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影响髓核细胞表达水通道蛋白1相关因素的实验研究
目的 通过观察不同细胞外环境下,体外培养的兔髓核细胞调节水通道蛋白1(AQP-1)表达的变化,探讨AQP-1 可能对髓核细胞在适应外环境变化时发挥的作用.方法 体外原代培养成年兔腰椎髓核细胞成功后,在不同渗透压和氧分压条件下继续培养细胞,观察细胞的活性,并通过免疫组化和实时定量PCR 观察关键蛋白aggrecan,2 型胶原和AQP-1 的表达变化.结果 体外培养髓核细胞4 ～5 周后可以传代,传代细胞繁殖增快,在不同的培养条件下,细胞活性无明显差异,在基因水平关键蛋白aggrecan 和2 型胶原表达均下降.在低渗透压条件下,细胞显著下调AQP-1 表达,在低氧分压条件下,细胞显著上调AQP-1 表达,在低氧分压和低渗透压条件下,AQP-1 表达呈上升趋势.结论 不同外环境对髓核细胞的影响不同,髓核细胞对AQP-1 的表达有差异,提示AQP-1 可能易化髓核细胞适应外环境变化.
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高脂高糖饮食对自发性高血压大鼠水通道蛋白1mRNA表达及对尿钠排泄的影响
目的 探讨高脂高糖饮食对自发性高血压大鼠(SHR)水通道蛋白1(AQP-1)mRNA与NO表达的影响,及其在加重尿钠排泄中的作用.方法 6周龄雄性SHR 24只随机分为高脂高糖组12只和普通饲料组12只,第8、12周末观察高脂高糖饮食对其NO、尿钠排泄等的影响,并计算肾质量指数.12周末RT-PCR检测肾脏AQP-1mRNA表达.结果 与普通饲料组比较,高脂高糖组第8、1 2周末血压、血浆NO、肾脏尿钠排泄量明显降低(P＜0.05),1 2周末肾组织AQP l mRNA表达明显降低[(0.54±0.07) vs (1.28±0.39),P＜0.01],第12周末肾质量指数明显升高[(3.40±2.00)mg/g vs (2.30±1.00)mg/g,P＜0.05].结论 长期高脂高糖饮食可加重SHR肾脏损害,其机制可能与内源性NO合成降低、肾脏AQP-1 mRNA表达降低相关.
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水通道蛋白1在急性坏死性胰腺炎大鼠肠壁血管内皮屏障功能障碍中的作用
目的 探讨水通道蛋白1( aquaporin 1,AQP1)对急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)大鼠肠道毛细血管内皮屏障功能障碍的影响.方法 160只雄性Sprague-Dawley 大鼠随机分为对照组、ANP组、生理盐水组、地塞米松组及乙酰唑胺组,制模后3、6、12、18h各时间点分别处死8只.记录腹水量,测定血清淀粉酶；HE染色观察肠壁组织病理改变；电镜观察肠壁组织超微结构；伊文思兰染料血管外渗法检测肠壁组织毛细血管通透性；荧光定量PCR检测肠壁组织AQP1 mRNA的表达；Western blot法检测肠壁组织AQP1蛋白表达.结果 (1)ANP组血清淀粉酶水平显著高于对照组,地塞米松组低于ANP组,乙酰唑胺组高于ANP组(P＜0.05)；(2)ANP组肠壁组织伊文思兰含量明显高于对照组,地塞米松组低于ANP组,乙酰唑胺组高于ANP组(P＜0.05)；(3)ANP组肠壁组织AQP1 mRNA表达显著低于对照组,地塞米松组表达显著高于ANP组,乙酰唑胺组显著低于ANP组(P＜0.05)；(4)ANP组肠壁组织AQP1蛋白含量明显低于对照组,地塞米松组高于ANP组,乙酰唑胺组低于ANP组(P＜0.05).结论 AQP1在ANP大鼠肠壁组织毛细血管渗漏的发生中起重要作用,调控AQP1的表达对保护血管内皮屏障功能有重要意义.
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曲古抑菌素A通过P38丝裂原激活蛋白激酶信号通路调节胃癌细胞水通道蛋白1的表达
目的 探讨曲古抑菌素A(TSA)通过P38丝裂原激活蛋白激酶信号通路调节胃癌细胞水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)的表达.方法 用不同浓度的TSA处理胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖情况,光镜和透射电镜下观察形态学改变,免疫组化及Western blot方法检测P38、磷酸化P38(p-P38)及AQP1的表达.实验分4组:对照组、TSA组、TSA+ SB203580(P38MAPK通路抑制剂)组、SB203580组.结果 (1)胃癌SGC-7901细胞的胞质及胞膜中均有棕褐色AQP1的阳性染色.不同药物作用后,各组AQP1表达定位未见变化.(2) TSA能够抑制细胞增殖,随着药物浓度的增加和作用时间的延长抑制率逐渐增加.(3)不同浓度TSA作用5h后,各组胃癌细胞中总P38表达相比差异均无统计学意义(均P ＞0.05),p-P38和AQP1表达水平比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).TSA作用的适宜浓度为100 nmol/L.(4)不同浓度SB203580作用5h后,胃癌细胞中总P38表达比较差异均无统计学意义(均P＞0.05);p-P38和AQP1表达水平比较差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).SB203580作用的适宜浓度为10 μmol/L.(5)用SB203580预处理胃癌细胞株2h后加入TSA 100 nmol/L作用组与不经过SB203580预处理而直接加用TSA作用各组的p-P38和AQP1相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TSA通过P38丝裂原激活蛋白激酶信号通路对胃癌细胞AQP1的表达起调控作用.
关键词： 胃肿瘤 水通道蛋白质1 丝裂原活化蛋白激酶类 -
水通道蛋白1和水通道蛋白3在羊水过少孕妇胎盘和胎膜的表达及其意义
目的 研究水通道蛋白1(AQP1)和AQP3在羊水过少孕妇胎盘、胎膜中的表达及分布,探讨其在羊水平衡途径中的作用. 方法 选取30例孤立性羊水过少的足月孕妇为研究组,同期分娩的30例正常羊水量的足月孕妇为对照组.分别采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学SP法,检测两组胎盘、胎膜组织中AQP1和AQP3 mRNA和蛋白的表达及分布. 结果 AQP1mRNA在研究组羊膜组织中的表达为对照组的0.31,AQP1蛋白在研究组羊膜组织中的表达为0.14±0.02,较对照组的0.25±0.03明显下调(P<0.05).而在胎盘、绒毛膜中的分布及表达强度两组间差异无统计学意义(P>0.05).AQP3 mRNA在研究组羊膜和绒毛膜中的表达分别为对照组的0.31和0.37,而胎盘中的表达为对照组的7.36.AQP3蛋白在研究组羊膜和绒毛膜中的表达分别为0.18±0.05和0.18±0.04,均较对照组的0.26±0.03和0.29±0.06明显下调(P<0.05),而在胎盘组织中的表达研究组为0.47±0.09,较对照组0.28±0.01明显上调(P<0.05). 结论 AQP1和AQP3在羊水过少孕妇胎盘、胎膜组织中表达的改变为羊水减少后的代偿性反应.
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凝血酶和血红蛋白对大鼠水通道蛋白的影响及与脑积水的相关性研究
目的 探讨凝血酶和血红蛋白对水通道蛋白(AQP)的影响及AQP与脑积水的相关性.方法 取清洁级健康雄性SD大鼠84只,采用随机数字表法分为对照组、凝血酶组及血红蛋白组,分别通过枕大池注射等渗盐水(0.3 ml)、凝血酶[0.3 ml(10 U/ml)]及血红蛋白[0.3 ml(150 mg/ml)]制作脑积水模型,按照缺失补足的方式,保持各组大鼠24只.观察造模后1、3、7、14 d时的相对侧脑室面积、AQP1和AQP4的表达及AQP与相对侧脑室面积的相关性.结果 (1)相对于对照组,凝血酶组与血红蛋白组在1、3、7、14 d均显示脑积水,且在1 d时明显,分别为[(6.94±0.19)%和(6.58±0.15)%比(3.40±0.13)%、(6.06±0.12)%和(5.79±0.09)%比(3.55±0.15)%、(5.80±0.13)%和(5.58±0.08)%比(3.78±0.18)%、(5.66±0.14)%和(5.47±0.13)%比(3.52±0.18)%],差异均有统计学意义(P<0.01).(2)AQP1的增加主要在脑室脉络丛上皮细胞基底膜与顶膜,AQP4的增加主要在脑室室管膜细胞.1、3、7、14 d时AQP1与AQP4的相对表达量,对照组分别为1.09±0.07和1.30±0.15、0.91±0.06和1.18±0.12、1.33±0.17和1.16±0.08、1.22±0.11和1.00±0.10,凝血酶组分别为4.40±0.14和3.69±0.11、3.88±0.11和3.17±0.07、3.55±0.07和2.86±0.13、3.36±0.07和2.70±0.07,血红蛋白组分别为4.24±0.07和3.55±0.10、3.77±0.08和3.04±0.09、3.46±0.07和2.76±0.08、3.31±0.10和2.62±0.08;凝血酶组与血红蛋白组在各时点的AQP1与AQP4的相对表达量均明显高于对照组,组间差异均有统计学意义(均P<0.01);血红蛋白组各时点的AQP1与AQP4 mRNAs的相对表达量与凝血酶组的差异均无统计学意义(均P>0.05);在凝血酶组和血红蛋白组中,相对于1 d时,AQP1与AQP4的表达在3、7、14 d有明显下降(均P<0.01);相对于3 d时,AQP1在7、14 d均有明显下降(均P<0.05),AQP4在14 d时下降,差异均有统计学意义(均P<0.05).(3)凝血酶组各时点AQP1(r=0.983,P<0.01)及AQP4(r=0.987,P<0.01) 相对表达量与相对侧脑室面积呈正相关;血红蛋白组各时点AQP1(r=0.964,P<0.01)及AQP4(r=0.962,P<0.01)相对表达量与相对侧脑室面积呈正相关.结论 蛛网膜下腔注射凝血酶与血红蛋白后可引起脑室及其周围区域AQP1与AQP4的表达增加,凝血酶与血红蛋白可能是蛛网膜下腔出血后脑积水的重要介导因素.
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水通道蛋白5在过敏性鼻炎黏膜过度表达及其对腺体分泌的影响
目的 探讨水通道蛋白1(aquaporins 1,AQP1)和水通道蛋白5(AQP5)在过敏性鼻炎鼻黏膜的表达.方法采集15例鼻内镜手术患者的鼻黏膜组织,其中9例过敏性鼻炎和6例正常对照.小鼠的鼻黏膜组织来源于过敏性鼻炎模型小鼠(10例)和正常对照小鼠(10例),所有鼻黏膜组织一部分经石蜡固定后用于HE、PAS染色及免疫组化分析,一部分患者鼻黏膜组织提取RNA后用于RT-PCR半定量分析.结果 免疫组化染色显示AQP1主要表达在鼻黏膜的血管内皮细胞和结缔组织;AQP5主要表达在鼻黏膜的上皮细胞、基底细胞和腺细胞;且AQP5在过敏性鼻炎(患者42.7±13.2,小鼠14.1±5.3)鼻黏膜的浆液腺表达显著高于对照组(9.3±3.6,3.6±2.5,P<0.01).RT-PCR结果显示,与正常对照组(0.098±0.03)相比,AQP5的mRNA水平在过敏性鼻炎患者(0.236±0.08)的鼻黏膜表达增加,差异具有统计学意义(t=3.203,P<0.01);而AQP1的mRNA水平在过敏性鼻炎组(0.048±0.032)和正常对照组(0.051±0.024)未见显著差异(t=1.584,P>0.05).结论 AQP1和AQP 5表达在鼻黏膜不同位置;AQP5在过敏性鼻炎表达增加,与过敏性鼻炎鼻黏膜的浆液腺分泌密切相关.
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RNA干扰抑制AQP1表达对Hep-2细胞迁移能力影响的实验
目的 通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制Hep-2细胞中水通道蛋白-1(aquaporin-1,AQP1)的表达,探讨AQP1对喉癌细胞黏附、运动及侵袭能力的影响.方法 构建AQP1特异性的siRNA重组质粒,免疫组化检测RNAi印制AQP1表达的效果;分别用细胞基质黏附实验、Transwell小室和Matrigel基质侵袭实验检测细胞黏附、运动和侵袭能力.结果 AQP1siRNA重组质粒有效的抑制了Hep-2细胞中AQP1的表达.细胞基质黏附实验结果显示:Hep-2细胞与细胞外基质的黏附率,AQP1-siRNA实验组为(41.6+4.2)%与阴性对照组(43.6+3.9)%和空白对照组(45.2±4.0)%无明显差异(P均＞0.05):体外细胞运动和侵袭实验结果显示:Hep-2的穿膜细胞数,实验组分别为(36±3)和(23±4)个,高倍镜,显著低于空白对照组的(70±5)和(65±4)个/高倍镜以及阴性对照组的(72±4)和(69±4)个/高倍镜(尸均＜0.01),而后两组细胞问运动和侵袭能力方面差异均无显著性(P＞0.05).结论 AQP1 RNAi重组质粒能够阻断AQP1的表达,对Hep-2细胞的黏附力没有影响,但能够抑制喉癌细胞的运动和侵袭能力,与喉癌的转移机制密切相关.
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红细胞水通道蛋白1的研究进展
1988年Agre[1]在提纯红细胞RH蛋白时意外发现了一种能快速转运水的疏水性膜蛋白,称为CHIP28.三年后,Agre小组采用微管注射法,将CHIP28的mRNA注入蛙卵细胞,从而将该蛋白表达到了蛙卵细胞膜上.当在溶液中加入高渗介质后,表达了CHIP28的蛙卵细胞迅速膨胀至破裂,而没有表达CHIP28的细胞几乎没有变化,从而确定了CHIP28就是一直在寻找的水通道蛋白,后被命名为水通道蛋白1(aquaporin,AQP1).基于此项杰出贡献,Agre获得了2003年度诺贝尔化学奖.此后在研究中又陆续发现了水通道家族中的13种亚型(AQP0-AQP12).红细胞膜上有水通道蛋白1 (AQP1),水通道蛋白3(AQP3)和水通道蛋白9 (AQP9).其中,AQP1是位于红细胞膜上主要的一类水通道蛋白,不仅与红细胞水渗透性有关,还与小分子气体交换和运输以及血型特征有紧密的联系,对于红细胞的生理功能起着重要作用,也与某些疾病有着重要联系.
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视神经脊髓炎相关抗体
视神经脊髓炎是主要累及视神经和脊髓的自身免疫性中枢神经系统疾病,水通道蛋白4是主要靶抗原,其特异性抗体NMO-IgG阳性患者以女性多见,临床症状较重,同时出现双侧视神经炎或视神经炎和脊髓炎,受累脊髓节段较长.而在NMO-IgG阴性患者血清中可以检出抗水通道蛋白1(AQP1)抗体和抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)抗体,抗AQP1抗体阳性患者女性少见,长节段脊髓病变多见,视神经炎少见;抗MOG抗体阳性患者男性多见,视神经炎多见,尤其是双侧视神经同时受累,胸腰髓受累多见.
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水通道蛋白1在食管癌中的表达及其与肿瘤转移之间的关系
目的 研究水通道蛋白(aquaporin,AQP)1在食管癌组织中的表迭与分布,并探讨其与食管癌组织学分级和转移之间的关系. 方法 采用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶染色(SP)免疫组织化学方法,对82例食管癌组织及作为对照的正常食管组织中的AQP1表迭水平进行检测,并与肿瘤组织学分级和淋巴结转移情况进行统计学分析. 结果 AQP1主要表达于正常食管和癌组织的黏膜下层和黏膜层内的淋巴管上皮细胞以及肌层毛细血管上皮细胞,而肿瘤细胞中几乎没有表达.组织学分级Ⅲ级的鳞状细胞癌组织的新生血管及阃质中AQP1高表达率明显高于组织学分级Ⅰ级和Ⅱ级的患者(78.9% vs 53.7% vs 30.0%,P=0.032);淋巴结转移的食管癌组织中AQP1高表达率明显高于无淋巴结转移者(72.5% vs 40.0%,P=0.000). 结论 AQP1可能在食管癌肿瘤形成和发展的过程中发挥着重要的作用.AQP1与肿瘤血管生成之间关系的研究将为食管癌的治疗提供新的研究方向.
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水通道蛋白1调节机制及其表达在心肌缺血组织中的作用研究进展
水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是一组参与跨细胞膜转运水的膜通道蛋白家族,1991年,Agre在分离、纯化Rh血型相关蛋白时偶然发现人红细胞膜上存在相对分子质量约为28×103的细胞膜整合蛋白,将其克隆,此为第一个被克隆的水通道蛋白,因其相对分子质量约为28×103,当初命名为CHIP28,后经人类基因委员会命名其为水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)[1],目前已在哺乳类动物组织中鉴定出13种AQPs,其中AQP 1、AQP 3～11在人的心脏组织中表达,主要分布于无孔型血管内皮细胞[2-3]及心肌细胞[4],参与水的转运.近年研究提示,AQP1作为细胞膜特异性水转运蛋白,可能在心肌缺血再灌注损伤、体外循环、心肌功能障碍相关的心肌水肿和血管新生中发挥重要作用[2,5-7].
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原发性肾病综合征患者尿内水通道蛋白1、2水平的研究
肾病综合征引起水钠潴留的分子机制尚不完全清楚,研究表明,肾脏水通道蛋白表达及其调节机制的异常是肾病综合征时水钠潴留的重要作用之一.
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瑞芬太尼后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时水通道蛋白1表达的影响
目的 评价瑞芬太尼后处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤时水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠24只,体重250 ～ 300 g,采用随机数字表法将其分为3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼后处理组(RP组).采用结扎左冠状动脉前降支45 min再灌注24 h的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型.RP组于再灌注前10 min开始静脉输注瑞芬太尼10 μg·kg-·min-1,经10 min输注完毕,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于再灌注结束时处死大鼠,取左心室组织,光镜下观察心肌组织病理学结果,采用实时荧光定量PCR法测定缺血区心肌组织AQP-1mRNA表达,采用Western blot法测定缺血区心肌组织AQP-1蛋白表达,计算心肌含水率.结果 与S组比较,其余2组缺血区心肌组织含水率增加,I/R组心肌组织AQP-1 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),RP组心肌组织AQP-1 mRNA和蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,RP组心肌组织含水率减少,心肌组织AQP-1 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 瑞芬太尼后处理可能通过下调心肌组织AQP-1表达减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
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乌司他丁预先给药对体外循环大鼠急性肺损伤时AQP1和AQP5表达的影响
目的 评价乌司他丁预先给药对体外循环(CPB)大鼠急性肺损伤时水通道蛋白1(AQP1)和AQP5表达的影响.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠48只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法分为3组(n=16):假手术组(Sham组)、体外循环组(CPB组)和UTI组(UTI组),每组16只.UTI组大鼠于CPB前10 min静脉注射乌司他丁溶液20万U/kg;CPB组和UTI组建立CPB模型,Sham组和CPB组大鼠分别于动脉和静脉穿刺前10 min或CPB前10 min静脉注射等容量生理盐水.CPB结束1h时处死大鼠取肺,称重,计算湿重/干重(W/D)比值,光镜下观察肺组织形态结构并计算肺泡损伤率(IAR),电镜下观察肺组织超微结构.采用免疫组化法检测AQP1和AQP5的表达水平.采用Western blot法和RT-PCR法分别测定AQP1和AQP5及其mRNA的表达水平.结果 与Sham组比较,CPB组和UTI组肺组织W/D比值和IAR升高,AQP1和AQP5阳性细胞率降低,AQP1和AQP5及其mRNA表达下调(P＜0.05);与CPB组比较,UTI组肺组织W/D比值和IAR降低,AQP1和AQP5阳性细胞率升高,AQP1和AQP5及其mRNA表达上调(P＜0.05).UTI组形态学和超微结构损伤较CPB组减轻.结论 乌司他丁预先给药减轻CPB大鼠急性肺损伤的机制与其上调AQP1和AQP5的表达有关.
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肺水通道蛋白1表达在体外循环致犬肺损伤中的作用
目的 评价肺水通道蛋白1(AQP1)表达在体外循环致犬肺损伤中的作用.方法 健康杂种犬24只,体重15-20 kg,雌雄不拘,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):对照组(C组)、乙酰唑胺Ⅰ组(AⅠ组)、乙酰唑胺Ⅱ组(AⅡ组)和乙酰唑胺Ⅲ组(AⅢ组),开胸并制备犬CPB模型.C组采用传统预充液,AⅠ组、AⅡ组和AⅢ组分别在预充液中加入乙酰唑胺20、40、60 mg/kg.于开胸未行机械通气(T1)、停机(T2)和停机后1 h(T3)时取股动脉血,行动脉血气分析,计算呼吸指数 (RI)和氧合指数(OI),取肺组织采用RT-PCR及Westem-blot法检测AQP1 mRNA和蛋白表达,光镜下观察肺组织病理学结果并进行肺损伤评分.结果 与C组比较,AⅠ组、AⅡ组和A Ⅲ组T2,3时P(A-a)O2和RI升高,OI降低,AQP1蛋白表达下调,肺损伤评分升高,AⅡ组和AⅢ组T2,3时AQPl mRNA表达下调(P＜0.05)；与AⅠ组组比较,AⅡ组和AⅢ组T2,3时P(A-a)O2和RI升高,OI降低,AQP1蛋白表达下调,肺损伤评分升高,AⅢ组T2,3时AQP1 mRNA表达下调(P＜0.05)；与AⅡ组比较,AⅢ组T2,3时RI升高,AQP1蛋白表达下调,肺损伤评分升高(P＜0.05).结论 AQP41表达下调参与了体外循环致犬肺损伤的过程.
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右美托咪定对大鼠肺缺血再灌注时水通道蛋白1和水通道蛋白5表达的影响:离体实验
目的 评价右美托咪定对大鼠肺缺血再灌注时水通道蛋白1(AQPl)和水通道蛋白5(AQP5)表达的影响.方法 SPF级健康雄性SD大鼠,3～4月龄,体重250～ 320 g,制备离体肺灌注模型45个,采用随机数字表法分为3组(n=15):假手术组(S组)、肺缺血再灌注组(I/R组)和右美托咪定组(D组).S组持续灌流150 min;I/R组灌流15 min后,停止通气和灌流60 min,然后继续通气和灌流75 min,制备大鼠肺缺血再灌注损伤模型;D组用含10 nmol/L右美托咪定的K-H液灌流15min后,停止通气和灌流60 min,然后继续通气和灌流含10 nmol/L右美托咪定的K-H液75 min.分别于灌流10 min、恢复灌流15、45和75 min时,记录肺顺应性、气道阻力、灌注流量和肺动脉氧分压(PaO2).于恢复灌流75 min时取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,观察肺组织病理学和超微结构的改变.分别采用Western blot法和RT-PCR法测定肺组织AQP1和AQP5及其mRNA的表达水平.结果 与S组比较,I/R组和D组恢复灌流期间气道阻力升高,肺顺应性、灌注流量和PaO2均降低,肺组织W/D比值升高,I/R组肺组织AQP1和AQP5及其mRNA的表达下调,D组肺组织AQP1和AQP5及其mRNA的表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,D组恢复灌流期间气道阻力降低,肺顺应性、灌注流量和PaO2均升高,肺组织W/D比值降低,AQP1和AQP5及其mRNA的表达上调(P＜0.05),肺组织病理学损伤减轻.结论 右美托咪定减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的机制可能与上调AQP1和AQP5的表达有关.
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肺缺血预处理对体外循环诱发犬肺缺血再灌注时水通道蛋白1表达的影响
目的 探讨肺缺血预处理对体外循环(CPB)诱发犬肺缺血再灌注时水通道蛋白1(AQP1)表达的影响.方法 健康成年杂种犬12只,体重15 ～ 20 kg,雌雄不拘,采用随机数字表法分为2组(n=6):肺缺血再灌注组(I/R组)和缺血预处理组(IP组).非停跳CPB10 min时阻断左肺动脉,停止左肺机械通气,60 min后开放左肺动脉,恢复左肺机械通气,建立CPB诱发肺缺血再灌注损伤模型.IP组在阻断左肺动脉前进行缺血预处理:阻断5 min,开放5min,2个循环.于CPB前(T1)、阻断左肺动脉即刻(T2)、停CPB时(T3)、停CPB后2 h(T4)时取肺组织,测定肺组织湿干重(W/D)比值,观察病理学结果,进行肺损伤评分,采用Western blot法检测AQP1表达;于T1、T3、T4时点计算呼吸指数(RI)、氧合指数(OI)和肺泡-动脉血氧分压差P(A-a)O2;T4时点计算左肺肺泡液体清除率.结果 与I/R组比较,IP组T3、T4时P(A-a)O2和RI降低,OI升高,肺组织W/D比值和肺损伤评分降低,肺组织AQP1表达上调,左肺肺泡液体清除率升高(P＜0.05).IP组肺组织病理学损伤较I/R组减轻.结论 肺缺血预处理减轻CPB诱发犬肺缺血再灌注损伤的机制与上调肺组织AQP1表达有关.
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肺叶切除术患者单肺通气时肺组织水通道蛋白1和水通道蛋白4表达的变化
目的 评价肺叶切除术患者单肺通气时肺组织水通道蛋白1(AQP1)和水通道蛋白4(AQP4)表达的变化.方法 择期拟行肺叶切除术患者40例,ASA分级Ⅰ级或Ⅱ级,年龄30 ～ 64岁,体重45 ～ 79kg,采用随机数字表法,将其分为2组(n=20):双肺通气组(T组)和单肺通气组(O组).静脉注射咪达唑仑、芬太尼、维库溴铵和丙泊酚麻醉诱导,T组插入气管导管行双肺通气；O组插入双腔支气管导管行双肺通气,开胸后行单肺通气,维持PETCO25.3 ～ 24.0 kPa,SpO2＞92％.静脉输注瑞芬太尼、丙泊酚和维库溴铵维持麻醉.取病变旁正常肺组织,光镜下观察病理学结果,透射电镜下观察超微结构改变；测定肺组织湿干重比(W/D比)；采用RT-PCR法检测肺组织AQP1 mRNA和AQP4mRNA的表达,采用法检测肺组织AQP1蛋白和AQP4蛋白的表达.结果 与T组比较,O组肺组织W/D比升高,AQP1 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05),AQP4 mRNA及其蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),肺组织出现病理学损伤.结论 AQP1表达下调可能参与了单肺通气诱发的肺叶切除术患者急性肺损伤,而AQP4无此作用.
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不同液体容量复苏对内毒素血症大鼠肺毛细血管内皮细胞水通道蛋白1表达的影响
目的 评价不同液体容量复苏对内毒素血症大鼠肺毛细血管内皮细胞水通道蛋白1(AQP-1)表达的影响.方法 健康清洁级雄性SD大鼠50只,体重250～ 300 g,6～8周龄.采用随机数字表法,将其分为5组(n=10):对照组(C组)、内毒素血症组(LPS组)、氯化钠溶液容量复苏组(NS组)、6％羟乙基淀粉130/0.4溶液容量复苏组(HES组)和高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液容量复苏组(HSH组).经股静脉注入LPS 5 mg/kg制备内毒素血症模型.于造模10 min后,经股静脉注入各组所对应的液体,以15 ml/kg恒速输注6h.于造模后即刻、3、6h时采集股动脉血样,用ELISA法测定血清TNF-α浓度,并行血气分析,记录PaO2和乳酸(Lac)浓度,计算氧合指数.造模6h时处死取肺组织,用免疫组化法测定肺毛细血管内皮细胞AQP-1表达,测定肺湿干重(W/D)比值,HE染色观察肺组织病理学结果,行肺损伤评分.结果 与C组比较,LPS组、NS组、HES组和HSH组W/D比值、血清TNF-α、Lac浓度、肺损伤评分升高,AQP-1表达下调,PaO2和氧合指数降低(P＜0.05).与LPS组比较,NS组、HES组和HSH组W/D比值、血清TNF-α、Lac浓度、肺损伤评分降低,AQP-1表达上调,PaO2和氧合指数升高(P＜0.05).与NS组比较,HES组和HSH组W/D比值、血清TNF-α、Lac浓度、肺损伤评分降低,AQP-1表达上调,PaO2和氧合指数升高(P＜0.05).与HES组比较,HSH组血Lac浓度降低(P＜0.05),其余指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氯化钠溶液、6％羟乙基淀粉130/0.4溶液和高渗氯化钠羟乙基淀粉40溶液容量复苏可有效减轻内毒素血症大鼠急性肺损伤,且高渗氯化钠羟乙基淀粉40的效果更显著,其机制与上调肺毛细血管内皮细胞的AQP-1表达有关.
