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丝裂原激活蛋白激酶信号转导系统对维甲酸诱导NIM细胞分化的影响
本研究观察丝裂原活化蛋白激酶对全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化的影响并探讨其机制.采用MTT 法测定细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期,NBT还原实验检测粒系分化,底物磷酸化法测定细胞外调节激酶(ERK)活性.结果显示:0.01-0.1 μmol/L 的ATRA呈时间和剂量依赖方式抑制NB4细胞增殖,并诱导NB4细胞向粒系分化;在这过程中ATRA激活ERK活性,ERK抑制剂PD98059能部分阻断ATRA的作用.p38MAPK的特异抑制剂SB203580与ATRA联合应用部分阻断了ATRA对细胞的生长抑制和诱导分化作用.结论:ATRA在诱导NB4细胞分化过程中激活ERK和P38MAPK途径,并且对该途径有依赖作用.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶类 细胞外调节激酶 白血病 NB4细胞 全反式维甲酸 -
依达拉奉对急性缺血性脑卒中患者丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路蛋白表达的影响
目的 研究依达拉奉治疗老年急性缺血性卒中患者认知功能障碍的效果及对丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(M APK/ERK )信号通路蛋白表达的影响. 方法 回顾性分析,对河南新乡医学院第一附属医院2011年1月至2015年12月诊治的老年急性缺血性卒中100例患者进行研究,以本院同期健康体检者100例为对照组,分析依达拉奉对患者认知功能障碍的改善作用及治疗前后患者血清中M APK/ERK信号通路相关蛋白表达水平变化. 结果 老年急性缺血性卒中患者认知功能障碍,且记忆力评分、定向力评分、注意力和计算能力评分、语言能力评分及回忆能力评分均降低(均 P＜0.01) ,经依达拉奉治疗后患者认知功能障碍评分得到增加(均 P＜0.01) ;血清中大鼠肉瘤蛋白(Ras)、迅速加速纤维肉瘤(Raf)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、结缔组织生长因子(CTGF)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和MAPK/ERK激酶(MEK)、白细胞介素1(IL1)、肿瘤坏死因子-α(TNFα)、血管内皮生长因子(VEGF)、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)及神经生长因子及其受体表达减弱,而瘦素及其受体蛋白表达增强(均 P＜0.01) ,且经依达拉奉治疗后上述因子异常得到恢复(均 P＜0.01). 结论 依达拉奉对老年急性缺血性卒中患者认知功能障碍有较好的改善效果,且能改善患者体内M APK/ERK信号通路蛋白的异常表达水平.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶类 蛋白激酶类 依达拉奉 卒中 认知障碍 -
曲古抑菌素A通过P38丝裂原激活蛋白激酶信号通路调节胃癌细胞水通道蛋白1的表达
目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)通过P38丝裂原激活蛋白激酶信号通路调节胃癌细胞水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)的表达.方法 用不同浓度的TSA处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖情况,光镜和透射电镜下观察形态学改变,免疫组化及Western blot方法检测P38、磷酸化P38(p-P38)及AQP1的表达.实验分4组:对照组、TSA组、TSA+ SB203580(P38MAPK通路抑制剂)组、SB203580组.结果 (1)胃癌SGC-7901细胞的胞质及胞膜中均有棕褐色AQP1的阳性染色.不同药物作用后,各组AQP1表达定位未见变化.(2) TSA能够抑制细胞增殖,随着药物浓度的增加和作用时间的延长抑制率逐渐增加.(3)不同浓度TSA作用5h后,各组胃癌细胞中总P38表达相比差异均无统计学意义(均P ＞0.05),p-P38和AQP1表达水平比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).TSA作用的适宜浓度为100 nmol/L.(4)不同浓度SB203580作用5h后,胃癌细胞中总P38表达比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);p-P38和AQP1表达水平比较差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).SB203580作用的适宜浓度为10 μmol/L.(5)用SB203580预处理胃癌细胞株2h后加入TSA 100 nmol/L作用组与不经过SB203580预处理而直接加用TSA作用各组的p-P38和AQP1相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TSA通过P38丝裂原激活蛋白激酶信号通路对胃癌细胞AQP1的表达起调控作用.
关键词： 胃肿瘤 水通道蛋白质1 丝裂原活化蛋白激酶类 -
作用于MAPK信号转导系统的抗肿瘤药物研究
丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内重要的信号转导系统,可以调节细胞的生长、增殖、分化、凋亡、黏附、迁移等一系列过程,继而影响肿瘤的发生、侵袭、转移以及耐药,是可能的抗肿瘤药物靶点之一.近年来,已有大量以MAPK信号转导通路为靶寻找抗肿瘤药物的研究报道,涉及该系统的多个分子,如表皮生长因子受体、Ras、Raf、蛋白激酶C、谷胱甘肽转移酶等.
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CD44单克隆抗体诱导THP-1细胞分化和凋亡作用及其机制探讨
目的 观察CD44单克隆抗体A3D8对急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞的增殖抑制作用,并探讨其作用途径.方法 采用MTT法检测A3D8对THP-1细胞的增殖抑制效应;流式细胞术分析THP-1细胞CD33、CD15、CD11b、CD14、Annexin-V、caspase-3、细胞周期;Western blot法分析p-Akt、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(P-ERK)、bcl-2和p27kip1蛋白的表达.结果 A3D8能显著抑制THP-1 细胞增殖,呈剂量和时间的量效关系.2.0 μg/ml A3D8作用THP-1细胞1～6 d后细胞明显分化.A3D8处理4 d,THP-1细胞CD33、CD15、CD11b、CD14表达水平与对照组比较[平均荧光强度(MFI)]分别为68.9±2.0对39.3±1.5、61.7±5.5对12.9±2.6、67.3±3.8对14.0±2.0、83.0±5.7对8.0±1.0(P均<0.01).细胞周期阻滞在G0/G1期.处理4 d实验组和对照组p-Akt、p-ERK、bcl-2蛋白分别为0.24±0.06对1.20±0.15、0.32±0,05对1.24±0.09、0.11±0.05对0.65 ±0.07,实验组较对照组显著减少(P均<0.01);处理4 d实验组和对照组p27kipl.蛋白分别为1.08±0.09对0.10±0.02,实验组较对照组显著增加(P<0.05).A3D8处理5 d THP-1细胞Annexin-V、caspase-3阳性率与对照组比较,分别为(32.5±2.5)%对(2.4±0.3)%、(33.3±2.5)%对(3.6±0.3)%(P均<0.01).结论 CD44单克隆抗体A3D8可能通过抑制PI3K/Akt和ERK1/2信号通路诱导THP-1细胞分化和凋亡.
关键词： THP-1细胞 A3D8 抗体 丝裂原活化蛋白激酶类 -
低浓度葫芦素-I诱导胃癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡及其机制研究
背景:葫芦素-I通过抑制STAT3信号通路在多种恶性肿瘤中发挥强大的抗癌作用,但其在胃癌中是否同样具有抗癌作用及其作用机制,目前仍不清楚.目的:通过体外实验评估低浓度葫芦素-I对人胃癌细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响并初步探讨其可能作用机制.方法:以低浓度葫芦素-I处理人胃腺癌细胞株AGS和HGC-27,采用CCK-8试验和集落形成试验评估其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期转换相关蛋白表达以及caspase-3/PARP细胞凋亡途径、STAT3、GADD45α和JNK/p38 MAPK信号通路激活情况.结果:低浓度葫芦素-I可在不抑制STAT3信号通路的情况下发挥强大的胃癌细胞生长抑制作用,此作用是通过诱导细胞周期G2/M期阻滞和细胞凋亡实现的.机制研究发现葫芦素-I可通过上调GADD45α和激活JNK/p38 MAPK信号通路诱导细胞凋亡,发挥抗胃癌作用.结论:本研究揭示了葫芦素-I抗胃癌作用的新机制,证明葫芦素-I是一个具有临床应用前景的化疗药物.
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重症急性胰腺炎大鼠丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路的动态变化
目的阐明重症急性胰腺炎时大鼠胰腺及肺脏组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的变化规律.方法以胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立大鼠重症急性胰腺炎(SAP)模型,将SD大鼠56只随机分为对照组(即造模前)、造模后0.5、1、3、6、12和24 h共7组,采用Western blot法检测胰腺及肺脏组织p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)活性变化.结果对照组能检测到p38MAPK的基础活性,而检测不到JNK活性.造模后,胰腺组织的p38MAPK活性明显增高,至3 h达到高峰,而肺脏组织的p38MAPK活性在6 h达到高峰,两者在24 h点处的p38MAPK活性仍高于基础值,而JNK的活性仅在12 h点处有增高,24 h点已检测不到JNK活性.结论MAPK信号转导通路,特别是p38MAPK是重症急性胰腺炎发病过程中的重要信号转导通路.
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶类 氨基末端激酶 重症急性胰腺炎 -
靶向MAPK信号通路的晚期黑素瘤治疗现状及展望
黑素瘤是一种高度恶性的皮肤肿瘤.既往针对黑素瘤, 主要是以化疗为主的综合治疗, 而单纯化疗的疗效有限, 持续缓解时间较短.在精准医疗时代, 随着对黑素瘤分子层面的不断认识, 一些导致黑素瘤发生的基因和信号通路逐渐被阐明.其中, 在晚期黑素瘤中, 针对丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen-activated protein kinase, MAPK) 信号通路和免疫检查点抑制剂的研究受到了广泛关注.临床研究证实, B型迅速加速性纤维肉瘤 (B-type rapidly accelerated brosarcoma, BRAF) 基因、成神经细胞瘤大鼠肉瘤 (neuroblastoma rat sarcoma, NRAS) 基因、MAPK细胞外信号调控激酶 (MAPK-extracellular signal-regulated kinase, MEK) 和细胞外调节蛋白激酶 (extracellular regulated protein kinases, ERK), 以及细胞毒T淋巴细胞相关抗原4 (cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4) 和程序性死亡受体1 (programmed cell death-1, PD-1) /程序性死亡配体1 (programmed cell death ligand-1, PDL-1) 的抑制剂治疗效果显著, 虽然终会出现耐药, 但是他们联合治疗可明显延长患者的生存时间, 这为治疗晚期黑素瘤带来了新的希望.
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香芹酚通过MAPK信号通路抗前列腺癌作用机制研究
目的 观察香芹酚对前列腺癌细胞增殖、凋亡以及侵袭的影响,并从丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路探讨其可能的作用机制.方法 采用80 μmol/L浓度的香芹酚干预前列腺癌DU145细胞(香芹酚组)24 h或者48 h,同时设置不加香芹酚的阴性对照组.CCK 8法检测细胞在第0、1、2、3、4、5天的生长情况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;RT-PCR以及蛋白质印迹分析检测基质金属蛋白酶9(MMP 9)及其抑制剂TIMP-1的表达;蛋白质印迹分析检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、半胱天冬氨酸蛋白酶9 (caspase 9)的表达以及细胞外信号调节激酶(ERK)、p38信号通路的激活情况.结果 与阴性对照组比较,香芹酚作用后前列腺癌细胞DU145活性明显受到抑制,作用的第3天起细胞增殖能力降低(P＜0.05,P＜0.01).香芹酚作用后,细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞侵袭能力降低(P＜0.01),细胞TIMP-1、caspase-9表达升高,PARP发生裂解,p38信号被激活,同时MMP 2表达降低,ERK信号通路受到抑制.结论 香芹酚能够抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭,诱导其凋亡,其作用与MAPK信号通路有关.
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MAPK信号通路参与17β-雌二醇对维生素D受体表达的调控
目的 探讨17β-雌二醇对成骨细胞中维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)表达的调节,以及丝裂原激活的蛋白激酶(motigen-activated protein kinase,MAPK)信号通路是否参与该过程.方法 小鼠前成骨细胞MC3T3-E1亚克隆14用添加10％小牛血清的无酚红α-MEM培养液培养,在干预细胞时,换为不含血清的无酚红α-MEM培养液.用实时荧光定量RT-PCR法和蛋白质印迹法检测17β-雌二醇干预前后细胞中VDR基因和蛋白的表达,用蛋白质印迹法检测17β-雌二醇干预前后细胞中MAPK信号通路的激活.然后用MAPK信号通路阻断剂U0126和17β-雌二醇同时处理细胞,观察VDR表达的变化.结果 17β-雌二醇作用72 h可以上调MC3T3-E1细胞中VDR基因和蛋白的表达;17β-雌二醇可在15 min内激活ERK信号通路,并持续到60 min,但是不能激活JNK和p38信号通路；应用U0126后,17β-雌二醇对成骨细胞中VDR表达水平的上调作用可被部分抑制.结论 17β-雌二醇可上调成骨细胞中VDR的表达,并能快速激活成骨细胞中MAPK信号通路;MAPK信号通路参与了雌激素上调VDR表达的过程.
关键词： 雌二醇 维生素D受体 成骨细胞 丝裂原活化蛋白激酶类 -
丝裂原活化蛋白激酶类和蛋白激酶C在转化生长因子β1诱导肾小管细胞结缔组织生长因子表达中的作用
目的 了解转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管细胞结缔组织生长因子(CTGF)表达的机制,特别是蛋白激酶C(PKC)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在CTGF基因表达中的作用及其对Smad磷酸化的影响.方法 分别应用PKC抑制剂Go6850以及MAPK的3个组成成分ERK、JNK和p38 MAPK的抑制剂PD98059、U0126、SP600125和SB203580阻断相应通路,观察其对TGF-β1诱导的CTGF表达以及Smad2/Smad3磷酸化的影响.结果 TGF-β1(5 μg/L)以时间依赖方式诱导HK-2细胞中Smad2/Smad3的磷酸化,从基础值0.87±0.09上升至2 h时高峰2.35±0.11.PKC抑制剂Go6850(5 μmol/L)和ERK抑制剂PD98059(10 μmol/L)、U0126(10 μmol/L)可部分抑制TGF-β1诱导的CTGF表达,而p38 MAPK抑制剂SB203580(20 μmol/L)和JNK抑制剂SP600125(10 μmol/L)对TGF-β1诱导的CTGF的表达无影响.PKC抑制剂Go6850(5 μmol/L)可减少TGF-β1诱导的Smad2/Smad3磷酸化,而ERK抑制剂PD98059(10 μmol/L)和U0126(10 μmol/L)对Smad2/Smad3的磷酸化没有影响.结论 在肾小管上皮细胞中,TGF-β1诱导CTGF的表达需要PKC和Ras/MEK/ERK的参与.PKC以Smad依赖的方式参与肾小管上皮细胞中TGF-β1诱导的CTGF的表达,而Ras/MEK/ERK对CTGF表达的调节不依赖于Smads.
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两种不同病理类型肾病患者尿蛋白诱导肾小管上皮细胞上调表达趋化因子及其分子信号机制研究
目的 观察不同病理类型肾病患者尿蛋白对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)分泌趋化因子的影响并探讨其分子信号机制.方法 所有患者均经临床和肾穿刺活检确诊为原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)或微小病变性肾病(MCD).以超滤法浓缩提取患者尿中总蛋白,分别刺激体外培养的HK-2细胞.RT-PCR检测调节正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的mRNA水平.免疫荧光、ELISA及流式细胞仪检测蛋白水平的表达.Western印迹法检测p38 MAPK和胞外信号调节激酶(ERK)水平.特异性抑制剂SB203580抑制p38磷酸化;PD98059则用于抑制ERK磷酸化.结果 两种尿蛋白成分有差异,FSGS患者尿蛋白中含有更多的大分子量蛋白.两种尿蛋白均刺激HK-2细胞RANTES及MIF表达上调,而FSGS患者尿蛋白刺激作用更强.两种尿蛋白均显著激活HK-2细胞内ERK和p38 MAPK信号通路.特异性抑制剂分别抑制ERK或p38 MAPK的活化后,FSGS患者尿蛋白介导的RANTES和MIF的上调表达作用可被SB203580或PD98059抑制,而MCD患者尿蛋白的刺激作用却仅能被SB203580所阻断.结论 FSGS肾病患者的尿蛋白比MCD患者的尿蛋白有更强的上调HK-2细胞RANTES及MIF表达的作用.两种尿蛋白介导趋化因子上调表达的分子信号机制存在差异.
关键词： 趋化因子类 蛋白尿 丝裂原活化蛋白激酶类 肾小管 上皮细胞 -
丹参酚酸B盐对转化生长因子β1活化的大鼠肝星状细胞内p38丝裂原活化蛋白激酶通路及其转录因子的影响
目的 探讨丹参酚酸B盐(SA-B)对转化生长因子β1(TGFβ1)活化的大鼠肝星状细胞(HSC)内p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的影响. 方法 分离并培养正常大鼠HSC,将TGFβ1和SA-B直接添加于原代HSC的无血清培养液中,用p38信号通路特异性阻断剂SB203580和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性阻断剂PD98059分别阻断HSC内p38MAPK和ERK信号通路.细胞内总的P38蛋白、MKK3/6蛋白及MEF2A、MEF2C的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组和TGFβ1组;磷酸化P38蛋白、MKK3/6蛋白和α-SMA蛋白的测定分为空白对照组、SA-B组、SA-B+ TGF β1组、TGFβ1组、PD98059、PD98059+ SA-B组、PD98059+ TGFβ1组和SA-B+ PD98059+ TGFβ1组；SA-B对TGFβ1刺激的HSC内MEF2和Ⅰ型胶原报道基因的影响分为突变型(mt)对照组、野生型(wt)对照组、TGFβ1组、SA-B+ TGF β1组、SA-B组、SB203580+ TGF β1组、SB203580组.Western blot法检测HSC内磷酸化和总P38蛋白、MAPK激酶3/6 (MKK3/6)蛋白、肌细胞增强因子2(MEF2)A、MEF2C、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达；荧光素酶报道基因测定法检测MEF2报道基因和Ⅰ型胶原启动子的活性.多组间数据的多重比较用q检验.结果 SA-B组磷酸化P38蛋白相对表达量为0.33±0.05,明显低于空白对照组(q=7.08,P＜0.01); SA-B +TGF β1组的磷酸化P38蛋白相对表达量为0.46±0.04,明显低于TGFβ1组(q=10.45,P＜0.01)；SA-B组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.11±0.07,明显低于空白对照组(q=3.944,P＜0.05)；SA-B+ TGF β1组磷酸化MKK3/6蛋白相对表达量为0.28±0.07,明显低于TGFβ1组(q=7.91,P＜0.01)；SA-B+ TGFβ1组和SB203580+ TGF β1组MEF2报道基因的相对荧光素酶活性分别为2.93±0.09和2.50±0.05,均明显低于TGFβ1组(q值分别为35.35和37.2,P值均＜0.01)；SA-B组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为15.82±0.97和13.00±0.40,均明显低于空白对照组(q值分别为5.18和13.32,P值均＜0.01)；SA-B+ TGF β1组MEF2C及MEF2A的相对表达量分别为13.40±0.72和20.47±0.83,均明显低于TGF β1组(q值分别为43.93和12.52,P值均＜0.01); SA-B+ TGFβ1组α-SMA相对表达量为8.76±0.44,明显低于TGFβ1组(q=20.35,P＜0.01); SA-B+ SB203580+TGF β1组α-SMA相对表达量仅为3.57±0.49,明显低于TGFβ1组(q=39.78,P＜0.01)；SA-B+ TGF β1组和SB203580+ TGF β1组Ⅰ型胶原报道基因的相对荧光素酶活性分别为1.61±0.05和1.42±0.07,较TGFβ1组明显降低(q值分别为26.4和27.62,P值均＜0.01).结论 SA-B可能通过抑制原代HSC内TGFβ 1的p38MAPK信号传导通路,抑制HSC的活化.
关键词： 转化生长因子β1 丝裂原活化蛋白激酶类 信号传导 丹参酚 肝星状细胞 -
ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达
目的 检测ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达情况,初步探讨它们与黑素瘤发生、发展的关系.方法 分别采用免疫组化和Western印迹法检测磷酸化的ERK1/2,JNK及P38MAPK在皮肤黑素瘤、皮内痣组织中的表达情况;用实时荧光定量聚合酶链反应(Real time-PCR)方法定量分析皮内痣和皮肤黑素瘤中ERK1/2,JNK和P38MAPK mRNA的表达情况.结果 免疫组化和Western印迹法结果均显示p-ERK1/2,p-JNK及p-P38MAPK在皮肤黑素瘤中的表达高于皮内痣组(P＜0.05);Western印迹法显示p-ERK1/2,p-JNK及p-P38MAPK在皮内痣组中的表达高于正常对照组(P＜0.05).ERK1/2,JNK及P38MAPK mRNA在皮肤黑素瘤和皮内痣中的表达均高于正常皮肤组织(P＜0.05);皮肤黑素瘤中ERK1/2,P38MAPKmRNA的表达均高于皮内痣(P＜0.05);而皮肤黑素瘤中JNK mRNA的表达与皮内痣组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ERK1/2,JNK和P38MAPK在皮肤黑素瘤表达增高,提示MAPK信号通路在皮肤黑素瘤发生、发展中起到重要作用,该信号通路有望成为预防和治疗皮肤黑素瘤的新靶点.
