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Urocortin的心血管作用
Urocortin(Ucn)是一含40个氨基酸的多肽,属于促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)家族的新成员.它不仅在脑组织中表达,而且也存在于外周组织,特别是在心脏中高表达.Ucn有高效的心血管作用,它可以降血压、增强心脏收缩力,还可提高心肌细胞对缺血-再灌注损伤的抵抗力.本文集中讨论了Ucn的心血管作用及其作用机制的研究进展.
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Urocortin对大鼠和兔离体心肌组织的选择性正性肌力效应
目的研究urocortin对心脏的作用.方法采用大鼠及兔离体右心房肌,左(大鼠),右(兔)心室乳头肌和大鼠离体右心室肌条标本,观察urocortin对心肌收缩力及心率的影响;采用细胞内微电极技术观察urocortin对大鼠离体乳头肌和左心房肌细胞动作电位的影响.结果 Urocortin 1～30 nmol·L-1浓度依赖性地增强大鼠右心房心肌收缩力,urocortin 10和30 nmol·L-1使收缩力分别增加(38±16)%和(61±17)%;urocortin的正性肌力作用明显强于同等浓度去甲肾上腺素的正性肌力作用.Urocortin不影响大鼠离体右心房的心率,左室乳头肌和右心室肌条的收缩力,对兔离体右心房和右室乳头肌亦无明显作用;β受体激动剂对上述标本则产生明显的正性频率作用和正性肌力作用.Urocortin 30～300 nmol·L-1明显升高大鼠左心室乳头肌的动作电位幅值和超射值;urocortin 30～100 nmol·L-1明显升高大鼠左心房肌的动作电位幅值和超射值.结论 Urocortin对大鼠离体心房具有很强的正性肌力作用.Urocortin的正性肌力作用具有明显的种属差异和组织学差异.
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Urocortin在人类妊娠中的定性研究
目的 Urocortin是新发现的促肾上腺皮质激素释放激素（corticotropin releasing hormone，CRH）肽类家族在人类的一个新成员，体外实验已经证实了urocortin对人类的胎儿-胎盘循环有强大的扩血管作用。本研究旨在发现urocortin的产生、分布与分泌情况，以证实urocortin可能在妊娠中由局部组织产生并由此调节子宫-胎盘的血管张力。方法我们用免疫组化的方法检测了足月妊娠自发临产及自发未临产的子宫、胎盘、胎膜、脐带组织中的urocortin分布。用细胞培养免疫印迹法检测了胎膜细胞分泌urocortin的情况。用放射免疫的方法来检测了孕期母体外周血液循环中是否含有urocortin，并且用凝胶层析法检测从孕妇血浆中提取测得的urocortin是否与人工合成的urocortin标准品一致。结果具有免疫活性的urocortin分布在蜕膜的间质细胞、滋养层细胞、羊膜上皮细胞和子宫平滑肌内的血管平滑肌细胞，自发临产及自发未临产者无明显差别，其中urocortin在蜕膜的分布多提示蜕膜可能是产生urocortin的主要部位。培养的蜕膜细胞中有40%含有urocortin，并且其中34%有基础状况下的分泌。从孕16周起孕妇的外周血中可测得urocortin但是其浓度并不随孕周的增加而改变。从孕妇血浆中提取测得的urocortin与人工合成的urocortin标准品具有相同的免疫活性及分子量。结论这一实验证实了在人类妊娠过程中urocortin由蜕膜细胞产生并分泌，在孕妇血浆中可测得urocortin，为urocortin由妊娠组织局部产生并调节子宫-胎盘血管张力的学说提供了实验基础。
关键词： Urocortin 促肾上腺皮质激素释放激素 妊娠 胎盘 胎膜 -
Urocortin与妊娠
Urocortin是新近在哺乳动物中发现的促肾上腺皮质激素释放激素肽类家族的一员,人类胎盘及其他妊娠附属物均可合成.其具有引起垂体及胎盘局部促肾上腺皮质激素的分泌,扩张胎盘局部血管,增强子宫肌收缩力,增加胎盘局部前列腺素释放及抑制热损伤引起的水肿等作用.综述Urocortin与妊娠相关的内容.
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侧脑室注射urocortin对胃肠功能和血浆ghrelin水平的影响及其介导受体
目的 探讨urocortin(UCN)对胃肠功能和血浆ghrelin水平的影响及参与介导的受体.方法 运用免疫荧光法和ELISA法,观察8周龄SD雄性大鼠侧脑室单纯注射UCN或同时注射UCN和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)受体拮抗剂后,大鼠摄食量、胃排空速度、血浆酰化和非酰化ghrelin水平的变化.结果 ①侧脑室注射UCN后,观察的各项指标均显著降低(P＜0.05).②侧脑室同时注射UCN+CRF-1型受体拮抗剂,各项指标与单纯注射UCN相比,无明显差异(P＞0.05)；侧脑室同时注射UCN+CRF-2型受体拮抗剂,各项指标与单纯注射UCN相比,均有明显增加(P＜0.05).结论 推测UCN经侧脑室注射后能与CRF-2型受体结合,从而抑制胃肠功能并降低血浆酰化和非酰化ghrelin水平.
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Urocortin致大鼠心肌细胞肥大由PKA信号通路介导
目的 通过观察PKA拮抗剂H-89和CRF受体拮抗剂Astressin抑制UCN诱导乳大鼠心肌细胞肥厚的作用,研究UCN诱导的大鼠心肌细胞肥厚的信号转导机制.方法 以体外培养的乳大鼠心肌细胞为模型,应用UCN 0.1μmol·L-1诱导心肌肥大,观察H-89 0.1 μmol·L-1和Astressin 1 μmol·L-1的作用,探讨UCN 0.1μmol·L-1对心肌肥厚的作用机制.用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;[3H]亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白的合成;用Western蛋白印迹法测定ANP表达.结果 UCN 0.1 μmol·L-1使心肌细胞体积、蛋白合成和ANP表达明显增加,H-89 0.1μmol·L-1和Astressin 1μmol·L-1抑制UCN诱导的心肌肥大.结论 Urocortin可能通过CRF-R2并通过PKA信号通路诱导乳大鼠心肌细胞肥大.
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Urocortin抑制心肌缺血再灌注诱导的自噬
目的 研究uroeortin (UCN)对缺血再灌注诱导的心肌细胞自噬的影响,探讨UCN的心肌保护机制.方法 构建大鼠在体心脏缺血再灌注损伤和离体新生大鼠心肌细胞的缺氧复氧模型,进行缺血/缺氧1h再灌注/复氧2h的损伤,在缺血/缺氧前1h给予UCN预处理；在再灌注/复氧2h后观察UCN对缺血再灌注/缺氧复氧诱导的心肌损伤、细胞自噬和自噬相关基因表达的影响.结果 UCN预处理可以显著降低缺血再灌注损伤导致的心肌损害,使梗死面积降低,血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)降低；增加缺氧复氧离体心肌细胞活力、减少培养上清的LDH水平.与上述心肌保护作用相伴随的是UCN预处理还能抑制缺氧复氧导致的心肌细胞自噬,使LC3BⅡ/LC3BI的比值显著降低,并且抑制自噬相关基因Beclin1、Bni p3的mRNA表达.结论 UCN可以抑制缺血再灌注诱导的心肌细胞自噬,可能在抗缺血再灌注损伤中起重要作用.
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检测孕妇血浆中的urocortin
目的:研究urocortin(促肾上腺皮质激素释放激素肽类家族新成员)是否存在于孕妇血循环中及其含量,以证实urocortin是否能在妊娠中产生并由此调节子宫-胎盘的血管张力.方法:用放射免疫测定法从受孕16周起检测孕妇血浆中是否含有urocortin,并用凝胶层析法检测从孕妇血浆中提取的urocortin是否与人工合成的urocortin标准品一致.结果:从受孕16周起孕妇的血浆中即可测得urocortin,但其浓度并不随孕周的增加而改变.孕妇血浆中的urocortin与人工合成的标准品具有相同的相对分子质量和免疫活性.结论:实验证实在人类妊娠过程中,urocortin可从孕妇血浆中检测出,为urocortin调节子宫-胎盘血管张力的学说提供了实验依据.
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3H-thymidine渗入法测定Urocortin对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨Urocortin(UCN)对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.方法分离、培养大鼠血管平滑肌细胞,分别加入不同浓度的UCN以及UCN+Astressin, UCN+Glybenclamide培养,采用3H-thymidine掺入法,观察不同浓度UCN对血管平滑肌细胞增殖的影响,及其相关作用机制.结果随着Urocortin浓度的增高, VSMC对3H-thymidine摄取率呈下降趋势,而该作用不受Astressin或Glybenclamide 的影响.结论 Urocortin具有抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用,其作用不是通过CRF受体或KATP通道.
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Urocortin抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖活力的机制研究
目的:探讨Urocortin抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖活力的机制.方法:分离和培养大鼠血管平滑肌细胞,并加入不同浓度的Urocortin以及其他药物培养,运用MTT法考察Urocortin对血管平滑肌细胞增殖活力的抑制作用及相关机制.结果:Urocortin能够浓度依赖性地降低大鼠血管平滑肌细胞增殖活力,且能显著抑制L-型钙通道激动剂Bay K8644对细胞活力的增强作用.结论:Urocortin可能通过阻断L-型钙通道而浓度依赖性地抑制血管平滑肌细胞的增殖活力.
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urocortin促进心血管内植入材料表面内皮细胞生长的研究
目的:探讨urocortin促进心血管内植入材料表面内皮细胞黏附生长的作用及其机制.方法:将聚四氟乙烯置入培养的内皮细胞中,应用激光共聚焦显微镜检测聚四氟乙烯表面生长的细胞内反映细胞黏附及增殖功能的生物活性分子纤维连接蛋白、纽蛋白、Ki-67的表达程度.结果:加urocortin组的聚四氟乙烯表面生长的内皮细胞内反映细胞增殖功能的生物活性分子Ki-67的表达程度明显增加,并且细胞数量有增加趋势.结论:urocortin能够促进内皮细胞在心血管内植入材料表面的生长,这种作用与urocortin增强了内皮细胞的增殖能力有关.
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Urocortin致心肌细胞肥大作用由细胞内游离钙离子升高诱导
目的 探讨Urocortin(UCN)致心肌细胞肥大作用与细胞内游离钙离子([Ca2+]i)之间的关系.方法 使用UCN 0.1 μmol·L-1诱导体外培养乳鼠心肌细胞肥大模型,通过计算机图像分析系统检测心肌细胞体积,荧光显微镜法测定细胞[Ca2+]i,Lowry法测定总蛋白水平,RT-PCR法测定ANP mRNA水平.结果 与对照组相比UCN处理组细胞[Ca2+]i明显提高,细胞体积明显增大,所含总蛋白含量增加明显,ANP mRNA水平明显提高,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 UCN能引起心肌细胞肥大,其过程与其引起的[Ca2+]i提高有一定关系.
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Urocortin在胎盘中的分泌与表达
目的:研究Urocortin在胎盘组织产生、分布与分泌的情况,以证实Urocortin可能由妊娠组织产生并调节子宫-胎盘局部的血管张力.方法:用免疫组化法检测足月妊娠临产及未临产的胎盘、胎膜组织以及剖宫产和非妊娠子宫肌层血管平滑肌细胞中的Urocortin分布.并用细胞培养免疫印迹法检测绒毛膜-蜕膜细胞分泌Urocortin的情况.结果:具有免疫活性的Urocortin分布在蜕膜的间质细胞、滋养层细胞、羊膜上皮细胞和子宫平滑肌内的血管平滑肌细胞;非妊娠子宫血管平滑肌细胞的Urocortin免疫活性明显低于足月妊娠之子宫.培养的蜕膜细胞中48%含有Urocortin,其中41%有基础状况下的分泌.结论:在人类妊娠过程中Urocortin由蜕膜细胞产生并分泌,为Urocortin由妊娠组织产生并局部调节子宫-胎盘血管张力的学说提供了实验基础.
关键词： Urocortin 促肾上腺皮质素释放激素 妊娠 胎盘 胎膜 -
Urocortin调控Bcl-2家族与大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡
目的:观察神经肽Urocortin对大鼠缺氧/复氧心肌细胞Bcl-2及相关基因mRNA表达和细胞凋亡的影响.方法:培养新生大鼠的心肌细胞并缺氧/复氧处理,用RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Bcl-xL、Bad mRNA表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:Urocortin治疗组Bcl-2的mRNA表达与缺氧/复氧组比较明显增加(P<0.05),Bax的表达明显下降(P<0.05),Bcl-xL、Bad mRNA表达无明显改变(P>0.05).Urocortin治疗组凋亡细胞率与缺氧/复氧组比较减少(P<0.05).结论:Urocortin调节心肌细胞Bcl-2家族基因转录:下凋促凋亡基因Bax表达,上调抑凋亡基因Bcl-2使Bcl-2/Bax比值增加.这可能是Urocortin抗大鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡的机制之一.
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Urocortin在子宫内膜异位症患者组织及血清中的表达水平及临床意义
子宫内膜异位症具有侵袭、复发等恶性行为特征,且存在激素依赖性,Urocortin (UCN)属于促肾上腺皮质激素释放激素,参与血管生成、炎症反应、凋亡及免疫活动调节等,本研究通过免疫组织化学(IHC)、酶联免疫吸附试验(ELISA)实验,探究56例内异症患者组织及血清中UCN表达水平与内异症临床因素之间的关系,结果显示内异症患者在位内膜及异位病灶中UCN的表达强度显著高于正常子宫内膜组织,且与患者疾病分期、病灶大小相关.内异症患者血清UCN水平(54.40±9.12 pg/mL)显著高于正常对照组(21.30±4.72 pg/mL).提示UCN的表达水平与内异症发生发展密切相关,可能成为内异症早期诊断及预后评估的潜在标志物.
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Urocortin--促肾上腺皮质激素释放激素肽类家族的新成员
促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH)家族是包括CRH、硬骨鱼紧张肽(urotensin)、蛙皮降压肽(sauvagine)以及新近发现的urocortin在内的一组肽类物质,这组肽类物质在分子结构和生物学活性方面都有很高的同源性.CRH是一个41氨基酸肽,由下丘脑分泌后刺激垂体前叶细胞释放促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropin,ACTH)和β-内啡肽(β-endorphin,β EP)[1].
关键词： Urocortin 促肾上腺皮质素释放激素 -
下丘脑CRF相关肽及其受体研究进展
CRF(corticotropin releasing factor)相关肽属分解代谢神经肽,包括CRF、UCN(urocortin)1、UCN2、UCN3、CRFR(corticotropin releasing factor receptor-)1、CRFR2等.越来越多的证据显示,下丘脑CRF相关肽在机体能量平衡凋节中发挥重要作用,本文就下丘脑CRF相关肽及其受体的研究进展综述如下.
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脂多糖上调CRH及其结构相关肽Ucn在大鼠腹腔巨噬细胞的表达
目的 观察促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)及其结构相关肽urocortin(Ucn)在大鼠腹腔巨噬细胞的表达及LPS对它们表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,共收集脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)处理0、1、2、4、8 h组细胞,每组含8份分别来自不同大鼠的细胞样本.收集细胞总mRNA(n=8)及总蛋白(n=6),利用RT-PCR及ELISA技术分别检测各组细胞CRH及Ucn mRNA转录水平及胞溶多肽含量.结果 RT-PCR结果显示,正常大鼠腹腔巨噬细胞中即有一定水平的CRH及Ucn mRNA,LPS刺激后二者水平均显著增高,刺激4 h二者均达峰值,约为对照组的2倍.ELISA结果显示,正常大鼠腹腔巨噬细胞即可表达CRH[(0.07±0.01)ng/107细胞]及Ucn[(1.00±0.48)ng/107细胞];LPS刺激促进了二者的表达,CRH水平在2 h达高峰[(0.30±0.07)ng/107细胞],Ucn水平在8 h达高峰[(8.68±1.25)ng/107细胞].结论 大鼠腹腔巨噬细胞同时表达CRH及Ucn,注适量LPS刺激后,两者表达水平均会显著上调,但Ucn多肽水平显著高于CRH.因此,炎症条件下的巨噬细胞可能是局部CRH家族特别是Ucn的潜在来源细胞.
关键词： 腹腔巨噬细胞 促肾上腺皮质激素释放激素 Urocortin 脂多糖 -
Urocortin对缺血大鼠心肌线粒体凋亡通路的影响
目的:研究Urocortin(UCN)对缺血大鼠心肌线粒体凋亡通路的影响,探讨其心肌保护的可能机制.方法:将24只Wistar大鼠随机分为3组,每组8只,即对照组(CON)、缺血/再灌注(I/R)组及UCN组.CON组:大鼠麻醉后,直接开胸取左心室肌作缺血前对照.I/R组:建立离体心脏Langendorff-Neely模型.灌注K-H缓冲液30 min后,于主动脉根部灌注4℃的St.Thomas-2心脏停搏液,低温下使心脏停跳30 min,复灌K-H缓冲液90 min后,取左心室肌备检.UCN组:低温下使心脏停跳30 min后,复灌含UCN的、浓度为1×10-8mol/L的K-H缓冲液90 min,取左心室肌备检.用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组心肌细胞线粒体凋亡通路的标志性蛋白细胞色素C(CytoC)从线粒体的释放.用免疫组化染色法检测各组心肌细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞的凋亡.结果:Western blot检测显示,CON组、I/R组和UCN组胞浆中CytoC的量分别为(0.56±0.05)、(1.29±0.02)和(0.88±0.07),I/R组和UCN组胞浆中CytoC的含量明显高于CON组(P<0.05);UCN组低于I/R组(P<0.05).免疫组化染色结果显示,CON组、I/R组和UCN组Bcl-2蛋白的表达量,分别为(0.077±0.05)、(0.12±0.06)、(0.2±0.05),I/R组和UCN组高于CON组(P<0.05),UCN组高于I/R 组(P<0.05).CON组、I/R组和UCN组Caspase-3蛋白的表达量,分别为(0.15±0.22)、(0.36±0.15)和(0.24±0.20).I/R组和UCN组高于CON组(P<0.05),UCN组低于I/R组(P<0.05).各组心肌细胞的凋亡指数,分别为(2.29±0.67)、(12.8±0.62)和(6.77±1.12),I/R组和UCN组高于CON组(P<0.05),UCN组低于I/R组(P<0.05).结论:UCN能够抑制细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体释放CytoC和随后Caspase-3的激活,上调Bcl-2蛋白的表达,抑制线粒体通路的细胞凋亡有关.
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Urocortin对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成作用的影响
目的:探讨urocortin对大鼠心肌成纤维细胞 (CFs) 增殖和胶原合成作用的影响.方法: 消化法培养新生Sprague-Dawley (SD)大鼠的CFs,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞分析仪(FCM)检测细胞周期,ELISA法检测Ⅰ型胶原合成,分别观察不同浓度urocortin对CFs增殖和胶原合成的影响.结果:①随着urocortin浓度的增高,CFs MTT比色法A490值呈明显的递增趋势,其中10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L组的A490值分别为0.183±0.004、0.222±0.004、0.251±0.007、0.280±0.006和0.317±0.002,均较对照组(A490值0.167±0.004)显著升高(P均<0.01).②FCM细胞周期分析结果表明,10-7mol/L urocortin作用48 h, CFs的G0/G1期细胞百分率均较对照组显著降低(P<0.01),S期细胞百分率、G2/M期细胞百分率和增殖指数则较对照组显著增高(均P<0.01). ③CFs的Ⅰ型胶原分泌随着urocortin作用浓度的增高呈明显的递增趋势,其中10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L urocortin组的Ⅰ型胶原A值分别为0.576±0.010、0.614±0.008、0.771±0.047、0.839±0.054和0.908±0.006,均较对照组(A值0.560±0.002)显著升高(P<0.01).结论: urocortin具有促进大鼠CFs增殖和胶原合成的作用.
