泄而减轻肾脏损伤.
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CyclinD1/CDK4在洛伐他汀抑制裸鼠乳腺癌移植瘤增殖中的作用
目的以裸鼠乳腺癌异种移植瘤动物模型为研究对象,检测了洛伐他订(LOV)对高表达BRCA1基因乳腺癌异种移植瘤生长能力的影响,并初步探讨了其作用的分子机制.方法将pcDNA3-beta-HA-hsBRCA1 质粒进行扩增、鉴定后,运用脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,经RT-PCR 、Western blotting鉴定转染后BRCA1的表达,以2×106个MCF-7、MCF-7BRCA1细胞接种BALB/c裸鼠,建立乳腺癌细胞异种移植瘤动物模型,肿瘤生长4周后,皮下注射LOV [50 mg/(kg·d)]10 d,检测肿瘤的增殖能力和组织病理学变化,RT-PCR 、Western blotting 检测 cyclinD1、CDK4 mRNA 及蛋白表达.结果裸鼠分别接种 MCF-7、MCF-7BRCA1细胞后均能长出肿瘤,成瘤率为100%,组织病理切片观察其生物学特性没有发生改变;经LOV干预10 d后,MCF-7细胞和MCF-7BRCA1细胞移植瘤体积均缩小,移植瘤内cyclinD1、CDK4 mRNA 及蛋白表达降低;癌细胞数减少,坏死灶增多,且MCF-7BRCA1细胞移植瘤组变化更明显.结论洛伐他汀明显阻滞高表达BRCA1基因乳腺癌异种移植瘤的生长、增殖,这可能与移植瘤组织内cyclinD1、CDK4表达的降低有关,该效应提高了乳腺癌异种移植瘤对洛伐他汀的敏感性,增强了洛伐他汀的抗肿瘤作用.
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洛伐他汀对BRCA1高表达MCF-7乳腺癌细胞周期调控蛋白的影响
目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(lovastatin, LOV)对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞株细胞周期调控蛋白表达的影响.方法将BRCA1基因进行扩增、鉴定后,运用脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖功能,RT-PCR方法检测细胞周期调控蛋白cyclinD1、cyclinD3、CDK2、CDK4的mRNA以及Western blot检测cyclinD1、CDK4蛋白表达水平.结果 LOV处理后,细胞的增殖能力减弱,cyclinD1、 cyclinD3、CDK2、CDK4 mRNA表达及cyclinD1、CDK4蛋白表达均降低,其中,以BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞株经LOV处理后变化更为显著.结论 BRCA1基因在LOV诱导的细胞周期蛋白抑制中可能起重要作用,其高表达增强了MCF-7乳腺癌细胞对LOV的敏感性和LOV对乳腺癌细胞的增殖抑制作用.
