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胎盘组织——间充质干细胞的新来源
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是早分离自人骨髓组织的一类具有多向分化潜能的干细胞[1],随后陆续在人脂肪组织、外周血、肌肉和结缔组织中也发现了MSC[2-5].目前MSC是临床研究普遍的细胞来源,在组织工程研究、刨伤修复和肿瘤治疗等领域应用广泛,但MSC在骨髓、外周血等组织中的含量极低,并且有研究表明MSC含量会随着人年龄的增长而逐渐降低,同时细胞的增殖分化能力也大大下降[6].
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人脂肪组织来源内皮祖细胞的分离、培养及鉴定方法的实验研究
目的 探讨人脂肪组织来源的内皮祖细胞的分离、培养及鉴定的方法.方法 脂肪抽吸术获取人体脂肪组织,消化法得到的细胞接种在Fibronectin包被的培养皿内,用含2%胎牛血清的DMEM培养,传至第2代,分诱导组(EGM-2,2%FBS,VEGF,bFGF等)和非诱导组(DMEM,2%FBS)两组进行培养.免疫细胞荧光分别检测两组的CD34、vWF和PECAM-1表达;流式细胞仪分别检测两组的CD34、CD45、CD133和PECAM-1表达率;荧光显微镜观察细胞摄取DiI-ac-LDL的功能;诱导组细胞接种于甲基纤维素半固体培养基进行三维培养,观察血管样结构形成情况.结果 诱导组细胞12 d后呈现内皮细胞典型的铺路石样形态,未诱导组细胞未观察到这种变化;免疫细胞荧光显示诱导组vWF、PECAM-1表达阳性,未诱导组细胞CD34表达阳性;流式细胞仪检测显示诱导组PECAM-1阳性率为(67.41±13.35)%,明显高于非诱导组的(6.73±2.21)%(P＜0.01),非诱导组CD34阳性率为(72.39±13.45)%,明显高于诱导组的(16.06±3.86)%(P＜0.01);荧光显微镜观察显示诱导组细胞具有摄取DiI-ac-LDL的功能;诱导组细胞三维培养形成"树枝样"分叉结构.结论 建立了一种从人脂肪组织分离、培养EPCs的方法,并对其表型进行鉴定,有望为血管组织工程提供新的种子细胞来源.
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褪黑素对人脂肪来源的间充质干细胞向内皮细胞分化的促进作用研究
人脂肪来源的间充质干细胞(hADSC)是人脂肪组织中不同成熟阶段的脂肪前体细胞中分化程度差的一种,具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件要求低、扩增能力强等特点,是组织工程化的优秀种子细胞.褪黑素是一种具有较强自由基清除功能的吲哚类激素.褪黑素不但对血管内皮细胞(EC)的损伤有保护作用,且可以促进EC的增殖[1-2].我们拟研究褪黑素对hADSC分化为EC过程的作用,并观察该过程中细胞内游离钙离子([Ca2+]i)的变化以及对细胞外调节激酶/ERK/MAPK信号通路的影响.
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脂肪组织中血管基质部分细胞向内皮细胞诱导分化的实验研究
目的 探讨脂肪组织中血管基质部分(Stromal vascular fraction,SVF)细胞向内皮细胞诱导分化的方法.方法 脂肪抽吸术获取人脂肪组织.消化法得到的细胞接种在FN包被的培养皿内,细胞培养,传至第2代,分诱导组和非诱导组进行培养.免疫细胞荧光分别检测诱导组和非诱导组的vWF表达;流式细胞仪分别检测诱导组和非诱导组的CD34、CD45、CD133和PECAM-1表达率:荧光显微镜观察细胞摄取DiI-ac-LDL的功能.结果 诱导组细胞12 d后呈现内皮细胞典型的铺路石样形态:免疫细胞荧光显示诱导组vWF表达阳性;荧光显微镜观察显示诱导组细胞具有摄取DiI-ac-LDL的功能;流式细胞仪检测显示诱导组PECAM-1阳性率为(67.41 ±13.35)%,明显高于非诱导组的(6.73±2.21)%(p＜0.01),非诱导组CD34阳性率(72.39±13.45)%,明显高于诱导组的(16.06±3.86)%阳性率(p＜0.01).结论 脂肪组织中血管基质部分细胞能够诱导分化为成熟内皮细胞,有望为血管组织工程提供新的种子细胞来源.
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人脂肪组织来源CD34+/CD31-细胞向内皮细胞诱导分化的实验研究
目的 探讨将人脂肪组织来源CD34+/CD31-细胞诱导为内皮细胞的可行性.方法 脂肪组织来自5例接受脂肪抽吸术的患者,酶消化法获取原代细胞,细胞扩增培养至第二代,应用免疫磁珠仪分选CD34+/CD31-细胞.将此群细胞用VEGF及bFGF进行诱导.流式细胞仪检测分选前后细胞纯度;免疫细胞荧光检测细胞vWF和CD31的表达;荧光显微镜观察细胞摄取低密度脂蛋白的功能;三维培养观察细胞形成血管样结构的能力.结果分选前后CD34+/CD31-细胞比例分别为(12.57±1.83)%和(96.05±6.73)%;细胞诱导10d后呈现内皮细胞典型的"铺路石"样形态,vWF、CD31表达阳性,细胞具有摄取低密度脂蛋白的功能,三维培养条件下形成"树枝样"分叉结构.结论人脂肪组织来源的CD34+/CD31-细胞能够诱导分化为成熟内皮细胞.
