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葱白提取物预处理对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤和心肌细胞内游离钙浓度的影响
目的:探讨葱白提取物(FOB)抗大鼠离体心脏缺血再灌注(I/R)损伤和减少心肌细胞内Ca~(2+)的增加.方法:利用Langendorff心脏灌流系统建立大鼠离体心脏I/R模型,采用激光扫描共聚焦显微镜,借用Flno-3/AM荧光染色技术观察心肌细胞内Ca~(2+)强度.结果:①FOB对大鼠离体心脏I/R损伤具有明显的保护作用,随FOB剂量的增加,使左室发展压(LVDP)的恢复更加接近缺血之前的水平,再灌注痉挛度更加减轻.心脏从缺血后恢复跳动更迅速,心律失常的发生越来越少,与I/R组相比,100g/L FOB使LVDP的恢复从(20.3±2.8)%增加到(94.8±6.4)%(P<0.01),再灌注痉挛度从(89.2±9.7)mmHg减轻为(10.2±3.1)mmHg(P<0.01).②FOB使I/R损伤后心室肌细胞内Ca~(2+)染色荧光强度明显减少,随着FOB浓度增高,减少细胞内Ca~(2+)的作用更加强烈.与I/R组相比.100g/L的FOB使心肌细胞内Ca~(2+)染色荧光强度从(144.8 ±16.4)减少到了(50.8±11.61)(P<0.01),表明FOB具有减少I/R中细胞内钙超载作用.结论:FOB能抗大鼠离体心脏I/R损伤,可能原因是FOB减轻I/R后心肌细胞内游离钙浓度的增加.
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维拉帕米对大鼠胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度的影响及对胰腺细胞保护作用的研究
目的对缺氧再复氧引起胰腺腺泡细胞损伤的机制及维拉帕米的保护作用进行研究.方法通过对离体胰腺腺泡细胞给予缺氧再复氧处理,观察不同阶段胰腺腺泡细胞的存活率,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的变化.同时应用显微荧光分光光度计和图象分析系统检测被荧光标记物标记的细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的变化.结果对照组4 h细胞存活率为78.09%,缺氧组4 h细胞存活率54.50%(P<0.05),缺氧3 h再复氧1 h细胞存活率为35.90%(P<0.01),缺氧3 h再复氧1 h,细胞内[Ca]i较对照组明显升高(P<0.01).缺氧再复氧组MDA含量较对照组明显增多(P<0.01),且高于缺氧组(P<0.05).用药组细胞存活单比非用药组明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05),细胞内[Ca2+]i;含量明显减少(P<0.05).结论缺氧再复氧可引起大鼠胰腺腺泡细胞明显损伤,细胞死亡率上升.比单纯缺氧造成的急性损伤更为严重.脂质过氧化反应的增加和细胞内[CA2+]i超载是胰腺腺泡细胞损伤和死亡的重要原因.维拉帕米可以减少腺泡细胞脂质过氧化反应并减少细胞内[Ca2+]i超载.
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水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞内游离钙离子的影响
目的 观察水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)内游离钙离子(Intracellular liber calcium ion,[Ca2+]i)浓度的影响.方法 利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,采用双波长荧光分光光度计测量法测定视网膜色素上皮细胞内[Ca2+]i浓度.结果 空白组(A)133.4517±13.17789、凝血酶组(A1)192.2037±4.54292、水蛭组(A2)96.9935±8.80148、水蛭和凝血酶同时加组(A3)142.0867±26.47195、先加水蛭后加凝血酶组(A4)162.7284±29.13950、先加凝血酶后加水蛭组(A5)130.4810±20.48673.结论 水蛭提取液能使RPE细胞内游离Ca2+浓度下降,为进一步深入研究水蛭提取液抑制RPE细胞增殖的作用机制,防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)提供了实验室依据.
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槲芪散及槲寄生提取物对肝癌细胞内游离钙离子浓度的影响
目的 探讨方剂槲芪散及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其对细胞内游离钙离子浓度的影响.方法 采用MTT法测定槲芪散对细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度.结果 槲芪散及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增生的作用,高剂量组除了槲芪散和槲寄生总碱48 h时间点外,OA值均较对照组明显降低(P<0.001),呈现出时间-剂量依赖性;经药物作用48 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期细胞和G2期细胞比例降低,槲芪散组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,3者均使细胞凋亡增加;加入不同浓度的槲芪散、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余2组未见明显下降趋势.结论 槲芪散、槲寄生多糖及总碱均能抑制肿瘤细胞增生,促进细胞凋亡,且这3种药物引起胞内钙超载可能是诱导HepG2凋亡的机制之一.
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植物雌激素α-玉米赤霉醇抑制(-)BayK8644诱发的兔主动脉平滑肌细胞胞内游离钙离子浓度的升高
目的探讨植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-Zearalanol,α-ZAL)对电压依赖型钙离子激活剂(-)BayK8644所诱导的兔主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth musele cells,VSMCs)胞内游离钙离子浓度[Ca2+]i的影响.
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吸烟与温石棉单独及联合作用对人胚肺细胞内[Ca2+]i的影响
目的 研究香烟烟雾溶液(CSS)与温石棉混悬液(CH)单独及联合作用对人胚肺(HEL)细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响. 方法 体外培养的HEL细胞用Fluo-3/AM标记细胞内Ca2+,用不同浓度CSS和CH作用1 h, 荧光分光光度计测定细胞内[Ca2+]i. 结果 1.25×10-4、2.50×10-4、5.00×10-4支/ml CSS单独作用于HEL 细胞1 h,可使[Ca2+]i分别升高50.4%、75.4%和109.3%;20、40、80 μg/ml C H单独作用于HEL细胞1 h,可使[Ca2+]i分别升高3.0%、53.1%和116.7%.C SS及CH单独作用均具有明显的剂量-效应关系(前者r=0.963,P=0.037;后者r= 0.976,P=0.024);当1.25×10-4支/ml CSS与40 μg/ml CH联合作用、2 .50×10 -4支/ml CSS与20 μg/ml CH联合作用时均可协同增加[Ca2+]i. 结论 CSS与CH可在诱导细胞信号转导方面发挥协同作用.
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Na+/Ca2+交换抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者肺泡巨噬细胞功能的影响
目的 观察Na+/Ca2+交换抑制剂Benzamil对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺泡巨噬细胞(AM)胞浆中游离钙离子([Ca2+]i)浓度及其对生成肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)的影响.方法 采用支气管肺泡灌洗、细胞培养和荧光指示剂的方法,测定36例COPD稳定期患者及36例健康体检者AM内[Ca2+]i浓度及其生成的TNF-α和MDA含量.结果 ①COPD组患者AM内[Ca2+]i[(68.26±7.24)nmol/L]、TNF-α[(5.74±0.42)ng/L]和MDA[(3.77±0.61)μg/L]水平均较健康对照组[分别为(60.61±6.26)nmol/L、(2.06±0.20)ng/L、(1.91±0.19)μg/L]明显增高(P均＜0.01);②给予缺氧后,COPD组AM内[Ca2+]i浓度[(168.34±17.58)nmol/L]、TNF-α[(9.67±1.01)ng/L]和MDA[(11.21±1.01)μg/L]水平均较刺激前增高(P均＜0.01);③先加Benzamil孵育AM再缺氧,可使胞浆内[Ca 2+]i浓度[(129.21±14.33)nmol/L]、TNF-α[(6.78±0.52)ng/L]和MDA[(8.47±0.79)μg/L]水平均较单纯缺氧时明显减少(P均＜0.01).结论 Benzamil可抑制由缺氧引起AM内[Ca2+]i浓度增高及其产生的TNF-α、MDA含量;提示通过调节AM激活可抑制TNF-α、MDA的分泌.
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褪黑素对人脂肪来源的间充质干细胞向内皮细胞分化的促进作用研究
人脂肪来源的间充质干细胞(hADSC)是人脂肪组织中不同成熟阶段的脂肪前体细胞中分化程度差的一种,具有生物学特性稳定、来源充足、体外培养条件要求低、扩增能力强等特点,是组织工程化的优秀种子细胞.褪黑素是一种具有较强自由基清除功能的吲哚类激素.褪黑素不但对血管内皮细胞(EC)的损伤有保护作用,且可以促进EC的增殖[1-2].我们拟研究褪黑素对hADSC分化为EC过程的作用,并观察该过程中细胞内游离钙离子([Ca2+]i)的变化以及对细胞外调节激酶/ERK/MAPK信号通路的影响.
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不同局麻药对新生大鼠原代心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响
布比卡因快速入血或剂量过大可产生心肌毒性,甚至导致循环衰竭和心跳骤停,且药物复苏和心脏起搏成功率较低[1].左旋布比卡因、罗哌卡因与布比卡因相比麻醉效果相似、心脏毒性较小[1-3].
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骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度变化的研究
目的 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后基因方面及Ca2+浓度的变化.方法 分离纯化SD大鼠MSCs进行传代培养,传至第5代时,按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,采用免疫组化和Realtime PCR技术检测诱导前后GAP-43、NSE、NF和Nestin 的蛋白和mRNA表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化.结果 诱导后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高(P<0.05),但GAP-43、NSE、NF和Nestin基因表达改变不显著(P>0.05),更换诱导液后,细胞内荧光强度逐渐增加,到100s 达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前.结论 MSCs诱导分化为神经元样细胞后GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平均有增高,但基因表达改变不显著,说明Woodbury经典诱导方案可能为转录后水平即蛋白水平的调控,游离钙离子可能对诱导分化有促进作用.
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金雀异黄素对骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞前后蛋白和Ca2+浓度变化的研究
目的 探讨不同浓度金雀异黄素对骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)按照Woodbury经典诱导方案将其诱导分化为神经元样细胞前后蛋白和细胞内游离Ca2+浓度的变化.方法 分离纯化SD大鼠MSCs进行传代培养,传至第5代时,待细胞融汇成致密单层后,加入不同浓度金雀异黄素(0、25、50、75和100 μmol/L)培养24 h后,按照Woodbury经典诱导方案进行诱导,采用免疫组化技术检测诱导前后GAP-43、NSE、NF和Nestin 的蛋白表达的变化,采用激光扫描共聚焦显微镜检测诱导前后细胞内游离钙离子浓度的变化.结果 随着金雀异黄素浓度的增加,诱导后各组GAP-43、NSE、NF和Nestin蛋白表达水平逐渐增高.更换诱导液后,各组细胞内荧光强度逐渐增加,到100 s达高峰值,其后逐渐减弱,但20 min 时细胞荧光强度仍高于诱导前,但是随着金雀异黄素浓度的增加,细胞内游离Ca2+浓度呈现浓度依赖性下降.结论 金雀异黄素能够促进MSCs诱导分化为神经元样细胞.游离Ca2+在诱导过程中可能不起关键性作用.
关键词： 骨髓间充质干细胞 神经元样细胞 免疫组化 激光扫描共聚焦显微镜 细胞内游离钙离子 -
葱白提取物抗心肌缺血再灌注损伤及其机制研究
目的 观察葱白提取物(FOB)对缺血再灌注(I/R)心功能及细胞内游离Ca2+的影响,探讨FOB对I/R损伤的保护及其可能机制.方法 利用Langendorff系统建立大鼠I/R心脏模型并观察心功能变化;采用激光扫描共聚焦显微镜,借用Fluo-3/AM荧光染色技术观察心肌细胞内Ca2+强度.结果 FOB能明显保护I/R造成的心肌损伤,并呈剂量依赖性.随着FOB剂量增加,心脏左室发展压、左室舒张末压、左室大收缩速率、冠脉血流量都逐渐增加,左室大舒张速率逐渐减少;心脏痉挛度逐渐减弱,心律失常的发生越来越少.FOB可使I/R后心肌细胞内Ca2+荧光强度明显减少,并随浓度增高.结论 FOB可显著改善I/R心肌的舒缩功能,其机制可能是FOB减轻I/R心肌细胞内游离钙浓度的增加.
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用Fura-2双波长荧光法测定低剂量电离辐射对小鼠脾细胞游离钙的影响
目的:探讨低剂量电离辐射免疫增强效应的机理.方法:采用Fura-2/AM双波长荧光测定法研究了低剂量电离辐射全身照射后小鼠脾T淋巴细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)对次佳浓度Con A(5 mg/L)反应性的变化.结果:静息状态下的小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子浓度为95.0±14.0 nmol/L,ConA可使小鼠脾T淋巴细胞内游离钙离子浓度增加69.4±7.6 nmol/L,上升至峰值时间为79.2 s.75、100和200 mGy全身照射后24 h,Con A诱导的小鼠脾T淋巴细胞内游离钙离子动员明显高于假照射组(P<0.01).结论:低剂量电离辐射的免疫兴奋效应与其增强淋巴细胞内[Ca2+]i动员等信息传递过程有关.
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大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究
目的:观察大鼠脊髓匀浆上清诱导骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)形成的神经元样细胞形态特征.方法:通过贴壁法培养分离大鼠骨髓MSCs,体外扩增纯化后加入正常大鼠脊髓匀浆上清诱导72h,倒置显微镜下观察诱导前后细胞的形态结构.激光共聚焦显微镜观测钙离子细胞形态和荧光强度变化,免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的表型特征.结果:倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,核居中,有1-2个核仁,诱导后细胞呈神经元样,细胞伸出较长的轴突样和树突样突起.免疫细胞化学法显示NSE(神经元特异性烯醇化酶)、NF(神经丝蛋白)阳性,GFAP(神经胶质细胞酸性蛋白)阴性.共聚焦显微镜扫描脊髓匀浆上清诱导前细胞形态呈细长的梭形,细胞核不明显,胞体染色强,突起染色弱,荧光像素值低;诱导后,细胞呈现神经元样形态,胞体大,有多个突起,胞体及各突起染色强,荧光像素值高.结论:大鼠脊髓匀浆上清液可在体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞.
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一种中药单体小复方对变应性鼻炎模型小鼠的免疫调节作用
目的:探讨3种中药单体淫羊藿苷、黄芩苷、黄芪甲苷经优化配比组成的小复方对变应性鼻炎模型小鼠的免疫调节作用.方法:采用卵清蛋白腹腔注射与滴鼻结合的方法建立变应性鼻炎小鼠模型,分离小鼠脾淋巴细胞后体外培养,并将细胞分为空白对照组、刀豆素A组、复方组3组,在不同时间点运用细胞增殖-毒性检测试剂盒连续观察各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期变化,荧光定量分析仪结合荧光探针Fluo-3检测细胞内游离钙离子浓度变化.结果:中药单体小复方可以有效抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎小鼠脾淋巴细胞增殖(P＜0.01),且呈现出一定的时效关系,抑制率随时间的延长而增强,在48 h达大值.流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化发现,刀豆素A可以通过降低G0/G1期百分比,升高S期与G2/M期的百分比而促进细胞进入分裂期,复方组与刀豆素A组相比,则在4个时间点均可以升高G0/G1期比例,并降低S期与G2/M期的比例,作用在24 h显著(P＜0.05或P＜0.01).荧光定量分析仪检测发现,前24 h,刀豆素A诱导后的淋巴细胞荧光强度随时间延长而逐渐增强,而复方组可以明显抑制刀豆素A导致的荧光强度升高,降低细胞内游离钙离子浓度(P＜0.01).结论:中药单体小复方可以抑制刀豆素A诱导的变应性鼻炎模型小鼠脾淋巴细胞增殖,其作用机制可能为通过降低细胞内游离钙离子浓度,从而抑制细胞由G0/G1期进入S和G2/M期.
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钙离子通道阻滞剂影响胰岛功能吗?
葡萄糖是体内调节胰岛素分泌的主要因子,其机制主要是通过调节胰岛β细胞的代谢活动,使胞浆的ATP/ADP比率增加,导致细胞ATP敏感的钾通道(KATP)关闭,细胞膜去极化,电压依赖性钙通道(主要是L型钙通道)开放,钙离子内流,细胞内游离钙离子浓度升高,刺激囊泡内胰岛素放.因此,β细胞属于电兴奋性细胞,β细胞膜ATP依赖的钾通道与L型钙通道是影响胰岛素分泌的重要离子通道.临床上常用的磺脲类降糖药物其主要作用机制就是作用于β细胞膜ATP依赖的钾通道,促其关闭,细胞膜去极化,开放钙通道,从而促进葡萄糖刺激胰岛素释放.
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依托咪酯对过氧化氢损伤PC12细胞株的保护作用
目的 研究依托咪酯对过氧化氢损伤神经元样嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)的游离Ca2+作用.方法 PC12细胞株接种于6孔细胞培养板,随机分为损伤组(I组)和依托咪酯3 μmol/L组(E1组)、6 μmol/L组(E2组)和15 μmol/L组(E3组).分别加入含标记Ca2+ 的荧光染色剂Fluo3 10 μmol/L的培养基,37 ℃孵育30 min,置入激光共聚焦显微镜扫描仪连续扫描,并于开始连续扫描2次后加入100 μmol/L H2O2,动态观察各组细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.结果 I组加入H2O2后,90%的细胞立即有反应,细胞[Ca2+]i荧光密度即开始增高(P<0.05),并在10 s后呈现明显变化(P<0.01), 80 s达到峰值并呈持续稳定状态.依托咪酯各浓度组在加入H2O2后约10%细胞有反应,但其细胞[Ca2+]i荧光密度呈现平稳波动.E1和E2组在50 s后,细胞[Ca2+]i荧光密度开始下降(P<0.05),但不呈继续降低趋势.结论 依托咪酯通过抑制H2O2损伤引起的神经细胞内[Ca2+]i持续增高,而发挥其神经保护作用.
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Fura-2/AM荧光法测定日本血吸虫培养细胞内游离钙离子浓度
目的研究用钙荧光探剂(Fura-2/AM)检测静息状态下日本血吸虫培养细胞内的游离钙离子浓度([Ca2+]i),以及β-巯基乙醇对培养细胞[Ca2+]i的影响.方法将18 d虫龄的日本血吸虫童虫制成细胞悬液,贴壁法接种于30 ml培养瓶中,培养液为RPMI-1640含20%小牛血清及常量抗生素.在培养的0-3d,制备日本血吸虫细胞悬液,采用Fura-2/AM钙荧光探剂测定正常静息状态下及加入β-巯基乙醇后日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i.结果正常静息状态下,培养0 d的日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i为188.2 nmol/L;培养1-3 d的[Ca2+]i两两比较差异无显著性(P＞0.05),它们的平均值为(187.0±10.7)nmol/L,与培养0d的[Ca2+]i比较,差异也无显著性(P＞0.05).β-巯基乙醇可使日本血吸虫培养细胞内[Ca2+]i明显升高(P＜0.01),并随浓度的增加而升高.结论培养1-3 d,静息状态下日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i比较稳定,β-巯基乙醇能影响日本血吸虫培养细胞内的[Ca2+]i.
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人urotensinⅡ对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的保护作用及机制
目的:研究人urotensinⅡ(human urotensin Ⅱ,hUⅡ)对大鼠心肌细胞缺氧-再给氧损伤的作用及机制.方法:将培养的新生大鼠心肌细胞缺氧3h后再给氧3h造成细胞缺氧再给氧损伤(A/R)模型,用台盼蓝染色和MTT染色法分别检测细胞存活率和细胞活性,测定细胞培养上清液中肌酸激酶(CK)和一氧化氮合酶(NOS)活性及一氧化氮(NO)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)含量,用激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2+荧光强度.结果:在1×10-10.5～1×10-9.5 mol/L范围内,hUⅡ明显地抑制A/R损伤引起的大鼠心肌细胞存活率和细胞活性的下降、CK活性和cTnI含量的增高、NOS活性和NO含量的降低及心肌细胞内游离Ca2+含量的增高,但1×10-9、1×10-8.5、1×10-8mol/L hUⅡ却无上述抑制作用.结论:hUⅡ在低浓度时,对大鼠心肌细胞缺氧性损伤有保护作用,其机制可能与促进NO合成和降低细胞内游离Ca2+有关.
关键词： urotensinⅡ 心肌细胞 缺氧再给氧损伤 细胞内游离钙离子 一氧化氮 -
Urocortin致心肌细胞肥大作用由细胞内游离钙离子升高诱导
目的 探讨Urocortin(UCN)致心肌细胞肥大作用与细胞内游离钙离子([Ca2+]i)之间的关系.方法 使用UCN 0.1 μmol·L-1诱导体外培养乳鼠心肌细胞肥大模型,通过计算机图像分析系统检测心肌细胞体积,荧光显微镜法测定细胞[Ca2+]i,Lowry法测定总蛋白水平,RT-PCR法测定ANP mRNA水平.结果 与对照组相比UCN处理组细胞[Ca2+]i明显提高,细胞体积明显增大,所含总蛋白含量增加明显,ANP mRNA水平明显提高,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 UCN能引起心肌细胞肥大,其过程与其引起的[Ca2+]i提高有一定关系.
