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新生大鼠心肌成纤维细胞的内皮细胞分化潜能
目的 探讨心肌成纤维细胞(CFs)向内皮细胞分化以及成血管潜能.方法 新鲜左心室组织,体外分离、培养、纯化CFs,利用内皮细胞诱导液对第3代CFs诱导培养,连续诱导培养28 d后,换用内皮细胞培养基(ECM),并消化传代扩增至第3代.观察诱导细胞生长情况和形态变化,利用免疫细胞化学法、流式细胞术和血管形成分析实验对诱导后细胞的内皮细胞标志物的表达和功能特性进行评价.结果 新生大鼠第3代CFs,呈三角形、梭形和多边形,增殖速度迅速;波形蛋白(vimentin)、盘状结构受体2(DDR2)均呈阳性表达.诱导第3天细胞开始汇合,21 d部分细胞形成串珠样连接,28 d出现细胞汇集成环状样形状;免疫组织化学标记vWF和CD31呈阳性表达;细胞免疫荧光标记vWF、CD34、CD105均呈阳性表达;流式细胞术检测诱导后细胞表面标志物CD31表达率为50.5%,对照组CD31表达率为5.82%.结论 血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)体外定向诱导CFs可使其向血管内皮细胞分化,并表现其功能特征.
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褪黑素对人脂肪来源的间充质干细胞向内皮细胞分化的促进作用研究
人脂肪来源的间充质干细胞(hADSC)是人脂肪组织中不同成熟阶段的脂肪前体细胞中分化程度差的一种,具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件要求低、扩增能力强等特点,是组织工程化的优秀种子细胞.褪黑素是一种具有较强自由基清除功能的吲哚类激素.褪黑素不但对血管内皮细胞(EC)的损伤有保护作用,且可以促进EC的增殖[1-2].我们拟研究褪黑素对hADSC分化为EC过程的作用,并观察该过程中细胞内游离钙离子([Ca2+]i)的变化以及对细胞外调节激酶/ERK/MAPK信号通路的影响.
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淋巴管内皮祖细胞在淋巴管新生中的作用及其机制
淋巴管新生在胚胎发育、外伤修复、炎症转归、肿瘤转移和器官移植后排斥反应等方面起着重要作用.除淋巴管内皮细胞外,淋巴管内皮祖细胞参与淋巴管新生.淋巴管内皮祖细胞表达CD34、CD133和VEGFR-3,在趋化因子作用下由骨髓动员入外周血,继而迁入局部组织.经VEGF-C等生长因子诱导向淋巴管内皮细胞分化,参与淋巴管新生.VEGF-C/VEGFR-3信号途径在LEPCs分化和淋巴管新生方面起着关键调控作用,故VEGF-C和VEGFR-3可作为基因治疗的靶点,调节淋巴管内皮细胞向内皮细胞分化,从而促进或抑制淋巴管新生.阐明内皮祖细胞在淋巴新生方面的作用机制对于探讨肿瘤淋巴转移和器官移植后存活等具有重要意义.
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内皮祖细胞调控分子及机制研究进展
内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是内皮细胞的前体细胞.Asahara等[1]于1997年首先从外周血中分离出CD34+/VEGFR2+的血管EPCs,它具有向内皮细胞分化的潜能.研究结果表明,EPCs是一群主要来源于胚胎发育阶段的中胚层和出生后的骨髓、主要存在于胎肝和脐带血以及成人骨髓和外周循环血中的、能够分化为内皮细胞的多潜能细胞[2].
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试题与答案
1.下列眼部组织发育来源不是中胚叶的是:A.血管;B.巩膜;C.睫状体上皮;D.脉络膜.2.下列关于角膜发育的说法不正确的是:A.胚胎6周末,前半中胚叶组织形成角膜基质层和内皮细胞层;B.胚胎6周末,角膜上皮层已形成;C.胚胎3个月,基质层前部细纤维形成前弹力层;D.胚胎2个月,内皮细胞分化形成后弹力层.
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大鼠骨髓间充质干细胞内皮分化后诱导同种异体白细胞毒作用
目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)内皮分化前后对同种异体白细胞的耐受能力.方法 体外分离培养Wistar大鼠骨髓MSCs,传代扩增,使用含50 ng/ml VEGF和2% FBS的内皮分化诱导培养液诱导分化7d,倒置相差显微镜观察细胞形态,并免疫组化染色方法鉴定内皮细胞特有标记物vWF和FLK-1.通过混合白细胞试验,将MSCs或内皮样分化后的d-MSCs与同种异体Lewis大鼠外周血白细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)共同培养3d,检测实验组(+PBLs)和对照组(未加PBLs)上清液中LDH释放量以评价免疫反应程度.结果 诱导分化后的d-MSCs细胞形态学上与未分化的MSCs没有明显差异,经免疫组化染色显示d-MSCs表达vWF和FLK-1;MSCs实验组与对照组释放LDH量无统计学差异(P>0.05),d-MSCs实验组与对照组释放LDH量有显著性差异(P<0.05).结论 向内皮细胞分化的d-MSCs诱导了同种异体白细胞毒作用.