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丝裂原激活蛋白激酶信号转导系统对维甲酸诱导NIM细胞分化的影响
本研究观察丝裂原活化蛋白激酶对全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化的影响并探讨其机制.采用MTT 法测定细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期,NBT还原实验检测粒系分化,底物磷酸化法测定细胞外调节激酶(ERK)活性.结果显示:0.01-0.1 μmol/L 的ATRA呈时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖,并诱导NB4细胞向粒系分化;在这过程中ATRA激活ERK活性,ERK抑制剂PD98059能部分阻断ATRA的作用.p38MAPK的特异抑制剂SB203580与ATRA联合应用部分阻断了ATRA对细胞的生长抑制和诱导分化作用.结论:ATRA在诱导NB4细胞分化过程中激活ERK和P38MAPK途径,并且对该途径有依赖作用.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶类 细胞外调节激酶 白血病 NB4细胞 全反式维甲酸 -
苯那普利对高血压大鼠细胞外信号调节激酶和B型钠尿肽的影响
目的 研究苯那普利对自发性高血压大鼠(SHR)细胞外信号调节激酶(ERK)和B型钠尿肽(BNP)的影响.方法 选择Wistar Kyoto(WKY)大鼠作对照,将21只14周龄雄性SHR随机分成3组:SHR未治疗组、SHR肼苯哒嗪组和SHR苯那普利组,每组7只.药物溶于载体(0.5%羧甲基纤维素钠)以灌胃法给予,肼苯哒嗪10mg·kg-1·d-1,苯那普利10mg·kg-1·d-1,SHR未治疗组及WKY组灌喂载体,共10周.以左心室重量与体重的比值反映心肌肥厚的程度;用袖带式尾动脉测压法测量大鼠尾动脉血压;分别用Western blot方法和RT-PCR法半定量测定大鼠心肌中磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达以及BNP mRNA的含量;酶联免疫吸附法检测大鼠血浆BNP水平.结果 ①治疗后SHR苯那普利组和SHR肼苯哒嗪组血压相似,均显著低于SHR未治疗组(P＜0.01).②SHR苯那普利组心肌肥厚指数显著低于SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组(P＜0.01),与WKY组无显著差异(P＞0.05);SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组心肌肥厚指数无显著差异(P＞0.05).③SHR苯那普利组大鼠心肌p-ERK表达显著低于 SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组(P＜0.05),与WKY组无显著差异(P＞0.05).SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组大鼠心肌p-ERK表达无明显差异(P＞0.05).④SHR苯那普利组大鼠心肌BNP mRNA和血浆BNP水平显著低于SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组(P＜0.05),与WKY组无显著差异(P＞0.05);SHR肼苯哒嗪组和SHR未治疗组大鼠心肌BNPmRNA和血浆BNP水平无明显差异(P＞0.05).结论 苯那普利能通过抑制ERK活性逆转心肌肥厚,伴随BNP水平下降;而降压效果相似的肼苯哒嗪不能抑制心肌肥厚,对p-ERK和BNP水平没有影响,提示BNP水平可以反映逆转心肌肥厚药物疗效.
关键词： 血管紧张素转化酶抑制剂 细胞外调节激酶 B型钠尿肽 心肌肥厚 -
ERK/MAPK通路参与肝癌产生多药耐药的胞内信号传导
目的 探讨微环境诱导肝癌产生多药耐药的胞内信号传导途径.方法 分别使HepG2细胞在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合HBX基因,运用Western蛋白印迹法检测这些细胞内ERK/MAPK的活性.用ERK/MAPK特异性阻断剂U0126处理这些细胞后,用Western蛋白印迹法检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和多药耐药相关蛋白的表达变化,逆转录聚合酶链反应和免疫细胞化学技术分别检测HIF-1α在mRNA水平表达量和部位的改变.结果 不同环境下生长的HepG2细胞中,磷酸化/非磷酸化ERK/MAPK比例均有不同程度的增高.用U0126处理12 h后,这些细胞中HIF-1α和多药耐药相关蛋白的表达下降,且HIF-1α表达由胞核向胞质转位,其mRNA水平无显著变化.结论 ERK/MAPK信号通路是微环境诱导肝癌产生多药耐药的重要胞内信号传导途径.
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哮喘大鼠气道平滑肌细胞ERK信号通路调控Smad6/7的研究
目的 探讨在哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)中ERK信号通路对Smad6/7蛋白的调控.方法 复制哮喘大鼠模型,原代培养ASMC,实验设未干预组(A组)、细胞外调节激酶(ERK)阻断剂(U0126)组(B组)、血小板源性生长因子(PDGF)组(C组)、PDGF+ERK阻断剂组(D组).免疫组化法测定Smad6/7蛋白的表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Smad6/7 mRNA表达.结果 哮喘大鼠ASMC中Smad 6/7蛋白B组显著高于A组(P＜0.01),C组显著低于A组(P＜0.01),D组与A组比较无统计学差异(P＞0.05)；各组哮喘大鼠ASMC中Smad6/7 mRNA表达无统计学差异.结论 哮喘大鼠ASMC中ERK信号通路调控Smad6/7的作用发生在蛋白水平,不发生于基因水平.
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ERK激活对SDF-1引起的大鼠海马神经元GABA分泌抑制的影响
目的:观察细胞外调节激酶(ERK)信号通路激活对基质细胞衍生因子(SDF-1)引起离体培养的大鼠海马神经元γ-氨基丁酸(GABA)分泌的影响.方法:新生SD大鼠海马神经元离体培养,Western blot法观察ERK1/2信号通路的磷酸化水平;ELISA法和RT-PCR技术检测ERK1/2特异性阻断剂PD98059作用于离体培养的海马神经元后GABA分泌的改变;谷氨酸脱羧酶(GAD65/67)和γ-氨基丁酸转运体(GAT)的蛋白表达量及GAD65和GAT-1mR-NA表达水平.结果:SDF-1作用于海马神经元可引起ERK1/2磷酸化水平明显升高,同时加用CXCR4受体阻断剂AMD3100,可阻断SDF1引起的ERK1/2激活;SDF-1可明显抑制离体培养的海马神经元GABA的分泌,同时加用ERK1/2特异性抑制剂PD98059,可部分逆转SDF-1对GABA分泌的抑制作用;SDF-1作用于离体培养的海马神经元,可抑制谷氨酸脱羧酶GAD65和GABA转运体GAT-1 mRNA的生成;ERK抑制剂PD98059可有效翻转SDF-1的作用.Westem blot结果发现SDF-1可抑制海马神经元GAT-1和GAD65/67蛋白的表达,加用ERK1/2抑制剂可部分恢复GAT-1和GAD65/67蛋白合成.结论:SDF1作用于离体培养的海马神经元CXCR4,通过激活ERK1/2信号通路进而抑制GAD蛋白表达,可能是其介导GABA分泌抑制的通路之一.
关键词： 海马神经元 γ-氨基丁酸 细胞外调节激酶 基质细胞衍生因子-1 大鼠 -
褪黑素对人脂肪来源的间充质干细胞向内皮细胞分化的促进作用研究
人脂肪来源的间充质干细胞(hADSC)是人脂肪组织中不同成熟阶段的脂肪前体细胞中分化程度差的一种,具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件要求低、扩增能力强等特点,是组织工程化的优秀种子细胞.褪黑素是一种具有较强自由基清除功能的吲哚类激素.褪黑素不但对血管内皮细胞(EC)的损伤有保护作用,且可以促进EC的增殖[1-2].我们拟研究褪黑素对hADSC分化为EC过程的作用,并观察该过程中细胞内游离钙离子([Ca2+]i)的变化以及对细胞外调节激酶/ERK/MAPK信号通路的影响.
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ERK信号传导调节脑缺血再灌注中脑源性神经营养因子介导的神经保护作用
目的 研究大脑缺血再灌注中脑源性神经营养因子(BPNF)神经保护效应的机制以及细胞外调节激酶信号通路在其中的作用.方法 SD大鼠被随机分为A、B、C三组,每组6只,所有的大鼠均经历大脑中动脉阻断诱发的脑局灶性缺血再灌注过程,此过程持续45 min.B组给予BDNF以产生神经保护,C组采用选择性Raf-1信号分子抑制剂Bay43-9006抑制细胞外调节激酶信号通路.脑损伤用甲酚紫染色加图像分析评估,细胞外调节激酶和2的磷酸化水平采用免疫印迹杂交测定.结果 经过缺血再灌注过程,额叶脑组织的损伤比例为(16.48±5.72)％；在使用BDNF预处理的情况下,脑组织损伤比例显著降低至(6.32±3.08)％(P=0.039).使用Raf-1抑制剂之后,细胞外调节激酶的磷酸化水平显著降低,包括细胞外调节激酶1 (P=0.0084)和细胞外调节激酶2(P=0.029).与此同时,BDNF的神经保护效应明显减弱,与对照相比没有显著差异.结论 在大鼠脑缺血再灌注中,BDNF可以抵抗损伤,细胞外调节激酶信号通路是BDNF这种抗损伤效应的关键信号调节通路.
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红景天对梗死大鼠心肌细胞外调节激酶(ERK 1/2)活性的研究
目的:研究红景天对梗死心肌细胞外调节激酶(ERK 1/2)的影响以及与其促血管新生作用的关系.方法:采用大鼠冠状动脉前降支结扎法造成急性心肌梗死模型,造模组随机分成红景天喂养组和生理盐水组,并另设正常组和假手术组.检测造模后1、4、7和14 d分别留取的梗死边缘心肌或正常心肌组织VEGF受体Ⅱ、CD34的表达和ERK 1/2的活性.结果:造模后1 d至4 d ERK 1/2的活性,以及4 d至14 dVEGF受体Ⅱ、CD34的表达,均是红景天组较生理盐水组表达高.结论:红景天能增高梗死心肌ERK 1/2的活性.该作用早于其对心肌的促血管新生作用.
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干扰胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1表达对鼻咽癌细胞生物学行为的影响
目的:采用RNA干扰技术抑制胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein related protein 1,IGFBP-rP1)表达后,观察鼻咽癌细胞系CNE1和CNE-2Z生物学行为的变化,并探讨其可能的分子机制.方法:通过免疫组织化学法检测25例鼻咽癌组织和22例慢性鼻咽炎组织中IGFBP-rP1蛋白的表达情况.将针对IGFBP-rP1基因的特异性siRNA(即IGFBP-rP1 siRNA)及其阴性对照siRNA分别转染鼻咽癌CNE1和CNE-2Z细胞,然后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法鉴定IGFBP-rP1基因的沉默效果,并采用蛋白印迹法检测各组细胞中总的细胞外调节激酶(extracellular regulated kinase,ERK)和磷酸化ERK (phosphorylated ERK,p-ERK)的表达.采用CCK-8法、细胞划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测干扰IGFBP-rP1基因表达对鼻咽癌CNE1和CNE-2Z细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.结果:鼻咽癌组织中IGFBP-rP1蛋白的表达水平明显高于慢性鼻咽炎组织(P＜0.05).IGFBP-rP1 siRNA转染后,鼻咽癌CNE1和CNE-2Z细胞中IGFBP-rP1基因的表达均被明显抑制(P值均＜0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(P值均＜ 0.05);同时2种细胞中p-ERK表达水平明显下调(P值均＜ 0.01),而总ERK的表达水平不变(P值均＞0.05).结论:下调IGFBP-rP1基因表达可能通过调控ERK通路,抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭.提示IGFBP-rP1有望成为鼻咽癌基因治疗的一个新靶点.
关键词： 鼻咽肿瘤 胰岛素样生长因子结合蛋白质类 RNA干扰 细胞生物学 细胞外调节激酶 -
从环磷酸腺苷通路研究氯胺酮对学习记忆的影响
背景 大量的研究表明,环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)直接或间接激活相关基因转录,在学习记忆等方面发挥重要作用.另外,研究证实受环磷酸腺苷(cyclic AMP,cAMP)调节的下游蛋白CREB参与了氯胺酮导致未成年大鼠学习记忆障碍的形成. 目的 研究氯胺酮与cAMP通路及相关调控蛋白细胞外调节激酶(extracellular signal regulating kinase,ERK)对学习记忆的影响. 内容 cAMP激活蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)磷酸化并激活CREB,后者是一种重要的核蛋白,其调节启动子中具有环磷酸腺苷反应单元(cAMP response element,CRE)的基因转录,这种核转录因子具有调节包括学习记忆在内的广泛的生物学功能.趋向 希望从cAMP通路和ERK通路中,摸索一条治疗氯胺酮导致的学习记忆障碍的新途径.
关键词： 氯胺酮 环磷酸腺苷 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 细胞外调节激酶 学习记忆 -
细胞外调节激酶的表达及活化在不同年龄自发性高血压大鼠心肌肥厚中的作用
目的:研究不同年龄的自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)心室肌组织中细胞外调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERKs)的表达及活化与心肌肥厚的关系.方法:选择Wistar Kyoto(WKY)大鼠作对照,SHR和WKY大鼠按年龄分为5周、8周、14周和24周各4组,以左心室质量与体重的比值反映心肌肥厚的程度;采用Western blot方法测定大鼠左心室心肌组织中基础表达ERK (basal ERK,b-ERK)和磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)的水平.结果:①与相同周龄WKY大鼠比较,SHR自8周龄起血压明显升高(P<0.001),14周后心肌肥厚指数明显增加(P<0.01).②各年龄组SHR与相同周龄WKY大鼠b-ERK水平比较均无明显差异(P>0.05). ③5周龄SHR p-ERK水平与同龄WKY大鼠无差异,8到24周SHR大鼠p-ERK水平明显高于同龄WKY大鼠(P<0.01).④心肌肥厚指数与b-ERK量无明显相关性,与p-ERK量呈正相关. 结论:在SHR大鼠心肌肥厚形成中,心肌组织b-ERK没有增加,p-ERK水平增高,ERK活性增加参与高血压心肌肥厚过程.
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PDGF对哮喘大鼠气道平滑肌细胞中ERK通路的影响研究
目的：研究血小板源性生长因子（PDGF）对哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）中ERK信号通路的调控作用。方法建立哮喘大鼠模型，原代分离培养ASMC，设未干预组（A组）、ERK阻断剂组（B组）、PDGF组（C组）和PDGF+ERK阻断剂组（D组）。A组不加干预；B组又分为B1、B2、B3、B4组，分别加入浓度为0.1、1、5、10μmol/L的ERK阻断剂U0126；C组又分为C1、C2、C3、C4组，分别加入浓度为1、10、25、50μg/L的PDGF同二聚体PDGF- BB；D组加入10μmol/L的U0126和50μg/L的PDGF- BB。以RT- PCR法检测各组ERK1和TGF-β1的mRNA表达，免疫组化法检测A、B4、C4和D组中以上蛋白的表达。结果 RT- PCR提示B1、B2、B3、B4组ERK1 mRNA表达均显著低于A组（均P＜0.01），U0126以浓度依赖的方式抑制PDGF诱导的ASMC中ERK的活化，C1、C2、C3、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（均P＜0.01），ERK1 mRNA的表达与PDGF- BB存在明显的浓度依赖关系，D组与A组比较无统计学差异（P＞0.05）。免疫组化提示B4组ASMC中ERK1蛋白表达显著低于A组，C4组显著高于A组（均P＜0.01），D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）；B4组TGF-β1蛋白表达显著低于A组，C4组显著高于A组，同时C4组显著高于B4组（均P＜0.01），D组与A组相比无统计学差异（P＞0.05）。结论 PDGF可剂量依赖性激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路，同时伴随TGF-β1信号通路的活化。ERK通路参与了ASMC增殖的细胞内信号转导过程，PDGF可能经ERK环节促进TGF-β1通路活化。
关键词： 哮喘 气道平滑肌细胞 细胞外调节激酶 气道重塑 转化生长因子- β1 -
不同微波辐射功率和时间对原代培养小鼠成纤维细胞细胞外调节激酶-1/2活化的影响
目的 探讨不同功率2450MHz微波辐射不同时间对原代培养的小鼠成纤维细胞细胞外调节激酶-1/2(ERK-1/2)活化的影响.方法 分离纯化培养小鼠成纤维细胞,经细胞形态学观察及鉴定后,采用2450 MHz微波直接辐射小鼠成纤维细胞,输出功率分别为0.3 W/cm2、0.5 W/cm2、1 W/cm2,每组功率辐射时间分别为15 min和30 min.采用Western-blot方法分析微波辐射后成纤维细胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路激活状态.结果 输出功率0.3 W/cm2、0.5 W/cm2和1 W/cm2辐射15 min时ERK-1/2磷酸化程度明显增强;随着辐射时间延长.ERK-1/2磷酸化程度有下降趋势.结论 体外不同功率微波短时间辐射能激活小鼠成纤维细胞的MAPK信号传导通路,长时间辐射能抑制MAPK信号传导通路,提示不同的微波辐射功率及时间对小鼠成纤维细胞信号传导有着不同的影响.
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重组人类肝细胞生长因子对胶质瘤细胞增殖及VEGF表达的影响
目的 探讨重组人类肝细胞生长因子(rhHGF) 对胶质瘤细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 用5、10、20、30 μg/L不同浓度的rhHGF作用于体外培养的U251胶质瘤细胞并设立空白对照组,甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖;免疫组化及Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)和VEGF表达.结果 与对照组相比,rhHGF明显促进U251细胞的增殖和生长,其作用呈时间效应关系和一定浓度范围内的剂量效应关系(P＜0.05).Western blot及免疫组化检测显示,20 μg/L rhHGF作用后U251细胞PCNA和VEGF表达上升,呈时间依赖性(P＜0.05);细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂PD98059呈剂量依赖性抑制rhHGF诱导的PCNA和VEGF表达增加.结论 rhHGF 可能通过ERK信号途径促进胶质瘤细胞增殖和VEGF表达,从而影响胶质瘤的生长和血管发生.
